Бакетов

Если раствор, содержащий смесь полимеров с разными константами седиментации, нанести в центрифужной пробирке тонким слоем (зоной) на раствор более высокой плотности (в биохимии для этой цели используют раствор сахарозы), то в результате седиментации произойдет разделение молекул по их константам седиментации. В идеальном случае каждый из полимеров образует свою зону. После остановки ротора можно начать отсасывать содержимое пробирки по каплям в разные приемные пробирки и механически разделить образовавшиеся зоны и тем самым содержащиеся в них вещества. Поэтому седиментация является широко используемым методом разделения биополимеров. Для этих экспериментов необходимо пользоваться бакет-роторами, так как иначе из-за изменения направления поля при разгонке ротора может размыться исходный нанесенный слой раствора, а при остановке ротора дополнительно размоются образовавшиеся зоны разделенных биополимеров. [c.335]

Новый седиментационный метод, основанный на центрифугировании в градиенте плотности, в настоящее время особенно широко распространен. Он обладает следующими двумя преимуществами во-первых, для его осуществления требуется не аналитическая, а обычная препаративная ультрацентрифуга во-вторых, фракционируемый материал довольно просто разделяется на индивидуальные компоненты. При этом используется так называемый бакет-ротор (крутящееся ведерко ), а процесс разделения на компоненты происходит в пластмассовых центрифужных пробирках. [c.417]

Зональное центрифугирование представляет собой эффективный способ разделения структур, имеющих сходную плавучую плотность, но различающихся по форме и массе частиц. В качестве примеров можно привести разделение субъединиц рибосом, различных классов полисом, а также молекул ДНК, имеющих различную форму. Центрифугирование осуществляют либо в бакет-роторах, либо в специально устроенных зональных роторах для предотвращения конвекции при центрифугировании в стаканах бакет-ротора или в камере зонального ротора создают слабый градиент (обычно сахарозы). Пробу наносят в виде зоны или узкой полосы в самом верху градиентного столбика. Для субклеточных частиц обычно используется градиент сахарозы от 15 до 40% (вес/объем) большинство этих частиц в достаточной степени разделяется центрифугированием при 100000 д в течение 1—4 ч. [c.149]

Центрифугируют при 2400 и 4 С в бакет-роторе 45 мин. [c.249]

Весьма важно избегать осаждения нуклеиновых кислот СТАВ-буфером прн слишком большом ускорении, поскольку очень плотные осадки могут пло.хо растворяться. Во избежание этого следует использовать настольную низкоскоростную центрифугу с бакет-ротором. При работе с небольшим количеством материала, как правило, нуклеиновые кислоты вполне успешно осаждаются в мини-центрифуге и впоследствии ресуспендируют-ся, если работать осторожно. Осадок СТАВ/нуклеиновая кислота весьма стабилен, и стадию осаждения целесообразно проводить в течение ночи. [c.245]

Центрифужные пробирки для бакет-ротора (если возможно, прозрачные). [c.259]

Пробирку центрифугируют в бакет-роторе в микроцентрифуге 3—5 мин. В результате образуется слой белка, связанного с ДДС-Na, расположенный над жидкой фазой. [c.35]

Собранный вирус разводят 3—5 объемами NTE и осаждают центрифугированием 3 ч в бакет-роторе при 189 ООО g. [c.126]

Сжатие геля агарозы можно осуществить и центробежной силой. В этом случае процедура извлечения ДНК сводится к замораживанию и оттаиванию измельченного геля с последующим скоростным центрифугированием в бакет-роторе. [c.155]

При опускании ротора на место две ведущие шпильки на торце вала электромотора не попали на две ведомые шпильки в гнезде ротора во избежание этого перед установкой ротора надо заметить положение его шпилек в гнезде. Для бакет-ро-торов после установки их на место следует проверить правильность и свободу подвески всех бакетов при установке бакет-ро-тора нужно держать его за головку, а не за ножку. [c.180]

Пробирки в бакеты устанавливают свободно, причем так, чтобы край пробирки выступал из гнезда на 3 мм. Это позволя- [c.189]

