анализ аминокислот внутренний стандарт

Целью количественного аминокислотного анализа является определение молярного состава пептида, т. е. типа и количеств входящих в него аминокислот. Выражение молярных отношений аминокислот путем сопоставления содержания данной аминокислоты с соответствующим значением аминокислоты, присутствующей в смеси в наименьшем количестве, хотя и дает верную картину общего состава исходного соединения, не позволяет получить информации о размере, т. е. длине полипептидной цепи. Для этого нужно определить количество хотя бы одной из аминокислот и отнести его к количеству взятого пептида. Естественно, такое определение имеет смысл только при условии, что все аминокислоты, составляющие пептид, обнаруживаются с одинаковой точностью. В таком случае можно работать с одним или несколькими внутренними стандартами, имеющими подходящие удерживаемые объемы, и находить индивидуальные поправочные коэффициенты, специфичные для определяемых производных аминокислот и, как уже упоминалось, в сильной степени зависящие от типа детектора [45, 48]. [c.336]

Несмотря на общий характер метода энантиомерной метки, разработан он был главным образом для аминокислотного анализа с помощью ГХ. Все о-аминокислоты, вьшолняющие роль внутренних стандартов, имеются в продаже, а разделение смеси всех природных белковых ь-аминокислот и соответствующих о-энантиомеров можно [c.175]

Следует отметить, что введение в анализируемую смесь аминокислот точного количества какой-либо известной аминокислоты в качестве внутреннего стандарта приводит к значительному снижению ошибки количественных определений, связанной с несколько различной реакционной способностью аминокислот разных классов при их конверсии в летучие производные, и лишь в некоторых случаях ошибка газо-хроматографического анализа аминокислот превышает 10% [48]. [c.267]

Златкис и др. [55] применили этот метод для анализа смеси аминокислот известного состава. Концентрацию каждого компонента определяли с точностью до %, причем термистором обнаруживали до 1 мкг соединения. Можно предугадать, что нижний предел чувствительности будет на несколько порядков ниже, чем при использовании ионизационного детектора. При анализе гидролизата казеина этим методом на хроматограмме обнаружили четыре основных пика, соответствующих аланину, валину, лейцину и изолейцину. Поскольку норлейцин, норвалин и а-аминомасляная кислота образуют пики с известным временем удерживания и не обнаруживаются в белках, их можно использовать в качестве внутренних стандартов. [c.539]

При анализе производных аминокислот на сорбенте с этиленгликольадипатом в качестве внутреннего стандарта применялась пг/5йис-4-аминометилциклогексанкарбоновая кислота, так называемая транексамовая, а на сорбенте со смесью силиконовых НЖФ — бутиловый эфир стеариновой кислоты. [c.72]

На рис. 2.14 показана хроматограмма, полученная при разделении гидролизата инсулина. Авторы работы [324] сняли полные масс-спектры всех компонентов и по характерному для каждой аминокислоты фрагменту определили изотопные отношения. Для количественного анализа они использовали целый набор внутренних стандартов. Этот метод, опробованный на примере инсулина, дает результаты, которые хорошо согласуются с известными данными о составе указанного белка и с результатами аминокислотного анализа, выполненного параллельно по традиционной схеме методом ионообменной хроматографии. [c.88]

Ядерно-физические методы детектирования в ТСХ широко применяются для решения различных прикладных аналитических задач. В хроматографии меченые соединения часто используют в качестве внутреннего стандарта для онределения разрешающе способности того или иного метода, а также для калибровок в методе гашения флуоресценции. В химии и биохимии радиоактивные метки вводят в состав синтезируемых продуктов для проведения различных исследований, в частности, при усгановлении структуры вещества, чистоты препаратов, выхода целевых продуктов. Наиболее широко тонкослойный радиохрома-тографический анализ используют для исследования аминокислот, протеинов, углеводов, стерипов, стероидов, нуклеиновых кислот и липидов. Ядерно-физические методы детектирования зон на тонкослойных хроматограммах применяются также и в неорганическом анализе [9]. Меченые продукты используют как для аналитических, так и для препаративных целей. [c.122]

Если раствор нингидрина недостаточно устойчив, следует через каждые 3—4 анализа прогонять стандартные растворы аминокислот и использовать внутренний стандарт, который позволяет дополнительно учитьшать ошибки при подготовке проб и проведении гидролиза. В качестве внутреннего стандарта часто используется норлейцин [16]. В случае отсутствия азота для вытеснения кислорода перед гидролизом следует предварительно заморозить смесь в ампуле, откачать под вакуумом из нее воздух и запаять подготовленную таким образом ампулу [16, 24]. [c.285]

Для обсчета площади пиков применяются также электронные и механические интеграторы, но мы пришли к заключению, что расчет концентрации,- основанный на измерении только высоты пика, вполне пригоден для большинства случаев. Добавление внутреннего стандарта к неизвестной пробе до анализа показывает любое отклонение от нормальных ожидаемых величин (мет ханические потери, химические изменения, замена оборудования ). Норлейцин — или, еще лучше, гомоцитруллин [139] —удобен для использования при хроматографическом анализе кислых и нейтральных аминокислот он элюируется вслед за лейцином. [c.49]

Остановимся па количественном определении аминокислот в виде наиболее часто применяемых их летучих производных, а именно сложных эфирах К-ТФА- и алкилсилилпроизводных аминокислот. Для получения количественной информации при газохроматографическом анализе аминокислот применяется метод внутреннего стандарта, основанный на добавлении к исследуемой смеси известного количества определенного вещества — внутреннего стандарта. На основании обработки хроматограмм ряда смесей с различным соотношением количеств внутреннего стандарта и определяемого компонента строят калибровочный график, выражающий зависимость отношения площадей пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта от отношения их концентраций. При анализе многокомпонентных смесей с широким интервалом температур кипения иногда применяют несколько внутренних стандартов. [c.69]

Рис. 3.12. Автоматический анализ кислотного гидролизата эндосперма пшеницы по Муру и Штейну на колонках дауэкс-50 (при 55 "С). А. Для идентификации оснбвных аминокислот используется короткая колонка (5 > 0,9 см) элюирование проводят при pH 5,28, продолжительность опыта 60 мин. Б. Для разделения нейтральных и кислых аминокислот используется более длинная колонка (55 х 0,9 см) элюирование проводят сначала буфером с pH 3,25, а затем буфером с pH 4,25. В качестве внутреннего стандарта добавлен норлейцин. Оснбвные аминокислоты остаются на колонке. Продолжительность-опыта 180 мин. Элюируемые фракции автоматически обрабатывают нингидрином, после чего измеряют их оптическую плотность при 570 и 4 нм. Регистрация при длине волны 440 нм используется исключительно для идентификации пролина и гидроксипролина (в эндосперме пшеницы они отсутствуют). (С любезного разрешения Е. Т. Mertz, Purdue University.)

В 1973 г. Перейра и др. [300] описали методику определения аминокислот в экстрактах почв методом хроматомасс-спектрометрии. Этим же авторам удалось провести количественный анализ 12 аминокислот в биологических жидкостях 301], используя соответствующие внутренние стандарты обнаружение аминокислот проводилось по определенным пикам в масс-спект-ре. Впоследствии было показано, что для обнаружения и количественной оценки аминокислот в биологических препаратах можно использовать их триметилсилильные производные [302—304]. Опубликовано также сообщение о применении выщеуказанного метода обнаружения для одновременного определения триптофана, триптамина, индолил-З-уксусной кислоты, серотонина и [c.85]

Дейтерированные аналоги аминокислот были выбраны в качестве внутренних стандартов в недавно опубликованном Рафтером и др. [324] методе аминокислотного анализа белка на хроматомасс-спектрометре, снабженном компьютером. Подробная методика этого анализа приведена ниже. [c.87]

Наилучшие результаты по триптофану дает альтернативный кислотному щелочной гидролиз, однако при этом молярные соотношения аминокислот должны рассчитываться из данных независимых анализов кислотных гидролизатов [168]. При проведении щелочного гидролиза щелочную среду создают с помощью Ва(0Н)2 [318], NaOH [168] и LiOH [226]. В качестве внутреннего стандарта используют 5-метилтриптофан по его выходу вносят поправку на деструкцию триптофана [404], следует иметь в виду, что на некоторых колонках 5-метилтриптофан элюируется совместно с лизиноаланином, образующимся в процессе щелочного гидролиза [419]. [c.252]