Аминокислоты, методы анализа газохроматографические

Этот метод обычно используется для количественного определения аминокислот методом жидкостной хроматографии. Вместе с тем полученные из аминокислот альдегиды могут быть определены и методом ГЖХ [110—113]. Однако имеются сведения о том, что глицин окисляется нингидрином до формальдегида, который в условиях газохроматографического анализа полимеризуется 1114], а альдегиды, полученные из фенилаланина и метионина, обладают низкой летучестью [115]. При окислении нингидрином валина, лейцина, изо лейцина, аланина были получены соответственно изомасляный альдегид, 3-метилбутанол, 2-метилбутанол и ацетальдегид [110 . [c.41]

В книге систематизированы как наиболее распространенные, так и менее известные методы газохроматографического анализа аминокислот, предусматривающие получение их летучих производных. Подробно рассмотрен каждый метод превращения аминокислот в летучие производные — форму, удобную для анализа — методом газо-жидкостной хроматографии. Много внимания уделено условиям анализа, жидким фазам и твердым носителям, дается критическая оценка возможных ошибок измерения. Обсуждаются результаты качественного и количественного анализа смесей аминокислот. Приводятся данные по точности количественного определения последних. [c.2]

Способность многих соединений переходить в газовую фазу без разложения давно используется для их разделения и очистки методами дистилляции, отгонки и сублимации. За последние два десятилетия для разделения и аналитического определения летучих веществ все шире применяется также газовая хроматография,, которая благодаря ее универсальности, высокой разрешающей способности и чувствительности завоевала большую популярность среди химиков. Если прежде летучесть соединений для аналитика была чаще всего помехой и даже методы анализа газов обычно основывались на предварительном переводе их в нелетучие формы путем поглощения подходящим реагентом, то с появлением газовой хроматографии, наоборот, исследователи начали изыскивать способы перевода нелетучих соединений в летучие производные. Примером могут служить разработанные за последние годы газохроматографические методы анализа нелетучих жирных кислот, аминокислот и углеводов в виде летучих эфиров и других производных. Вполне естественно, что были предприняты попытки распространить этот метод также на такие, казалось бы, неподходящие объекты, как металлы. [c.4]

Методы получения производных аминокислот для газохроматографического анализа [c.270]

Второй положительной особенностью применения методов ХОП является улучшение разделения анализируемых соединений. Улучшение разделения объясняется тем, что индивидуальные различия в образовавшихся производных проявляются более заметно, чем в исходных соединениях. Например, рацематы аминокислот могут быть разделены на энантиомеры газохроматографическим методом, если их превратить с помощью оптически активных реагентов в диастереомеры, которые можно разделить на оптически неактивных НЖФ [22]. Отметим, что этот метод для анализа энантиомеров аминокислот используют существенно рел е, чем способ их анализа, основанный на использовании оптически активных НЖФ [9]. Это связано с необходимостью использовать в качестве реагентов очень чистые соединения. Оптически активные примеси приводят к образованию большого числа побочных продуктов. [c.19]

Большие аналитические возможности метода газовой хроматографии способствовали широкому его применению в химической, нефтехимической и газовой промышленности [26]. В этих отраслях промышленности газовая хроматография находит наибольшее применение, в некоторых случаях до 80—100% всех анали,зов. В последние годы газовую хроматографию начали широко применять в пищевой промышленности (в настоящее время более 20% публикаций) для контроля чистоты продуктов, определения ранней стадии порчи продуктов, анализа компонентов ароматов различных пищевых продуктов и т. д. Особенно велики достижения в анализе компонентов ароматов, позволяющем во многих случаях проводить объективную дегустацию качества пищевых продуктов и напитков. Газохроматографический анализ сахаров и аминокислот позволяет определить питательную ценность продуктов [27]. [c.19]