Основные финансовые инструменты в глобальной финансовой системе -производные ценные бумаги - опционы и фьючерсы, заставляют соверщенст-вовать стратегическую технику хеджирования также для легиона производных от производньос - кванто, свопов, дифференциальных свопов и отнощений и т.д., порождая различные виды хеджирования - дельта-, гамма-, бакет-хеджирование и др. [c.150]

Культуру выращивают в 40 мл бульона Тодда — Хьюитта (разд. 20.3.33) в пластмассовых (поликарбо-натных или полипропиленовых) центрифужных пробирках объемом 50 мл с завинчивающимися крышками. После инкубации при 37 °С в течение 18—24 ч культуру центрифугируют в бакет-роторе при максимальной скорости. Надосадочную жидкость осторожно сливают в колбу Эрленмейера с дезинфицирующим раствором и протирают крышку центрифужной пробирки полотенцем, смоченным дезинфицирующим раствором. Следует убедиться в том, что вся надосадочная жидкость слита и взмучивания осадка во время сливания не было. К осадку добавляют 0,5 мл физиологического раствора (0,85% Na l) и суспендируют его, осторожно покачивая пробирку из стороны в сторону. Плотно завинчивают крышку и автоклавируют 15 мин при 121 °С. Снова центрифугируют при максимальной скорости, чтобы осадить автоклавированные клетки. Стараясь не взболтать осажденные клетки, переносят большую часть надосадочной жидкости с помощью пастеровской пипетки в маленькую пробирку. Жидкость должна быть совершенно прозрачной если она мутная, ее снова центрифугируют. В надосадочной жидкости содержатся растворимые антигены, экстрагированные из клеточных стенок стрептококков. [c.65]

Настольная центрифуга MSE entaur 2 (или эквивалентная) с бакет-ротором для центрифужных пробирок, описанных ниже. [c.145]

Настольная центрифуга с бакет-ротором, подходящим для центрифужных пробирок, описанных ниже (например, MSE entaur 2 или эквивалентная). [c.152]

Осаждают центрифугированием-"> в настольной центрифуге с бакет-ротором (2000 g, 15 мин). Удаляют супернатант и высушивают осадок. Если осаждения не проис.ходит, центрифугируют при больших скоростях в силиконированных пробирках из корекса (10 мин, 8000 g, 20 °С) в центрифуге типа Sorval ) ). [c.243]

Ресуспендируют осадки в 25 мл буфера для промывания ядер, используя гомогенизатор Поттера, и осаждают ядра в сили-конированных стерильных пробирках из корекса в бакет-ро-торе при 500 g (10 мин, 4°С). Продолжают промывание (3— [c.256]

Ресуспендируют ядра в 7 мл буфера для выделения и наслаивают на ступенчатый градиент плотности перкола, приготовленный из 7 мл 35%-иого перкола и 7 мл 80%-ного перкола, растворенного в буфере А для выделения ядер в стерильных силиконированных пробирках из корекса. Центрифугируют в бакет-роторе при 8000 g в течение 30 мин при 4 °С. Между двумя слоями будут располагаться ядра, свободные от клеточного дебриса, что контролируют с помощью окрашивания акридиновым оранжевым (приложение 2 [VII], В). Эту зону отбирают и разводят 25 мл буфера для выделения ядер. Ядра осаждают и еще раз промывают тем же буфером (1000 г, бакет-ротор). [c.257]

Лизаты хлоропластов перед нанесением на градиент СзС1/БЭ часто необходимо освободить от крахмала и остатков клеточных стенок центрифугированием в бакет-роторе при низких скоростях. [c.262]

В некоторых случаях для полного удаления полисахаридов из экстрактов нуклеиновых кислот используют разнообразные методики. Наиболее распространенные нз них основаны на центрифугировании РНК через слой s l. Под раствор РНК можно подслоить 1/3 объема 5,7 М s l и затем центрифугировать в бакет-роторе в течение 16 ч при 25 000 об/мин и 20 °С. Тяжелая РНК образует рыхлый осадок на дне пробирки, а легкие примеси не проходят через ннтерфазу. [c.269]

Настольные центрифуги с охлаждением и бакет-ротором (например, Sorval). [c.344]

Осаждают неочищенный препарат хлоропластов центрифугированием (настольная центрифуга с охлаждением типа Sorval с бакет-ротором) при 3000 об/мин и 2°С в течение [c.345]

Супернатанты объединяют и подвергают центрифугированию. При простом центрифугировании получают осадок неочищенных мембран, при центрифугировании через сахарозную подушку — частично очищенные мембраны. В последнем случае супернатант наслаивают на 32%-ный раствор сахарозы в трис-буфере, pH 8, и используют центрифугу фирмы Be kman с угловым ротором типа 35 и поликарбонатными пробирками на 20 мл или бакет-ротором SW27 и полиалломерными пробирками на 10 мл. [c.189]

Ааговые частицы соберите центрифугированием, 10 ООО об/ НИН, 10 мин, 4°С. Супернатант удалите, осадок суспендируйте в 3-5 мл зм буфера, затем добавьте равный объем хлороформа и энергично перемешайте в течение 30 сек. Д ее центрифугируйте в любом бакет-роторе 5 мин, 3 ООО об/мин при комнатной температуре. Соберите водную фазу, содержа1цую фаговые частицы. [c.2]

Путем замораживания 25%-ного раствора сахарозы в центрифужных пробирках и медленного оттаивания. Раствор, содержащий вирус, осторожно наслаивают на поверхность градиента. В большие пробирки (например, от ротора SW27 фирмы Be kman) не следует вносить больше 5 мг вируса, а в маленькие пробирки (например, от ротора SW50) — больше 1 мг. Центрифугирование проводят в роторах со свободно подвешенными стаканами (бакет-роторах) рекомендуемые режимы центрифугирования (время и скорость вращения) указаны в табл. 1.2. [c.16]

Из относительно небольшого объема культуральной жидкости вирус можно сконцентрировать ультрацентрифугированием. Обычно тогавирусы осаждают центрифугированием при 50 000 g в течение 2 ч. Можно использовать как угловые роторы, так и бакет-роторы в зависимости от объема материала и имеющегося оборудования. Пробирки для угловых роторов следует тщательно закрывать, лучше всего термическим способом, предложенным фирмой Be kman. [c.98]

Материал, полученный одним из описанных выше методов, обычно контаминирован клеточными компонентами. Однако в тех случаях, когда высокая степень очистки не обязательна (например, для постановки RIA или ELISA), его можно использовать уже на этой стадии. Тем не менее для большинства исследований необходима дальнейшая очистка вируса с помощью зонально-скоростного или изопикнического центрифугирования в градиенте. При скоростном центрифугировании положение вируса в градиенте определяется его коэффициентом седиментации, а при изопикническом — плавучей плотностью. Для достижения максимальной степени очистки вирусных частиц от примесей изменение концентрации образующего градиент вещества должно быть плавным в то же время на промежуточных стадиях очистки нередко используют ступенчатые градиенты. В некоторых случаях принципы скоростного и изопикнического центрифугирования совмещаются примером может служить использование градиентов глицерина — тартрата калия [14]. В таких градиентах концентрация тартрата калия возрастает в направлении дна пробирки, достигая плотности, соответствующей плавучей плотности вируса концентрация глицерина, наоборот, максимальна на мениске, что препятствует продвижению медленно седиментирующего материала в направлении дна. Все типы градиентов обычно центрифугируют в бакет-роторах, но в случае изопикнических градиентов такие же или даже лучшие результаты можно получить в угловых или вертикальных роторах с помощью приспособлений для медленного разгона и остановки, обеспечивающих переориентацию градиента без перемешивания. При очистке конкретного вируса часто приходится проводить целую серию последовательных стадий центрифугирования в разных типах градиентов, чтобы добиться нужной степени очистки. [c.100]

Зональное центрифугирование лучше всего проводить в бакет-роторах или вертикальных роторах, чтобы избежать нежелательного взаимодействия материала со стенками пробирки. Линейные градиенты сахарозы (5—20%, вес на вес) готовят одним из стандартных методов (см. гл. 1, разд. 2.5.1) и сверху осторожно наслаивают раствор вируса. Поскольку при использовании данного метода отсутствует эффект концентрирования в результате образования зоны с соответствующей плавучей плотностью, объем образца не должен превышать 1/10 объема градиента. Центрифугирование следует проводить при 4°С. Время и скорость центрифугирования во многом зависят от геометрии используемого ротора, поэтому можно дать лишь самые приблизительные указания относительно режима. Первоначально используемый режим центрифугирования обычно приходится модифицировать после первых опытов с учетом полученных результатов. В бакет-роторе, например SW27, центрифугирование в течение 2 ч при 27 ООО об/мин позволяет получить достаточную степень очистки большинства тогавирусов. [c.101]

Наиболее широко используемый метод концентрирования рабдовирусов — осаждение высокоскоростным центрифугированием (естественно, для этого в лаборатории должна быть ультрацентрифуга с подходящим ротором). Коэффициент седиментации стандартных инфекционных частиц ВВС и вируса бешенства составляет около 600S длина ДИЧ на 1/3—3/4 меньше длины стандартных вирионов, и соответственно они имеют меньшие коэффициенты седиментации [25]. В большинстве лабораторий для выделения вируса из инфицированных тканей осветленную содержащую вирус культуральную жидкость в ламинарном боксе переносят в плотно закрывающиеся центрифужные пробирки или стаканы большого объема (250 мл) от соответствующего углового или бакет-ротора, например центрифуги Spin o (Be kman) и др. [c.124]

Детальную характеристику действия препарата на синтез отдельных классов РНК получают, анализируя РНК полирибосом в градиенте плотности сахарозы. Для выделения РНК из полирибосом их суспендируют в буфере Б, к суспензии добавляют додецилсульфат натрия до 0,5% и ЭДТА до 5 мМ, после чего раствор инкубируют при 37 С в течение 1 мин. Для анализа профилей РНК используют градиент концентрации сахарозы 5— 20%, приготовленный на буфере Б. Центрифугируют в течение 15 ч при 50000 g (бакет-ротор SW 25.2 центрифуги Спинко , 20000 об/мин) при 3 С. Фракции, соответствующие пикам в градиенте, содержащие рРНК и мРНК, используют для определения удельной радиоактивности РНК после осаждения материала 10% раствором ТХУ. Для количественного осаждения к пробам перед добавлением ТХУ приливают по 3 капли 1% раствора дрожжевой РНК. Осажденный материал наносят на миллипоровые фильтры и измеряют радиоактивность. Результаты выражают в имп/мин на мг РНК и ДНК клеток. [c.292]

Продукты диссоциации ЭтРс наслаивают на линейный градиент концентрации сахарозы 10—50%. Раствор сахарозы готовят на растворе II с добавлением 0,5 М КС1. Отношение молярных концентраций K+/Mg в этом растворе равно 500, что лучше для количественного разделения субъединиц. В одной пробирке бакет-ротора SW25.2 (объем 50 мл) допустимо разделение 40 мг исходного материала ЭтРс. Центрифугирование проводят в течение 12—13 ч при 50000 g (20000 об/мин) и 10 С. Соотношение масс 60S- и 40S-частиц в данных условиях диссоциации и центрифугирования составляет 2,7 1, что равно теоретическому соотношению. [c.307]

Осадок мембран суспендируют в воде и переносят в центрифужную пробирку ротора с откидными стаканами (бакет-ротор) препаративной ультрацентрифуги. К 1,2 мл суспензии добавляют по каплям при перемешивании 2,1 мл сахарозы с плотностью 1,34. Получают плотность смеси—1,20. На эту смесь осторожно наслаивают 1 мл раствора сахарозы с плотностью 1,18 и затем 1 мл раствора сахарозы с плотностью 1,16. Центрифугируют 75 мин при 100000 д. [c.328]

Эти роторы несут три или шесть пробирок, устанавливаемых в свободно подвешенные металлические гильзы — бакеты (от английского bu ket — ведро ). Первоначальная свободная подвеска служит только для фиксации исходного положения бакетов. Уже при малой частоте вращения ротора бакеты поворачиваются горизонтально, их упругая начальная подвеска слегка деформируется, и они опираются на тело ротора своими специальными мощными поясками-выступами. Контакт осуществляется по участку сферической поверхности. [c.189]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология