Флуоресценция флуоресцеина

Рис. 69. Зависимость интенсивно- сти флуоресценции флуоресцеин-комплексона в присутствии эквимолярных количеств Со2+ (1), Си2+ (2) и N12+ (5) от pH.

Флуоресцирующие красители. Применяются для крашения и печати тканей для театральных костюмов, получения ковра цветов при киносъемке и для других целей, например при некоторых измерениях, в которых желательна люминесценция в темноте. Люминесцентные красители, активированные ультрафиолетовым светом, применялись во время войны для ночного освещения улиц и указательных значков и на железнодорожном полотне для обнаруживания диверсии. Люмогены , примененные немцами, относятся к различны.м химическим типам. В течение долгого времени для этих целей использовалась интенсивная зеленая флуоресценция Флуоресцеина, например для обнаруживания течи в трубе и прохождения воды через подземные каналы. Во время войны летчики снабжались пакетом Флуоресцеина, который они бросали в воду, если они сами были вынуждены сесть на воду. Таким образом, спасающие могли ориентироваться по зеленому пятну, которое было видно на большом расстоянии. [c.352]

В работе [7] приводятся исследования спектров поглощения и флуоресценции флуоресцеина и флуорексона. Максимумы спектров поглощения этих веществ соответственно равны 487 М.МК и 500 ммк. Флуоресценция флуоресцеина и флуорексона растет линейно с ростом их концентрации. Флуоресценция смеси флуоресцеина и флуорексона (кальцеина) непропорциональна ее концентрации, что, по мнению авторов, является следствием собственной абсорбции флуоресценции. [c.25]

Для флуориметрических определений необходимо наличие пропорциональной зависимости между интенсивностью флуоресценции и концентрацией. Основными причинами нарушения этой зависимости являются концентрационное гашение [12], абсорбция возбуждающего света [13] и абсорбция возбужденного света раствором флуоресцирующего вещества. Нами было описано явление абсорбции флуоресценции флуоресцеина флуорексоном при большом избытке последнего [10]. В общем случае происходит поглощение света раствором того же флуоресцирующего вещества. Регистрируемую прибором интенсивность флуоресценции (/) можно представить выражением [c.365]

Рис. 69. Зависимость интенсивности флуоресценции флуоресцеин-комплексона в присутствии эквимолярных количеств Со + (1), (2) и N1 + (3) от pH.

Выход флуоресценции показывает величину происходящих в молекуле энергетических потерь. Для одного и того же вещества он зависит от ряда причин растворителя, температуры, концентрации флуоресцирующего вещества, присутствия посторонних примесей и др. Выход флуоресценции различных веществ, находящихся в одинаковых условиях, колеблется в широких пределах например, квантовый выход флуоресценции флуоресцеина в водном растворе около 0,8, родамина 5Ж — 0,5, родамина С — 0,25, акридинового оранжевого — 0,08, а метиленового голубого — менее 0,01 [19]. Прямое определение выхода флуоресценции представляет собой сложную задачу, но описаны способы относительных измерений, позволяющие находить его путем сопоставления исследуемого вещества с таким, выход флуоресценции которого установлен достаточно хорошо [37]. [c.39]

Рис. 18. Зависимость относительной интенсивности флуоресценции растворов флуорексона от его концентрации, при разных значениях pH /—pH 13,0 2—pH 7.0 3—касательная, характеризующая флуоресценцию флуоресцеина.

Формула (11) описывает зависимость интенсивности флуоресценции флуоресцеина, находящегося во флуорексоне в виде примеси, от концентрации последнего. Справедливость уравнения (11) установлена при изучении зависимости флуоресценции флуоресцеина от его концентрации и наличии в растворах разных количеств флуорексона. [c.125]

Флуоресценция флуоресцеина и его производных в разных средах [c.292]

Было обнаружено, что добавление посторонних примесей, таких, как амины, кислород и некоторые соли, к раствору флуоресцирующего вещества, например хинина или флуоресцеина, понижает интенсивность флуоресценции. Как говорят, добавленные вещества тушат флуоресценцию. Сами тушители при этом не изменяются химически, они только катализируют превращение энергии возбуждения в тепло. Далее, тушение не происходит путем непосредственного поглощения излучения, выделяющегося при флуоресценции, тушителями, поскольку они, как правило, прозрачны к соответствующим длинам волн. Как оказалось, сами флуоресцирующие вещества принадлежат к наиболее сильным тушащим агентам. Так, например, интенсивность флуоресценции водного раствора флуоресцеина пропорциональна концентрации, если концентрация меньше 0,002 М. При более высоких концентрациях интенсивность растет медленнее, чем концентрация. Так, интенсивность флуоресценции 0,01 М раствора флуоресцеина лишь втрое больше интенсивности 0,001 Л1 раствора, даже если принять во внимание самопоглощение излучения флуоресценции флуоресцеином. Таким образом, мы приходим к выводу, что сам флуоресцеин тушит свою собственную флуоресценцию. [c.529]

Флуоресценция флуоресцеина настолько сильна и отчетлива, что ею пользуются в гидрологических исследованиях, чтобы проследить движение вод и проникновение в другие водоемы. К воде прибавляют флуоресцеина, и даже на очень большом расстоянии [c.544]

В случае иммобилизованных реагентов-производных флуоресцеина, так как излучение аргонового лазера при 488 нм эффективно возбуждает флуоресценцию флуоресцеина. [c.476]

Флуорометры и флуоресцентные спектрофотометры надо ежедневно стандартизовать по стабильному флуорофору для обеспечения правильной воспроизводимости ответа. Изменения обусловлены факторами, связанными с самим прибором, такими, как различия в интенсивности -лампы и чувствительности фотоумножителя. Флуорофором может служить чистый образец флуоресцирующего вещества, подвергаемого анализу, или другое легко очищаемое флуоресцирующее вещество с полосами поглощения флуоресценции такими же, что и у испытуемого вещества. Подходящим флуорофором для голубой флуоресценции является хинин в разведенной серной кислоте, для зеленой флуоресценции — флуоресцеин натрий и для красной — родамин. [c.54]

Для определения анионов часто используют косвенный флуоримет-рический метод, основанный на тушении люминесценции. Примером такого метода может служить определение иодид-ионов по тушению флуоресценции флуоресцеина (IV). [c.514]

Кроме описанных выше, имеется еще много других фотометрических методов определения йода. а-Нафтолфлавон реагирует с йодом с образованием синего соединения, которое пригодно для спектрофотометрических определений [81]. При взаимодействии йода с гидроксиламином образуется азотистая кислота, которая затем диазотирует сульфаниловую кислоту при последующем сочетании с а-нафтиламином образуется красный краситель [23]. о-Толидин, реагируя с йодом, дает сине-зеленую окраску [55]. Йодид можно определять по реакции с диоксаном [87]. В кислом растворе йодат окисляет пирогаллол до пурпурогаллина с образованием красновато-бурой окраски [103] эта реакция очень чувствительна. Можно использовать уменьшение флуоресценции флуоресцеина, поскольку дийодпроизводное не флуоресцирует [37]. Измерение интенсивности мути от йодида серебра позволяет успешно определять малые количества йодида [95]. Йод определяли также по адсорбции йодида одновалентной ртути на хлориде двухвалентной ртути [44, 77] и по образованию йодида палладия [64]. [c.243]

Пример. Согласно последним измерениям квантовый выход флуоресценции раствора флуоресцеина в воде очень близок к единице, т. е. практически на каждый поглощенный квант возбуждающего света испускается один квант света люмипесценции. Длина волны максимума в спектре флуоресценции флуоресцеина равна А,д=515 ммк. Если возбуждение производится светом с 1==366 ммк (ртутная лампа с черным светофильтром), то. энергетический выход будет равен [c.80]

Спектры флуоресценции флуоресцеина, аминофлуоресцеина > флуореоцеинизоциа-ната (ом. рис. 1) првдста1вляют собой сплошные бесструктурные полосы с максимумом флуоресценции при 520 Подобие полученных в этих экспериментах спект- [c.291]

Если возбуждение флуоресценции происходит в диапазоне главной полосы поглощения и энергия не теряется в результате межмолекулярных взаимодействий, то степень поляризации флуоресценции зависит от броуновского движения. Маленькие молекулы в водной среде вращаются очень быстро и между поглощением и эмиссией равновероятно принимают любую ориентацию, что приводит к полной дешхпяризации сигнала эмиссии. Так, в водном растворе флуоресценция флуоресцеина практически неполяризова-на, однако при повышении вязкости раствора степень ее поляризации возрастает. , [c.141]

Изображен поперечный срез лимфатического узла кролика, клетки которого содержат антитело против альбумина бычьей сыворотки (АБС) на четвертый день после повтор-лой иммунизации. Многие клетки дают желто-зеленую флуоресценцию флуоресцеина (па рисуике белые), тогда как фон из других клеток выглядит голубоватым ([ а рисунке серый). Антитело находится в цитоплазме. Ткань фиксировали 95%-ным этанолом при 4°С в течение ночи, затем обезвоживали в холодном 100%-ном этаноле, ск ветляли в холодном ксилоле и погружали в парафин при температуре ниже СО°С. Затем делали срез, депарафинировали его и гидратировали. Далее срез обрабатывали АБС (0,5 мг/мл в физиологическом растворе) и промывали. В результате АБС связывается только с участками, содержащими антитело, а несвязанный АБС удаляется при промывке. Анти-АБС метили флуоресцеином (две молекулы на молекулу белка) и наносили тонким слоем иа срез, чтобы могла пройти реакция с любым связанным АБС. При этом обнаруживается антитело, которое находилось в клетках с самого начала. Таким способом было показано. что клетки лимфатических узлов синтезируют анти-АБС. (Любезно предоставил Альберт Коонс.) [c.57]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология