Высокоэффективная жидкостная хроматография принципы

Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

Период, наступивший в аналитической химии органических соединений с начала 60-х годов, без преувеличения может быть назван эпохой хроматографии. Один из вариантов этого метода — колоночная жидкостная хроматография — был создан русским ботаником М. С. Цветом в начале века [31]. На протяжении последующих 40 лет хроматография не находила широкого практического применения. Однако в этот период были выполнены работы, имевшие принципиальное значение и заложившие основы тонкослойной [9] и распределительной хроматографии [288]. Лишь после 1950 г. приходит время признания хроматографии, созревания ее как эффективного метода разделения сложных смесей соединений и их анализа. В 1952 г. были выполнены первые работы по газожидкостной хроматографии [216], а вскоре освоен выпуск газовых хроматографов, и в течение последующих 20 лет газохроматографический анализ стал основным методом исследования смесей летучих термически устойчивых соединений. Но большинство органических веществ не обладает необходимой для газовой хроматографии летучестью и термостойкостью, и хроматографировать их можно только в более мягких условиях, характерных для жидкостной колоночной хроматографии. Скорость же и эффективности разделения, а также чувствительность анализа по этому методу долго оставались неудовлетворительными. И лишь в 1965— 1975 гг. были в принципе решены основные научные и технологические проблемы, сдерживавшие развитие метода. Последовавший затем прогресс был столь поразителен, что современная инструментальная разновидность метода получила самостоятельное наименование — высокоэффективная жидкостная хроматография. [c.7]

В ионной хроматографии используются принципы высокоэффективной жидкостной хроматографии. Ионный хроматограф состоит из резервуаров для элюента, насосов, крана для ввода пробы, колонок, кондуктометрического детектора и самописца. [c.64]

Приступая к использованию того или иного аналитического метода для решения конкретной задачи необходимо уяснить, можно ли в принципе достичь избранным путем желаемой цели. В противном случае необоснованное применение метода может привести к принятию неверных решений в исследованиях и производстве. Результатом, помимо материальных и других потерь, явится компрометация аналитика либо даже метода в целом. Рассмотрим в связи с этим сильные и слабые стороны высокоэффективной жидкостной хроматографии. При их обсуждении будем исходить из ситуаций, характерных для различных этапов создания новых лекарственных средств, постадийного контроля производства, контроля качества продукции. [c.243]

При гель-фильтрации разделение белков происходит главным образом по размерам белковой глобулы [6, 59]. В настоящей главе рассматривается хроматография на открытых колонках, хотя сегодня в связи с созданием новых колонок, приборов, методов набивки более важным методом является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ см. гл. 6). Вместе с тем принципы разделения на открытых и закрытых колонках полностью идентичны. [c.21]

Наиболее важные изобретения в капиллярной газовой и высокоэффективной жидкостной хроматографии сделаны в течение последних десяти лет. Технологические усовершенствования в обеих областях, основанные на известных, но ранее не использовавшихся принципах, продолжают стремительно внедряться в практику. К числу наиболее значительных успехов относится развитие высокоскоростной капиллярной газовой хроматографии на колонках сверхмалого диаметра, создание систем ввода проб большого объема в капиллярные колонки, сочетание капиллярной газовой хроматографии и времяпролетной масс-спектрометрии, и сочетание микронасадочной жидкостной хроматографии с масс-спектроскопией, а также внедрение различных многомерных" методов анализа, включающих сочетания типа КГХ/КГХ, ЖХ/КГХ и ЖХ/ЖХ. [c.218]

Для упакованных колонок типичными являются значения /г = 3 и v = 3, так что hlv = l. Для полых колонок обычно Л = 1,5 и v = 5, так что jfe/v = 0,3. Следовательно, при использовании капиллярных колонок время анализа примерно втрое меньше (для dp = d ) при таком же качестве разделения (N и k постоянны). Поэтому в принципе капиллярные колонки лучше упакованных. К сожалению, их не всегда можно использовать. Это обусловлено следующим. Как было показано выше, в уравнение (7.6) входит коэффициент диффузии Dm)- Обычно в газах он в 10 000 раз больше, чем в жидкостях. В результате высокоэффективные колонки для жидкостной хроматографии приходится заполнять очень мелкими частицами (обычно диаметром 5— 10 мкм). Если для газовой хроматографии разумным представляется допущение dp = d [2], то в жидкостной хроматографии придется рассматривать капиллярные колонки с чрезвычайно малым внутренним диаметром [3]. Применяя такие узкие колонки, приходится предъявлять экстремальные требования к оборудованию, так что в настоящее время полые капиллярные колонки еще не могут быть использованы в реальной практике жидкостной хроматографии. [c.367]

Аналитическим методом, идеально дополняющим газовую хроматографию (см. разд. А,2.5.4.3), служит высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). В основе ВЭЖХ лежат принципы распределительной адсорбционной хроматографии (см. разд. А,2.6.2). [c.96]

Оценка результатов хроматографического разделения путем анализа отдельных фракций — процедура относительно медленная, однако очень часто только таким методом можно получить важную специфическую информацию, а если анализируются радиоактивные материалы, то и повысить чувствительность обнаружения, Чаще всего используется автоматическая регистрация процесса разделения детектором, дающим на выходе электрический сигнал, интенсивность которого пропорциональна концентрации анализируемого соединения. Этим же методом можно провести количественное определение. Обнаружение соединений в жидкостной хроматографии проводится различными способами. Мнопие детекторы оценивают различие в характеристике анализируемого соединения и элюента. В частности, этот принцип положен в основу спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной областях. Детекторы неселективного действия измеряют показатели преломления, проводимость или диэлектрическую проницаемость при тщательной температурной компенсации рабочей ячейки и ячейки сравнения. В некоторых типах детекторов растворитель перед вводом соединения в регистрирующий блок удаляется (например, пламенно-ионизационный детектор с подвижной нагреваемой лентой). Конструкция спектрофотометрических детекторов для высокоэффективной жидкостной хроматографии (особенно ультрафиолетового абсорбционного и рефрактометрического детекторов) хорошо разработана. Если для работы с одной колонкой объединяют два детектора, то сначала устанавливают УФ-детектор, а затем рефрактометрический детектор. [c.67]

ДЛИЛОСЬ 1 ч. Два года спустя для аналогичного разделения на колонке диаметром 1 мм при давлении 400-108 кПа требовалось всего 24 мин, а в 1970 г. для такого же разделения на такой же колонке при давлении 5000 108 кПа достаточно 1,25 мин. Ясно, что аппаратура, работающая при таких высоких давлениях, должна отвечать особым требованиям. В данной главе мы рассмотрим только современные системы, работающие по принципу высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Краткое превосходное описание состояния ЖХ на 1982 г. можно найти в обзорной статье [4]. [c.428]

Выход из тупика был найден в 1975 г., когда Смолл и сотр. [3] впервые осуществили разделение нескольких обычных анионов (и катпонов) в течение лишь нескольких минут. Это стало возможным благодаря использованию принципов высокоэффективной жидкостной хроматографии и особому сочетанию ионообменных колонок, что позволило осуществить кондуктометрическое детектирование разделенных анионов. [c.63]

ТЫ прекрасно выполненных ими разделений представлены на рис. 14.12—14.14. Как следует из приведенных хроматограмм, для одного разделения требуется всего 10 мин. Таким образом, ионная хроматография может с успехом конкурировать с методами высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В принципе разделение ионов металлов можно также проводить на смолах с низкой емкостью. Однако чтобы осуществить такое разделение, Гьерду и Фритцу [6] понадобились прибор, изготовленный целиком из стекла и пластмассы, и спектрофо- [c.322]