Самый ранний метод газохроматографического анализа аминокислот (1956 г.) состоит в декарбоксилировании и дезаминировании нингидрином [64]. В результате образуются альдегиды, имеющие на один углеродный атом меньше, которые затем разделяют с помощью ГХ [c.88]

В начальном периоде развития метода ГЖХ для анализа пептидов было вполне достаточно обычных колонок с высоким содержанием набивки, так как исследователи имели дело только с метиловыми эфирами N-ТФА-дипептидов, которые достаточно летучи и позволяют проводить анализ на таких колонках в разумное время. Однако для дипептидов с высоким молекулярным весом приходилось мириться с очень - большими временами удерживания. Все имеющиеся в литературе данные по удерживанию были рассчитаны для таких сильно нагруженных колонок (см. табл. 1) с изотермическим режимом. Газохроматографический анализ полного ряда пептидов, от низкомолекулярных дипептидов и даже аминокислот до высокомолекулярных олигопептидов, проводится преимущественно в мало загруженных колонках с 1—5% жидкой фазы на силанизированном [c.149]

К реакционной газовой хроматографии (в смысле определения Драверта и сотр.) должен быть отнесен также метод, разработанный Златкисом и сотр. (1958, 1960) для прямого определения алифатических аминокислот в водном растворе при применении двух реакторов (см. разд. 8.1.2). В нагреваемом до 140° реакторе I, заполненном нингидрином, сначала происходит окислительное разложение аминокислот до летучих альдегидов и двуокиси углерода. Продукты реакции разделяются в присоединенной последовательно колонке при комнатной температуре и переводятся в реактор II, заполненный никелем на кизельгуре. Это заполнение обеспечивает при 425° гидрогениза-ционное расщепление всех альдегидов до метана. Присоединяемая к реактору II короткая колонка с молекулярными ситами служит для абсорбции образующейся и захваченной из пробы воды. Отдельные аминокислоты затем определяются в виде пиков метана при помощи катарометра. Применением реактора II решается относительно простая задача газохроматографического анализа веществ, содержащих воду, тем более что метан в отличие от альдегидов легко высушить. Кроме того, превращение альдегидов в метан позволяет более просто количественно определять аминокислоты, так как специфическая для данных веществ теплопроводность остается всегда одинаковой и вследствие этого не нужно вводить поправочных коэффициентов в количественные результаты. Тот факт, что катарометр при обычной температуре может применяться для определения метана, положительно сказывается на чувствительности метода. [c.274]

Реакционная газовая хроматография (химические методы в газовой хроматографии) служит для анализа объектов, которые нельзя непосредственно исследовать другими газохроматографическими методами. Здесь совместно используют химическую трансформацию определяемых веществ с определением летучих продуктов реакции. Нелетучие соединения превращаются в летучие, это значительно расширяет возможности газовой хроматографии. Анализируемый образец подвергают направленным химическим превращениям либо до поступления в колонку, либо на выходе из колонки. Например из нелетучих аминокислот получают летучие нитрилы, эфиры и т.п. [228, 229]. [c.93]

Все известные в настоящее время методы газохроматографического анализа аминокислот мон<но условно разделить на две большие группы. [c.7]

Не исключено, что углубленные исследования в этом направлении могут привести к изысканию таких стандартных веществ и условий их применения, которые позволят в конкретных условиях анализа значительно увеличить точность и воспроизводимость газохроматографического метода определения аминокислот. [c.72]

Данная книга посвящается методам подготовки проб для газохроматографических анализов. В начале книги обсуждаются методы ввода проб, более детально рассматривается анализ равновесной паровой фазы с использованием охлаждаемых ловушек и без них. Далее речь идет о методах выделения и концентрирования, применяемых для подготовки проб в этом аспекте в книге обсуждаются адсорбция, абсорбция, экстракция, дистилляция, конденсация, концентрирование замораживанием и зонная плавка. Рассматриваются специальные проблемы, возникающие при анализе воздуха и биологич,е-ских объектов (включая выделение жирных и желчных кислот, а также аминокислот из биологических жидкостей и тканей), при анализе пищевых продуктов и входящих в иХ состав пахучих веществ, эфирных масел, осадков и водных проб, анализов, применяемых в судебной экспертизе. [c.6]

Определение аминокислот в биологических объектах также представляет собой важную область хроматографического анализа. Исследователей могут интересовать свободные аминокислоты, содержащиеся в биологических жидкостях, или аминокислотный состав выделенных белков и белковых тканей. Обычно вполне удовлетворительные ответы на такие вопросы дают ионообменные методы, в связи с чем газохроматографическим методам уделялось очень мало внимания. Однако результаты сравнительных исследований показали [112], что стан- [c.100]

Таким образом, последние годы ознаменовались бурным развитием газохроматографического разделения энантиомеров на различных оптически активных стационарных фазах. Быстрота анализа, высокая чувствительность и надежность результатов позволили применить эти методы для определения степени оптической чистоты диссимметрических соединений и расчета констант скоростей их рацемизации [111], для изучения процессов рацемизации в твердофазном пептидном синтезе [112], для определения абсолютной конфигурации производных аминокислот в соответствии с их хроматографическим поведением [ИЗ]. [c.65]

Из-за одновременного наличия в молекулах аминокислот карбоксильной и аминогруппы эти соединения отличаются малой летучестью, и чтобы образец был пригоден для газохроматографического анализа, необходимо модифицировать указанные функциональные группы. Метод получения производных должен быть таким, чтобы превращение полярных групп не сопровождалось разрушением структуры молекулы. В 1956 г. [c.69]

К числу основных задач в области газовой хроматографии относится задача улучшения разделения компонентов смесей. Для этой цели эффективно использование так называемых реакционных методов, т. е. методов, включающих химические реакции. Химическая обработка возможна на разных стадиях процесса, например при разделении аминокислот нужно сначала защитить активные функциональные группы, при анализе высокополимерных веществ применяют гидролиз. Для увеличения избирательности газохроматографического определения нужна разработка селективных детекторов. Другие задачи включают увеличение экспрессивности анализа, что может быть достигнуто, в частности, повышением давления вплоть до 2—3 млн. Па, а также разработку методов определения микропримесей. [c.93]

Хроматография оптических изомеров (особенно энантиомеров) представляет особый интерес как метод определения степени рацемизации аминокислот в ходе пептидного синтеза и анализа природных пептидов, содержащих остатки О-аминокислот. Для газохроматографического разделения таких изомеров либо используют оптически активную неподвижную фазу, либо в молекулы анализируемых производных вводят второй асимметрический центр и получают таким образом пары диастереомеров. [c.79]

ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИИ АНАЛИЗ ПРОИЗВОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ. СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ. ВОЗМОЖНОСТИ и ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА [c.294]

О)вершенно очевидно, что число необходимых для превращения стадий должно быть минимальным, так как в результате многочисленных операций могут происходить большие потери и воспроизводимость экспериментов будет ухудшаться. В идеале было бы желательно производить модификацию аминокислот в одну стадию, но в случае полифункциональных аминокислот, как правило, на это рассчитывать не приходится. Большое число реакций при модификации не выгодно и с другой точки зрения обычно в аминокислотном анализе используются очень небольшие количества материала — несколько микромолей или даже меньше. Следовательно, превращение аминокислот необходимо проводить на микроуровне. С помощью газохроматографических детекторов с обычной чувствительностью определять такие небольшие количества довольно легко. К тому же вполне возможно, по крайней мере теоретически, увеличить чувствительность методов детектирования. Поэтому в настоящее время основные трудности связаны не с газохроматографическим детектированием производных аминокислот, а с микропрепаративным превращением аминокислот. [c.310]

В настоящее время наиболее широко в ГХ используют методы защиты функциональных групп. Анализ аминокислот газохроматографическим методом стал возможным, в основном, благодаря химической защите их функциональных групп, что привело к повышению стабильности и увеличению летучести. Защита (трансформация) функциональных групп в более устойчивые является традиционным способом, широко используемым в методах ХОП. Естественно, что защита направлена, прежде всего, на те функциональные группы, присутствие которых в молекуле анализируемых соединений обуславливает их повышенную реакционную способность, термическую нестабильность и образование ассоциатов. Аналогичные проблемы давно решаются в препаративной органической химии, в которой часто прибегают к временной блокировке или защите тех функциональных групп, участие которых в реакциях, проводимых по другим функциональным группам молекулы, возможно, но нежелательно. Обширный, хорошо систематизированный материал по известным до настоящего времени методам защиты групп приведен в монографии, написанной под редакцией Дж. Мак Оми [12]. [c.14]

Существует значительный разрыв между числом статей, описывающих газохроматографические методы, и числом работ, посвященных приложению этих методов. Качественные анализы или же анализы, ограничивающиеся измерением лишь нескольких аминокислот пептидных или белковых гидролизатов . были выполнены уже давно [25, 69, 88, 147]. Наиболее полными являются данные Герке проведенное им газохроматографическое определение аминокислот в гидролизатах бычьего сывороточного альбумина, каппа казеина, белка бобов [41] и рибонукле-азы [43] прекрасно согласуется с результатами, полученными на ионообменниках. В табл. 5, 6 и 7 приведены некоторые экспериментальные данные, полученные ГХ н-пропиловых эфиров ацетиламинокислот из нескольких пептидных гидролизатов. Для гидролизатов фибриноиептидов те же молярные соотношения (табл. 6) найдены на ионообменниках [62]. С помощью ГХ контролировался синтез брадикинина (табл. 7). [c.130]

Согласно литературным данным, особенно пшрокое распространение получили методы синтеза летучих производных аминокислот, связанные с переводом последних в эфиры их N-aцe-тил- и N-фтopaцeтилпpoизвoдныx. Рядом авторов была показана возможность газохроматографического анализа протеиновых аминокислот в виде указанных производных, что позволяет применять эти производные для анализа аминокислот в сложных биологических объектах. [c.4]

Исследуя реакцию взаимодействия метилизотиоцианата с белками, авторы показали, что при большом избытке реагента (60 мкл) образуется продукт, затрудняюпщй газохроматографическое определение. При анализе бычьего инсулина после первого цикла его расщепления по методу Эдмана на хроматограмме были идентифицированы пики производных глицина и фенилаланина, после второго цикла — пики производных второй пары аминокислот изолейцина и валина. Пик производного глицина может быть экранирован пиком производного валина. [c.34]

Последующие работы по газохроматографическому анализу бутиловых эфиров К-ТФАнроизводных аминокислот направлены в основном на модернизацию метода за счет применения других НЖФ и твердых носителей [126—131] и варьирования условий анализа [132]. [c.49]

Остановимся па количественном определении аминокислот в виде наиболее часто применяемых их летучих производных, а именно сложных эфирах К-ТФА- и алкилсилилпроизводных аминокислот. Для получения количественной информации при газохроматографическом анализе аминокислот применяется метод внутреннего стандарта, основанный на добавлении к исследуемой смеси известного количества определенного вещества — внутреннего стандарта. На основании обработки хроматограмм ряда смесей с различным соотношением количеств внутреннего стандарта и определяемого компонента строят калибровочный график, выражающий зависимость отношения площадей пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта от отношения их концентраций. При анализе многокомпонентных смесей с широким интервалом температур кипения иногда применяют несколько внутренних стандартов. [c.69]

Метод (б) применяется в основном в тех случаях асимметрического синтеза, когда нет необходимости модифицировать образец перед газохроматографическим анализом. Тогда хиральный продукт реакции может быть изучен in situ, т. е, без выделения и очистки, а количество его может быть порядка г. При анализе нелетучих или высокололярных субстратов типа а -аминокислот необходимо превратить их в соответствующие производные (т.е. модифищрсжать). Иногда соответствующий метод модификации применяют для улучшения разделения, вводя подходящие функциональные группы. В принципе для получения производных можно использовать соответствующий хиральный агент [ метод (а)]. Однако несомненное преимущество метода (б) состоит в возможности использования и ахирального реагента. В обоих случаях при модификации необходимо убедиться в отсутствии рацемизации. [c.80]

Для газохроматографического анализа аминокислот предложено несколько других методов, но их практическая ценность не установлена столь определенно, как у изложенных выше методов. Согласно Либерти (см. [6]), аминокислоты дезаминируют до оксикислот с помощью раствора нитрата натрия в уксусной кислоте и ион натрия удаляют на колонке с катионообменной смолой. Затем оксикислоты метилируют диазометаном и полученные эфиры подвергают хроматографическому анализу. Колонка имеет длину м я заполнена стерхамолом, на который нанесено 30 % силикона D. С. 550. Скорость потока газа-носителя (природа не указана) составляет 60 мл мин, а температуру программируют от 80 до 140°. В этих условиях метиловые эфиры оксикислот, полученных из глицина, валина, аланина, лейцина, серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты, элюируются Б указанном порядке, причем последний выходит спустя [c.540]

Действительно оказалось, что оптическую чистоту аминокислот, ок-сикислот и спиртов можно с большой точностью и надежностью [23] определять газохроматографическим путем, превращая их в диастереоизо-мерные производные с последующим разделением на эффективных колонках с использованием всего арсенала методом точной количественной хроматографии. Это открывает путь для все более детального анализа пищевых смесей. [c.520]

Адсорбционная хроматография аминокислот на неполярных неподвижных фазах, впервые предложенная в сороковых годах, в период после пятидесятых годов в какой-то степени утратила свое значение в связи с разработкой метода ионообменной хроматографии. Однако развитие высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) вновь пробудило интерес к этим фазам. Сравнивая методы ВЭЖХ, ионообменной и газовой хроматографии применительно к разделению аминокислот, следует иметь в виду, что автоматическое оборудование для ионообменной хроматографии дорого и пригодно только для анализа аминокислот, причем полное разделение 20 природных аминокислот занимает около 60 мин, для газохроматографического анализа необходима предварительная модификация аминокислот с целью получения их летучих производных, что возможно далеко не во всех случаях. Однако метод ВЭЖХ является весьма гибким и с помощью сравнительно недорого оборудования позволяет решать разнообразные проблемы, связанные с изучением различных веществ. В частности, 20 аминокислот можно разделить данным методом менее чем за 40 мин. В результате многочисленных систематических исследований сорбентов установлено, что химически связанные фазы являются наилучшими для анализа аминокислот и пептидов. [c.43]

Хантер и др. [186] предложили метод газохроматографического анализа, основанный на определении альдегидов, образующихся при взаимодействии аминокислот с нингидрином. Эти альдегиды можно также получить и с помощью других реагентов. Аминокислоты можно также хроматографировать в виде аминоспир-тов, аминов, нитрилов и т. д. 1[181]. Наиболее подходящими для газохроматографического анализа являются, однако, такие производные, в которых сохранены все функциональные группы, но их полярность уменьшена в результате модификации. В литературе описано большое число таких производных, а подробные методики их получения даны в превосходном руководстве Кнаппа, [187]. В настоящее время наиболее часто используются триме-тилсилильные производные и сложные эфиры ациламинокислот. [c.70]

Instrumental Methods of Organic Functional Group Analysis (1972) -- [ c.137 , c.139 ]

Инструментальные методы анализа функциональных групп органических соединений (1972) -- [ c.137 , c.139 ]

Инструментальные методы анализа функциональных групп органических соединений (1974) -- [ c.137 , c.139 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология