Темнопольный микроскоп

Темнопольная микроскопия осуществляется, в темном поле микроскопа при косом освещении — эти приемы позволяют увеличить контраст изображения вследствие образования видимой тени (свет от излучателя падает на плоскость объекта под таким углом, что его зеркальное отражение не попадает в объектив и поле зрения выглядит темным). В темпом поле можно качественно отметить неровности (сту/тени, сколы и т. д.) на поверхности объекта высотой до 1 —1,5 нм. В темном поле повышается и разрешающая способность микроскопа. [c.122]

Темнопольная микроскопия применяется для обнаружения в неокрашенных (нативных) препаратах возбудителей сифилиса, возвратного тифа, лептоспироза и других болезней, а также для изучения подвижности микроорганизмов. Однако исследование в темном поле зрения не позволяет хорошо изучить их форму и тем более внутреннее строение. Для этой цели используют специальные методы световой микроскопии. [c.9]

Микроскопия. Наиболее часто проводят темнопольную микроскопию. Перед взятием материала обследуемый не должен получать антимикробные препараты или использовать антисептики. У больного непосредственно перед исследованием берут тканевую жидкость, полученную со дна язвы (твердого шанкра), или пунктат регионарных лимфатических узлов. Желательно брать материал, не содержащий эритроцитов, посторонних клеток и детрита. Перед взятием материала поверхность шанкра протирают стерильным ватным тампоном, смоченным ИХН. Затем дно язвы слегка раздражают лопаточкой или скальпелем, выжимают тканевую жидкость пальцами в резиновой перчатке, собирают ее в капилляр пастеровской пипетки и немедленно готовят препарат раздавленной капли для исследования в темном поле. При врожденном сифилисе исследуют материал пуповины, плаценты, отделяемое из носа или кожных поражений ребенка. [c.226]

Ввиду плохого прокрашивания лептоспиры изучают в основном в нативных препаратах. Подготовленный исследуемый материал наносят на тонкое предметное стекло (не толще 1 мм) и накрывают покровным стеклом (не толще 0,2 мм). Полученный препарат раздавленной капли изучают в темнопольном микроскопе с объективами сухой системы. При микроскопии обнаруживают подвижные тонкие нити лептоспир с характерными изгибами на концах (вторичные завитки), придаю- [c.230]

Посевы инкубируют до 30 сут при 28 — 30 °С в атмосфере Oj. Лептоспиры размножаются в питательной среде, не изменяя ее внешнего вида (среда остается прозрачной в течение всего периода наблюдения). Для выявления роста лептоспир через 10 дней после посева из каждой пробирки берут материал, готовят препарат раздавленной капли и изучают в темнопольном микроскопе. Из пробирки, где обнаружен рост лептоспир, пересевают по 0,5 мл в 3 пробирки с 5 мл свежей питательной среды, которые инкубируют 7—10 дней при той же температуре. [c.231]

Серологическое исследование. Антитела в сыворотке крови больного появляются со второй недели заболевания, их титр достигает максимума на 14— 17-й день заболевания. Для выявления антител используют реакции микроагглютинации и лизиса лептоспир. Предварительно сыворотку больного 2-кратно разводят от 1 100 до 1 1600. В ряд пробирок вносят по 0,2 мл разведенной сыворотки и такое же количество живой культуры штаммов лептоспир из диагностического набора. После инкубации при 37 °С в течение 1 ч, из содержимого каждой пробирки готовят препарат раздавленной капли и изучают в темнопольном микроскопе. [c.232]

При наличии в объекте двух или нескольких типов структур можно, помещая в плоскости (см. рис.) различные диафрагмы, выделить рефлексы, соответствующие той или иной структуре и, используя принципы темнопольной микроскопии, сформировать изображение элементов только этой структуры. Это позволяет раздельно изучать наложенные друг на друга структуры или тонкие детали их строения. [c.240]

Данные темнопольной микроскопии, для интерпретации которых привлекаются среди прочих рефлексов (002) [26], действительно позволяют установить, что кристаллы не являются непрерывными, даже если они представляются таковыми морфологически. Решетка формируется из блоков, размеры которых меняются в широких пределах (рис. XI. 11). Количественный анализ указывает, что распределение блоков по размерам описывается экспоненциальной функцией. Это находится в согласии с выводами, полученными из изучения поведения фибрилл при различных температурах. Для исследованного образца среднечисловая длина составляет 600 А Тс = 106 °С), что по крайней мере по [c.252]

Простейший способ разглядеть детали клеточной структуры - наблюдать свет, рассеивающийся различными компонентами клетки. В темнопольном микроскопе лучи от осветителя направляются сбоку и при этом в линзы микроскопа попадают только рассеянные лучи. Соответственно клетка выглядит как освещенный объект на темном поле. Изображение одной и той же клетки, полученное четырьмя способами световой микроскопии, показано на рис. 4-10. [c.180]

Поскольку бактерии в водной суспензии имеют оптические свойства, сходные со свойствами воды, и их трудно наблюдать с помощью обычного микроскопа в проходящем свете, пробы лучше исследовать с использованием позитивного или негативного фазового контраста или с помощью темнопольной микроскопии. Если последние варианты недоступны, нужно опустить конденсор и уменьшить освещение, чтобы повысить контраст, даваемый обычным микроскопом. [c.55]

К сожалению, измерения длины и ширины бактерий далеко не всегда проводятся с необходимой точностью из-за неизбежных технических трудностей. Границы клеток живых бактерий, исследуемых в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе, видны не четко. При фазово-контрастной микроскопии границы клеток плохо видны из-за ореолов, которые ухудшают также видимость деталей внутреннего строения. Улучшения можно достичь, поместив микроорганизмы в среду с большим показателем преломления, что нетрудно сделать, если добавить желатину до концентрации 15—30% (вес/объем) [9]. Точную концентрацию, при которой получают наилучшие результаты, нужно определять экспериментально для каждого типа микроорганизмов и их компонентов. [c.63]

На нижней стороне чистого предметного стекла тушью чертят сетку квадратов со стороной 5 мм. Верхнюю сторону стекла стерилизуют над пламенем горелки. После охлаждения стекла его покрывают слоем вазелинового масла толщиной 0,5 мм (стерилизовать масло нет необходимости). Нагревают стеклянную трубку диаметром 4 мм в пламени и вытягивают один ее конец так, чтобы получился капилляр диаметром около 0,1 мм. На другой ее конец надевают резиновую трубку. Разводят культуру до плотности 10 —10 клеток бактерий в 1 мл среды и, сжимая резиновую трубку, насасывают суспензию в капилляр. Помещают в центр каждого квадрата каплю суспензии из капилляра под масло. Капли прилипают к стеклу и расплющиваются до диаметра 0,1—0,2 мм. Сканируют стекло с помощью фазово-контрастной или темнопольной микроскопии и определяют, в какой из капель содержится только одна клетка выделяемого микроорганизм .. Часто такую единичную клетку извлекают путем многоразового набирания и выпускания капли капиллярной пипеткой, содержащей стерильную среду. [c.324]

Движение лептоспир в темнопольном микроскопе. [c.29]

В темном поле можно увидеть мелкие органеллы, например митохондрии. В качестве объектов для наблюдения в темном поле можно использовать эпидермис луковиц лука, корневые волоски пшеницы, водоросль спирогиру и др. Метод позволяет увидеть бактерии, поэтому его применяют в микробиологии. При темнопольной микроскопии необходимо соблюдать ряд правил [c.40]

Измерение скорости электрофореза выполняли в специально сконструированной кювете, схема которой дана на рис. 12.1. Рабочую стеклянную кювету 1 в виде прямоугольного парал-лепипеда с открытыми торцами длиной 20 мм и поперечным сечением 20x0,8 мм помещали между двумя сосудами 2 также прямоугольного сечения, изготовленными из оргстекда. Толщина стенок измерительной ячейки составляла 0,2 мм, что обеспечивало надежную визуализацию микрообъектов при работе с темнопольным микроскопом. Боковые емкости 2 в месте их сочленения с кюветой имели ряд отверстий диаметром 0,5 мм эти емкости прочно закреплялись на основании 3, в котором было высверлено отверстие для вхождения темнопольного объектива 4. Б нижнюю часть емкостей 2 помещали гель агар-агара 5, приготовленный на 1 н. растворе КС1 сверху заливали 0,1 и. раствор USO4 (б) и помещали медные электроды 7. Такая установка удобна в обращении в ней обеспечена герметичность сочленения боковых емкостей с измерительной камерой и возможность тщательной очистки последней после проведения исследований. На основании данных о подвижности частиц дисперсной фазы вычисляли -потенциал по формуле Гельмгольца — Смолуховского без учета поправки на поверхностную проводимость [59]. [c.202]

Для обнаружения боррелии в крови применяют также микроскопию тушевых препаратов по Бурри и метод темнопольной микроскопии (изучают препараты толстой капли крови или сыворотки). В последнем случае видны типичные клетки боррелий, совершающие беспорядочные движения. [c.233]

Другой источник артефактов — неучет особенностей многих препаративных методов подготовки объектов для ЭМ. Для изучения аморфных полимеров был использован очень широкий набор методов, включающий приготовлепие тонких пленок из растворов, ультратонких срезов, различные методы контрастирования и травления, реплики, темнопольная микроскопия и т. д. Кроме того, исследовали большое число полимеров, отличающихся гибкостью макромолекул, различным межмоле-кулярным взаимодействием и т. п. (ПС, ПММА, ПК, стеклообразный ПЭТФ, каучуки, ПАК и т. д.). [c.26]

Особого внимания для оценки чистоты нефтепродуктов заслуживают методы дисперсионного анализа, основанные на их оптических свойствах поглощение, отражение и рассеяние света. Эти методы являются универсальными, бесконтактными, быстрыми, позволяющими исследовать труднодоступные объекты, не нарушая их исходного состояния [2, 3, 9, 39—50]. Оптические методы сводятся в основном к измерению следующих величин пропускания излучения в функции длины волны (спектральная прозрачность или мутнометрия) окраски рассеянного излучения (тиндалеметрия) отдельных отблесков рассеянного излучения (ультрамикроскопия или темнопольная микроскопия) поляризационных характеристик рассеянного излучения углового распределения рассеянного излучения (нефелометрия) уширения спектральной линии рассеянного излучения (гетеродинирование). [c.17]

Максимальное увеличение микроскопов, как иравило, не превышает в видимом обычном свете 1200Х, а в поляризованном — 700 X. Большие увеличения м. б. достигнуты при применении тонкодисперсных объектов и имлгерсиопных объективов. Др. возможность (см. выше ф-лу) заключается в уменьшении поэтому ультрафиолетовые микроскопы (требующие, однако, специальной системы регистрации) имеют существенно повышенное полезное увеличение. Третий — косвенный способ заключается в новытпенип контрастности изображения (фазовый контраст, темнопольная микроскопия и др.). [c.241]

Одним из основных преимуществ фазово-контрастной, интерференционной и темнопольной микроскопии является возможность наблюдать движение клеток в процессе митоза и миграции. Клеточные движения, как правило, совершаются очень медленно и их сложно наблюдать в реальном времени. В этом случае используют покадровую (цейтраферную) микрокшосъемку или видеозапись. Последовательные кадры при этом разделены во времени, но при воспроизведении записи с нормальной скоростью картина реальных событий ускоряется. [c.180]

Если используется обычный конденсор и масляноиммерсионный объектив, для улучшения контраста количество света нужно уменьшить апертурной диафрагмой, а конденсор опустить. Наиболее эффективный (и наиболее демонстративный) способ наблюдения за подвижными микроорганизмами при малом увеличении — это темнопольная микроскопия. Необходимые для нее специальные конденсоры доступны далеко не всем, однако вполне удовлетворительное темное поле можно получить, применив для освещения иммерсионный конденсор от фазово-контрастного микроскопа и расположенную на нужном месте фазовую пластинку наблюдения при этом ведут с помощью обычных (не фазово-контрастных) объективов с увеличением 10 X или 45 X. Иммерсионная жидкость на конденсор не наносится, а его положение, для которого характерно самое хорошее темное поле, находится экспериментальным путем. С помощью этого ухищрения оказывается возможным видеть под малым увеличением даже спирохет [c.66]

В наиболее широко используемых методах выявления бактериальных антигенов in situ применяются фракции антисывороток или антител, меченных флуоресцирующими красителями, такими, как флуоресцеин или родамин (разд. 1.4.). Связывание, которое происходит исключительно с поверхностными антигенами интактных бактерий, выявляется с помощью оптической темнопольной микроскопии с ультрафиолетовым светом, прошедшим через соответствующие светофильтры, чтобы вызвать характеристическую эмиссию флуорохрома в видимой области. Этот метод очень важен в диагностических и таксономических исследованиях, и поэтому промышленностью выпускается множество меченых антисывороток. По теории и практике этого вопроса опубликовано много трудов [83—85]. [c.125]

Сферосомы. Сферосомы (микросомы) были впервые обнаружены в 1880 г. Ганштейном. Они, как свидетельствует само название, представляют собой шаровидные тельца. На препаратах, фиксированных осмием, сферосомы имеют размеры 0,55—0,9 мкм, они хорошо окрашиваются кристалл виол етом в пурпуровый цвет, в то время как митохондрии и пластиды этим же препаратом — в бледно-сиреневый. В отличие от митохондрий сферосомы не окрашиваются янусом зеленым. Поскольку показатель преломления света у этих органелл выше, чем у цитоплазмы, они хорошо просматриваются под световым микроскопом. При темнопольной микроскопии сферосомы представляются в виде блестящих гранул, а при фазово-контрастной они кажутся черными. При извлечении из них Липидов сохраняется остов, окрашивающийся пиронином, что указывает на существование белковой стромы у сферосом. Полагают, что высокая способность сферо-сом к преломлению света обусловлена содержанием в них ароматических аминокислот (тирозина и др.). [c.44]

Техника темнопольной микроскопии. 1. Заменить обычный конленсор в микроскопе темнопольным (параболоид- или кардиоид- онденсор). [c.19]

Формально клетка в изображении представлена односвязнои областью, яркость которой будем считать большей чем у фона (в случае темнопольной микроскопии). Изображение представляет совокупность таких объектов, способных в принципе накладываться друг на друга или лежать на границе анализи руемого кадра. Поисковый алгоритм выделения объектов может предусматривать поиск объектов, выделение точек, принадлежащих к одному объекту разделение наложившихся объектов, распознавание и отбрасывание граничных объектов и т. д. [c.60]

Флуоресценцию наблюдают в темнопольном микроскопе флуоресцентной приставкой. Ядра, содержащие Т-антиген, имеют желто-зеленую окраску и темные ядрышки (рис. 8.7). Позднее (через 36—48 ч после начала инфекции) Т-антиген локализуется уже не только в ядрах, но и в цитоплазматических включениях. В качестве контроля исследуют неинфициро-ванные культуры, обработанные флуоресцирующей антисывороткой, для исключения неспецифической флуоресценции. При подсчете положительных клеток учитываются только те, в которых четко видны окрашенные ядра. Мертвые клетки обычно дают высокий уровень неспецифической флуоресценции. [c.244]

Темнопольную микроскопию в проходящем свете используют для получения изображения прозрачных объектов, плохо видимых при наблюдении в светлом поле, например живых клеток. Вместо обычного здесь применяют те.мнопольный конденсор ОИ-13, освещающий объект сбоку. Прямые лучи в объектив не по1падают, фон получается темным, а яркость объекта достигается за счет рассеяния света от отдельных его частиц. [c.40]

Прямая микроскопия применялась также для подсчета железобактерий в пробах колодезной воды [182]. Высушенные и сделанные прозрачными мембраны можно проверить на присутствие железобактерий с помощью темнопольной микроскопии. Метод прямого счета можно применять также при клинических анализах мочи, мокроты или спинномозговой жидкости. Например, Райт и Моллман [239] для обнаружения My oba terium tuber ulosis использовали мембраны, окрашенные кислотоустойчивым красителем. [c.211]

В экспериментах на переживающих волокнах с помощью окрашивания метиленовой синью, темнопольного микроскопа и фазового контраста О.С.Сотникову (1965) удалось отметить некоторые отличия наружного и внутреннего слоев аксоплазмы. На границе с плазматической мембраной обнаруживалась более жидкая, подвижная аксо-плазма, которая хуже красилась метиленовой синью, вытекала из области разреза. Внутренний отдел аксоплазмы оказался механически более устойчивым. Он не сдавливался при набухании насечек Шмидта-Лантермана и был более прочным при растягивании и разрыве волокон. Этот внутренний участок обнаруживал значительно большее сродство к метиленовой сини и солям металлов (Сотников О.С., 1971, 1973, 1976). [c.20]

Морфология и тинкториальные свойства. Лептоспиры — бактерии, имеющие извитую форму, длиной 7—14 мкм, толщиной 0,1 мкм (см. рис. 10.1) характеризуются наличием многочисленных мелких завитков, концы лептоспир загнуты в виде крючков. Не образуют спор и капсул подвижны — совершают поступательное, вращательное, сгибательное движения. Лептоспиры анилиновыми красителями красятся плохо, по Романовскому—Гимзе окрашиваются в розовый цвет, грамотрицательны. Оптимальный способ изучения их морфологии — темнопольная микроскопия. [c.212]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология