Анализ гидролизатов

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Анализ гидролизатов на содержание моносахаридов может быть проведен также с помощью биохимических методов. Для этого в гидролизат, содержащий гексозы и пентозы, после нейтрализации добавляют дрожжи-сахаромицеты, которые сбраживают только гексозы. По разности содержания сахаров в гидролизате до и после брожения определяют количество гексоз. < [c.68]

Общая стратегия определения первичной структуры белка включает несколько этапов. Необходимо (а) провести количественный анализ гидролизата для того, чтобы определить мольное соотнощение имеющихся аминокислот (см. разд. 23.3.2) (б) определить молекулярную массу с помощью подходящего физического метода для того, чтобы вычислить количество всех присутствующих аминокислотных остатков [I—3] (в) определить количество входящих в молекулу полипептидных цепей либо с помощью хроматографического или электрофоретического разделения, либо посредством количественного анализа остатков, содержащих аминогруппу (JV-конец) и карбоксильную группу (С-конец) (см. разд. 23.3.4) [c.256]

Программирование. Программирование анализа, т. е. выбор соответствующего аналитического метода, зависит от конкретной задачи. Если в лаборатории определенного профиля обычно проводят однотипные исследования, например анализы гидролизатов или физиологических жидкостей, рекомендуется ограничиться использованием какого-либо одного оптимального метода. Литература по автоматическому аминокислотному анализу очень обширна, к настоящему времени описано значительное число различных методик. Не имеет смысла перечислять все эти методики, поэтому ниже будут приведены лишь те, которые по нашему мнению наиболее удобны (фиг. 36 и 37). [c.179]

Эта метка является хромофорной группой благодаря наличию в ней протяжённой системы сопряжённых связей,, поэтому аминокислота, несущая метку, становится окрашенной в отличие от остальных аминокислот. При последующем гидролизе меченого пептида аминная связь 2,4-динитрофенильной группы с пептидом не затрагивается, и в образовавшейся смеси аминокислот только К-концевая кислота оказывается меченой. Анализ гидролизата с помощью тонкослойной хроматографии позволяет однозначно идентифицировать N-концевую аминокислоту путём сравнения хроматографической подвижности окрашенного пятна из гидролизата с подвижностями заведомых 2,4-ДНФ-производных аминокислот. [c.56]

Анализ гидролизатов методом газожидкостной хроматографии включает подготовку гидролизатов к анализу, синтез ТМС-производных моносахаридов, хроматографическое разделение этих производных и обработку хроматограмм. [c.141]

В настоящее время в числе прочих описан метод ХТС для анализа гидролизатов искусственных смол [37а]. Продукты расщепления можно разделить на слоях силикагеля Г, используя смесь метанол — ледяная уксусная кислота (90-1-10). [c.209]

Более углубленное изучение состава углерода ванадилпорфиринов основывалось на методике хроматографического разделения концентрата на фракции, описанной в предыдущем разделе, включая кислотный гидролиз фракций и аминокислотный анализ гидролизата. Дополнительно проводился лишь анализ изотопного состава углерода фракций до и после кислотного гидролиза с целью отделения аминокислот. [c.366]

Полный гидролиз полисахарида проводят для установления природы и соотношения составляющих его моносахаридных остатков. Качественный анализ гидролизата в настоящее время неизменно выполняют с помощью распределительной хроматографии на бумаге, что требует лишь микроколичеств сахаров и вместе с тем дает возможность идентифицировать присутствующие нейтральные, основные и кислые моносахариды. По хроматографии углеводов существует обширная литература [91, 97, 127, 131, 162]. Было испытано множество систем растворителей и много обнаруживающих реагентов как специфических, так и неспецифических, и составлены таблицы относительных скоростей движения сахаров на бумажных хроматограммах [131]. Для окончательной идентификации определенного сахара не достаточно одного только хроматографического анализа. [c.303]

Для анализа редких аминокислот из некоторых источников разработаны специальные условия элюирования. Системы, предназначенные для анализа аминокислот из животных тканей, приходится модифицировать при анализе аминокислот растительного происхождения, что связано с разным количественным и качественным составом экстрактов [44—46]. Разработаны также таблицы для идентификации компонентов, содержащихся в экстрактах из насекомых [47]. Для контрольных анализов изделий пищевой промышленности разработан специальный метод аминокислотного анализа гидролизатов пищевых продуктов и муки [48, 49], пива и солода [50]. Метод определения аминокислотного состава травы и силоса разработан с целью определения их кормовой ценности [51]. Для промышленных целей раз- [c.348]

В этом заключается так называемый метод отпечатков пальцев , а полученные при анализе гидролизатов белка результаты называют пептидными картами [5]. [c.134]

Перед количественным хроматографическим анализом смесей редуцирующих веществ проводят качественный анализ для установления природы веществ, которые выделяют из смеси хроматографированием на бумаге. Выделенными веществами могут быть отдельные редуцирующие вещества или группы веществ, обладающих близкими свойствами. Например, анализ гидролизата делают для установления содержания в нем гексоз, пентоз, [c.83]

Для проведения гидролиза по заданному режиму при отсутствии автоматического управления процессом контролируют 1) количество воды, пара и серной кислоты, подаваемых в гидролизаппарат 2) температуру подаваемой воды и отбираемого гидролизата 3) перепад давления, т. е. разность давлений, измеряемых манометрами, установленными на крышке гидролиз-аппарата и на линии выдачи гидролизата до вентиля, и 4) концентрацию серной кислоты и сахаров в гидролизате. На основании результатов анализа гидролизата на содержание серной кислоты и сахара во время варки регулируют подачу серной [c.117]

Динитрофеннлы1ые производные амииокислот находят широкое применение в качестве свидетелей для идентификации аминокислот при хролтатографическолг анализе гидролизатов белков и пептидов. Они представляют собой желтые кристаллические вешоства, обладающие больилои светочувствительностью. Хранить их следует в темноте или в посуде из оранжевого стекла. [c.113]

Гидролизаты гемицеллюлоз древесины сосны содержат )-галак-тозу, >-глюкозу, >-маннозу, -арабинозу, -ксилозу и уроновые кислоты. Основным полисахаридом гемицеллюлоз древесины сосны является галактоглюкоманнан, макромолекулы которого построены из остатков -маннозы, -глюкозы и /)-галактозы в отношении 18,9 5,7 1 [27]. Содержание этого полисахарида составляет около 12% от древесины. Исследование структуры молекул галактоглюкоманнана методом периодатного окисления и метилирования показало, что макромолекулы его имеют слабо разветвленную структуру. На основании результатов анализа гидролизатов полностью метилированного полисахарида (табл. 25) можно считать, что основная цепь молекул галактоглюкоманнана построена из остатков )-маннопираноз и )-глюкопираноз, соединенных 1->4 гликозид-ными связями. Отрицательное значение удельного вращения поля-, ризованного луча ([<х] = —33,8°) свидетельствует о преимущественном наличии р-связей между этими остатками. Присутствие диметилгексоз в гидролизате после исчерпывающего метилирования подтверждает наличие разветвленности в молекулах этого полисахарида. Нередуцирующие концевые группы ответвлений состоят из остатков /)-маннопираноз и D-галактопираноз, в то время как точками ветвления могут быть как остатки D-маннозы, так и D-глюкозы. Из данных табл. 25 видно, что на каждую молекулу галактоглюкоманнана приходится 9 молекул тетраметилманнозы. Если учесть, что одна из них падает на неальдегидную концевую группу, то на боковые ответвления остается 8 молекул. Этот расчет согласу- [c.178]

Дальнейший анализ сводится к определению диоксида углерода гравиметрическими или титриметрическими методами, основанными на поглощении СО2 гидроксидами калия, натрия или бария [30]. По количеству вьщелившегося при декарбоксили-ровании СО2 рассчитывают содержание уроновых кислот в древесине, обычно в пересчете на гексуронаны. Состав уроновых кислот определяют анализом гидролизатов хроматографическими методами. Наиболее перспективным считают методы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). [c.320]

Автоматические анализаторы аминокислот все время соверщенствуют-ся, повыщаются чувствительность методов и скорость проведения анализа. Так, в современных приборах высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) удается проводить анализ гидролизата белка за 45 мин, определяя при этом концентрацию аминокислот в пикомолях (рис. Т8). [c.43]

Общий анализ гидролизатов одноколоночным двухбуферным методом [2] [c.179]

Общий анализ гидролизатов белков одноколоночным трехбуферным [c.179]

Полностью метилированный иолисахарид подвергали фор-молизу, а затем гидролизовали разбавленной серной кислотой. Далее метилированные моносахариды после их преобразования в ацетаты альдитов идентифицировали с помощью ГЖХ. Результаты анализа гидролизата представлены в табл. 2.1. [c.62]

Применение ультразвукового метода в гидролизном производстве. В результате гидролиза древесины иод влиянием серной кислоты и высокой температуры получается водный раствор сахаров и других растворимых частей древесипы, носящий название гидролизата [142]. После ряда дальнейших обработок из гидролизата получается этиловый снирт. При химическом анализе гидролизата определяется процентное содержание в нем сахаров, или так пазыгаемых редуцируюндпх веществ (РВ) на различных стадиях варки. От содержания РВ в гидро-лизато, в конечном счете, зависит количество получаемого из древесины спирта. Одиако химический ана.лиз требует отбора проб с разных стадии варки и их длитель- [c.181]

Большое число работ посвящено нахождению специфических реактивов, позволяющих определить различные аминокислоты в смеси, полученной при гидролизе, при помощи весового или колориметрического методов. Многрхе из разработанных аналитических методов успешно применяются и в настоящее время для некоторых аминокислот, но полный анализ гидролизата белка осуществить этим путем невозможно. В последнее время предложен ряд точных методов выделения аминокислот. Среди них находят наибольшее применение хроматографический и микробиологический методы. [c.419]

Связь амидного азота с у арбоксильной группой аспарагиновой кислоты и 6-карбоксильной группой глутаминовой кислоты доказана выделением аспарагина и глутамина после ферментативного гидролиза белка. Количество первичных аминогрупп в белке или в гидролизате может быть точно определено микрометодом Ван-Слайка (1911). Кислота, содержащая первичную аминогруппу, реагирует с азотистой кислотой с количественным выделением азота последний определяется манометрически. В лизине и а- и е-аминогруппы могут быть определены по Ван-Слайку, в аргинине реагирует только а-аминогруппа и не реагирует гуанидогруппа ЫН-группы пролина, триптофана и гистидина в этих условиях азот не выделяют глутамин дает 2 моль азота. Этот метод может быть применен для анализа гидролизата, осаждаемого фосфорновольфрамовой кислотой. Осадок содержит три основные аминокислоты и цистин, количество которого может быть вычислено, исходя из результатов анализа общего азота (по Кьельдалю) и опре- [c.640]

Применение метода газовой хроматографии альдегидов, образующихся из аминокислот при реакции с нингидрином, ограничивается определением нейтральных аминокислот (Хантер, 1956 Златкис, 1960). Метод газожидкостной хроматографии н- и изоамиловых эфиров N-аце-тиламинокислот при сравнительно низких температурах (95—148 °С) был применен при анализе гидролизатов коротких пептидов, элюированных с бумажных хроматограмм (Мейстер, 1961). Этот метод является чрезвычайно перспективным. [c.642]

Ф. Экошар и Н. Дюво предложили новый метод определения состава смешанных полиамидов или смеси полиамидов известного состава. Этот метод основан на потенциометрическом анализе гидролизатов, которые содержат следующие составные части [c.97]

Рис. 8. Газо-хроматографический анализ гидролизата рибонуклеазы. Разделение аминокислот проводилось в виде N-TФA-мeтилoвыx эфиров на колонке (60x0,15 см) с 5% неопентилгликольсукцината, нанесенным на газ-хром Р. Начальная температура 65° С, при повышении температуры со скоростью 1,5° С/жии сразу же после ввода пробы после 20 мин — 2° С1мин после 42,5 мин — 4° С/мин. Скорость газа-носителя (Аг) — 18 мл мин [49].

Рис. 10. Газо-хроматографический анализ гидролизата грамицидина А. Разделение аминокислот в виде метиловых эфиров ДНФ-производных проводилось на колонке 180 X Х0,3сл с 1% метилсиликоно-вого каучука 8Е-30, нанесенным ва инертный носитель газ-хром Р. Температура 175° С. Скорость газа-носителя (N2) — 0мл1мин [68].

Рис. и. Газо-хроматографический анализ гидролизатов природного споридесмолида II (1) и синтетических образцов цикподепсипептидов (2, 3). Разделение проводилось в виде N-aцeтилиpoвaнныx бутиловых эфиров на колонке с 3% полиэтиленгликоля Карбовакс 1540, нанесенным на целит 545. Температура 160° С. Скорость газа-носителя (Аг) — 60 мл мин [37]. [c.270]

Анализ гидролизатов метилированных полисахаридов обычно труднее, чем при исследовании метилированных олигосахаридов. В последнем случае при небольшом числе моносазГаридных звеньев в молекуле содержание каждого метилированного компонента бывает достаточно большим. В смеси метилированных сахаров из полисахаридов содержание некоторых компонентов может быть очень малым (например, метилированной концевой группы при длинной линейной цепи). Поэтому здесь требования к точности анализа должны быть весьма большими. [c.69]

В последнее время в виде этих же производных был определен аминокислотный состав энзимов (лизоцим и трипсиноген), а также дипептидов, содержащих гистидин глицил-Ь-гистидин и L-ги-стидил-Ь-лейцин [51] (рис. 6). Интересно отметить, что при анализе гидролизатов с небольшим содержанием гистидина в колонке не было обнаружено превращения диацилгистидина в моноациль-ное производное, как сообщалось ранее [58]. [c.24]

Используя пленки с ионообменным слоем (см. табл. 9.5), Девении и др. [10] успешно разделили смесь 16 аминокислот описанный этими авторами метод можно также использовать, например, для быстрого анализа гидролизатов пептидов. Пленку в течение 3 ч приводят в равновесие с нитратным буферным раствором (0,004 н. раствор соли натрия, pH 3,2) и потом сушат при комнатной температуре. Стандартным раствором служит 0,1%-ный раствор смеси аминокислот (аргинин, лизин, гистидин, фенилаланин, тирозин, лейцин, изолейцин, метионин, валин, пролин, аланин, глицин, глутамовая кислота, треонин, серин и аспарагиновая кислота) в 0,01 н. соляной кислоте, ко- [c.129]

При работе этим методом необходимо учитывать следующее. Полная нейтрализация карбоксильных групп наблюдается лишь при pH 9,1—9,5, что соответствует ярко-красному окрашиванию при использовании в качестве индикатора фенолфталеина. Лучше применять ти-молфталеин, изменение окраски которого (ярко-синяя) можно наблюдать еще в интервале 9,4—9,7. Аргинин и мочевина не реагируют с формалином и поэтому не учитываются при титро вании щелочью. Тирозин дает завышенные показаггели, так как в нем, кроме карбоксильной группы, частично титруется и фенольная группа. Если в растворе имеется повышенное количество аммиака, что наблюдается при анализах гидролизатов белков, то он должен быть предварительно удален в вакууме при температуре 40° с использованием в качестве щелочи известкового молока. Аммиачные соли количественно [c.19]

Меднощелочной раствор готовят сливанием одинаковых объемов первого и второго растворов перед каждым анализом. Установка титра меднощел очно го раствора. Титр меднощелочного раствора можно устанавливать по любому интересующему редуцирующему сахару, который хотят определять. При анализе гидролизата и сульфитного щелока титр меднощелочного раствора принято устанавливать по глюкозе, потому что главные составные части углеводов растительных тканей — глюкоза и ксилоза — имеют одинаковую редуцирующую способность. Титром меднощелочного раствора по глюкозе называют количество миллиграммов глюкозы, которое расходуется на восстановление 10 мл меднощелочного раствора при данных условиях титрования. Изменение порядка прибавления сахарного раствора к меднощелочному оказывает влияние на количество сахара, идущее на восстановление меди, поэтому титр меднощелочного раствора устанавливают для первого и второго вариантов титрования отдельно. [c.36]

Анализ гидролизата. Количество моносахаридов, образовавшихся из олигосахаридов во время гидролиза, определяют эбулиостатическим потенциометрическим методом. В эбулиостат с нейтрализованным раствором моносахаридов вливают по 2 мл первого и второго растворов, перемешивают, вставляют [c.92]