Концентрация флуоресцирующих веществ

Таким образом, интенсивность флуоресценции пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, однако в [c.96]

Рнс. 1.33. Экспериментально снятая зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества [c.96]

Интенсивность излучаемого света связана с концентрацией флуоресцирующего вещества в растворе прямой зависимостью, благодаря чему методика количественного анализа по спектрам флуоресценции довольно проста. Строят график зависимости флуоресценции от концентрации для серии стандартных растворов и затем по интенсивности флуоресценции анализируемого образца определяют его концентрацию. Подчеркнем, что линейная зависимость соблюдается только до тех пор, пока абсорбционность раствора имеет небольшую величину (еС/ 0,1). Это условие выполняется для разбавленных растворов. Если необходимо исследовать концентрированные растворы, берут тонкие слои. [c.363]

Тогда поскольку мощность флуоресценции F пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, то [c.64]

Область, в которой флуоресценция пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, обычно очень узка поэтому соотношение (с—с )/(а—Ь), где а — интенсивность флуоресценции для стандартного вещества, Ь — то же для соответствующего контрольного вещества, с — интенсивность флуоресценции для испытуемого вещества и ё — то же для соответствующего контрольного раствора, должно быть не менее 0,40 и не более 2,50. Поэтому необходимо построить рабочую кривую зависимости интенсивности флуоресценции с поправкой на контрольный раствор от концентрации. [c.55]

С. И. Вавилов установил количественную зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества. Этот закон можно вывести из закона Бера. Доля поглощенного раствором ультрафиолетового света равна 1 —10 . Количество поглощенного излучения равно / —/ =/ (1—10) где к — константа, зависящая от химической природы растворенного вещества и растворителя, от температуры и других факторов I — толщина слоя раствора, С — концентрация флуоресцирующего вещества. Так как интенсивность флуоресценции /ф пропорциональна количеству поглощенного ультрафиолетового излучения, то можно написать [c.482]

Количественный люминесцентный анализ основан на использовании соотношения, связывающего интенсивность флуоресценции /л с концентрацией флуоресцирующего вещества с [c.213]

ЗАВИСИМОСТЬ ВЫХОДА И ИНТЕНСИВНОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАСТВОРОВ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА [c.20]

Так как концентрация флуоресцирующего вещества в растворе мала, поглощение возбуждающего УФ-излучения незначительно, следовательно [c.96]

Величина выхода флуоресценции зависит от длины волны возбуждающего света, концентрации флуоресцирующего вещества, температуры опыта и присутствия в растворе посторонних веществ. [c.482]

Использование не самого образца, а его производных в жидкостной хроматографии позволяет увеличить чувствительность и селективность метода. Иногда для получения производных необходимо предварительное концентрирование образца. Для многокомпонентных смесей обычно требуется предварительное разделение на более простые по составу фракции, чтобы исключить перекрытие зон в конечной хроматограмме или удалить примеси, влияющие на характеристики колонки. Некоторые соединения не обладают способностью поглощать свет, и для их определения с помощью высокочувствительных фотометрического или флуориметрического детекторов необходимо получить производные, регистрируемые этими детекторами. Присоединяя способную к флуоресценции группу к окси- или аминогруппе образца, можно обнаружить очень малые концентрации флуоресцирующих веществ. [c.68]

Для количественного анализа особый интерес представляет зависимость выхода флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества. Характерная кривая зависимости выхода от концентрации представлена на рис. 89. [c.152]

В практике количественного анализа вместо выхода флуоресценции часто используют интенсивность флуоресцентного излучения. Между этой величиной и концентрацией существует такая же зависимость, как между концентрацией и выходом флуоресценции. Определяя интенсивность флуоресценции в приборах, описанных ниже, и пользуясь калибровочным графиком, можно определять неизвестные концентрации флуоресцирующего вещества. Повышение температуры приводит к уменьшению выхода флуоресценции (рис. 90). Уменьшение выхода с повышением температуры называется температурным гашением флуоресценции. Очевидно флуоресцентный метод анализа можно проводить только при невысоких температурах. [c.152]

Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества [c.377]

С точки зрения аналитика безразлично, чем обусловливается изменение флуоресценции — тем ли, что благодаря изменению спектра абсорбции поглощается меньше света, или тем, что снижается выход флуоресценции, т. е. из числа молекул, поглотивших световую энергию, меньшая их доля отдает поглощенную энергию в виде флуоресцентного излучения. Важен самый факт, что при тождественных условиях освещения и наблюдения флуоресценция двух растворов с одинаковой концентрацией флуоресцирующего вещества может оказаться различной. На рис. 16 показаны [c.38]

Интенсивность флуоресценции пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества. Поэтому измерения флуоресценции можно использовать для определения концентраций. Минимальные измеряемые концентрации составляют около 10 г/мл, т. е. этот метод в 100—1000 раз чувствительнее, чем абсорбционная спектроскопия. [c.96]

Зависимость интенсивности флуоресценции р-ра от концентрации флуоресцирующего вещества имеет максимум. 4) Тушение Ф. может вызываться различными причинами, увеличивающими безызлучательные переходы увеличением темп-ры примесями, изменением pH р-ра, увеличением концентрации флуоресцирующего вещества. Тушение Ф. может происходить без уменьшения или с уменьшением средней длительности возбужденного состояния молекул (соответственно тушение 1-го или 2-го рода). [c.271]

Количественный люминесцентный анализ основан на использовании соотношения (5.8), связывающего интенсивность флуоресценции с концентрацией флуоресцирующего вещества. В практике количественного люминесцентного анализа обычно применяется метод градуировочного графика на основе этого уравнения. К настоящему времени разработаны методы количественного люминесцентного определения почти всех элементов при содержании в среднем 10 %. [c.112]

Уменьшение яркости люминесценции при повышении концентрации люминесцирующего вещества может происходить также за счет эффекта экранирования, заключающегося в том, что при достаточно высокой концентрации флуоресцирующее вещество начинает выполнять роль светофильтра для возбуждающей радиации. Визуально это проявляется в сжатии люминесцирующего слоя у стенки кюветы, на которую падает возбуждающая радиация. [c.86]

Выход флуоресценции показывает величину происходящих в молекуле энергетических потерь. Для одного и того же вещества он зависит от ряда причин растворителя, температуры, концентрации флуоресцирующего вещества, присутствия посторонних примесей и др. Выход флуоресценции различных веществ, находящихся в одинаковых условиях, колеблется в широких пределах например, квантовый выход флуоресценции флуоресцеина в водном растворе около 0,8, родамина 5Ж — 0,5, родамина С — 0,25, акридинового оранжевого — 0,08, а метиленового голубого — менее 0,01 [19]. Прямое определение выхода флуоресценции представляет собой сложную задачу, но описаны способы относительных измерений, позволяющие находить его путем сопоставления исследуемого вещества с таким, выход флуоресценции которого установлен достаточно хорошо [37]. [c.39]

Концентрация флуоресцирующих веществ [c.45]

Экранирование. С увеличением концентрации флуоресцирующего вещества в растворе возрастает поглощение им возбуждающего света, и флуоресцирующее вещество начинает служить светофильтром ( экраном ), ослабляющим излучения по мере углубления в толщу раствора. Когда концентрация настолько велика, что полное поглощение возбуждающего потока происходит во внешнем слое раствора, свечение оказывается прижатым к стенке сосуда со стороны облучения, а вся [c.45]

Определение примесей люминесцентным методом часто приходится выполнять в более или менее концентрированных растворах электролитов, в буферных растворах или растворах анализируемых солей. При этом следует иметь ввиду, что электролиты также могут влиять на флуоресценцию и привести к ее гашению. При значительном увеличении концентрации электролита растворимость люминесцирующего вещества уменьшается (высаливающее действие электролитов), что приводит к развитию явлений, сходных с концентрационным гашением наблюдается пороговая концентрация электролита, по достижении которой наступает гашение, причем оно наступает тем раньше, чем больше концентрация флуоресцирующего вещества. Следовательно, электролиты способствуют образованию нефлуоресцирующих ассоциатов, в частности димеров, что приводит к изменению спектров поглощения и уменьшению выхода флуоресценции. При гашении флуоресценции электролитами нагревание раствора приводит к увеличению интенсивности флуоресценции, как и в случае концентрационного тушения. Для устранения этого явления целесообразно работать с возможно меньшими концентрациями люминесцентных реагентов. [c.34]

После разложения экспоненты в ряд и подстановки /погл в (ХУ.5) получается соотношение, связывающее / сп с концентрацией флуоресцирующего вещества, которое для разбавленных растворов (ес/< 0,1) представляет линейную зависимость вида [c.349]

Величина выхода флуоресценции зависит от ряда факторов длины волны возбуждающего света, концентрации флуоресцирующего вещества, температуры, присутствия других веществ в растворе. Зависимость выхода флуоресценции от длины волны возбуждающего света подчиняется закону, высказанному С. И. Вавиловым [c.422]

Установлено, что выход флуоресценции уменьшается с увеличением концентрации флуоресцирующего вещества. Это явление называют концентрационным гашением флуоресценции. Аналорично увеличению концентрации влияет и увеличение температуры выше определенного предела, что приводит к температурному гашению флуоресценции. [c.482]

Форма спектра флуоресценции не зависит от длины волны возбуждающего света, поскольку испускание практически всегда происходит с нижнего колебательного подуровня возбужденного состояния. Если вид спектра флуоресценции меняется с изменением длины волны возбуждающего света, это может быть следствием того, что в смеси содержится несколько флуоресцирующих компонентов. Для слабопоглощающих растворов (й 0,1) скорость испускания флуоресценции Q = Io 2,Зe l((lf, т. е. для разбавленных растворов интенсивность флуоресценции пропорциональна произведению концентрации вещества на интенсивность возбуждающего света. Используя очень высокие интенсивности возбуждающего света (/о), можно определить достаточно низкие концентрации флуоресцирующего вещества (до М). [c.153]

На первый взгляд кажется странным, почему требование учитывать pH раствора приобретает столь суш,ествеююе значение при применении методов люминесцентного анализа. Казалось бы, что, посколы у абсорбция ионов и недиссоциированных молекул различна, изменение pH раствора должно было бы в равной мере сказываться и на наблюдениях спектров абсорбции. Однако, если учесть специфичную особенность методов флуоресцентного анализа, а именно то, что наблюдения ведут в растворах с исключительно малой концентрацией флуоресцирующего вещества, то станет понятной разница условий. В самом дело, содержание флуоресцирующих веществ в наблюдаемых растворах того же порядка, что и содержание индикаторов в растворах, служащих для определения pH. Поэтому понятно, что незначительные изменения pH до,лжны сказываться на диссоциации и пздролизе наблюдаемых флуоресцирующих соединений несравненно сильнее, чем это имеет место в растворах с такими концентрациями, какие обычно применяются при измерениях абсорбции. [c.41]

Влиянию концентрации на интенсивность свечения и на спектры флуоресценции растворенного вещества уделялось много внимания со стороны физиков вопрос этот детально изучен, и в нем достигнута полная ясность. Тем не менее в работах по люминесцентному анализу недоучет влияния концентрации флуоресцирующего вещества обусловливает нередко существенные недоразумения. Можно смело сказать, что во многих случаях именно здесь надо искать причину расхождений указаний отдельных авторов относительно цвета флуоресценции растворов одного и того же вещества. Влияние концентрации мо/кет сказываться в двух нанравлв ниях в концентрационном тушении и во вторичной абсорбции. Оба явле ния уже рассмотрены в главе И. [c.48]

Как мы видели, интенсивность свечеиия пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества только при очень малом его содержании начиная с некоторой критической концентрации порядка 10 г мл, имеет место тушение флуоресценции молекулами самого флуоресцирующего вещества. Поэтому ясно, что поскольку количественные определения флуоресцентным методом сводятся, в конечном счете, к нахождению концентрации но ннтеисивности свечения, необходимо вести соответствующие опыты в чрезвычатпи) разбавленных растворах. Однако, как ясно из вышесказанного, и для целен качественного флуоресцентного ана,пиза концентрации наблюдаемого растпора является далеко пе безразличной. [c.48]

Преимущество люминесцентных химических реакций перед обычными — их исключительная чувствительность люминесценцию можно наблюдать при очень малых концентрациях флуоресцирующего вещества, и это, как уже выше указывалось, специфически характерно для явления флуоресценции, а следовательно, и для ириемов, основанных на его использовании. Кроме того, включение флуоресцентных реакций в число аналитических увеличивает ассортимент последних в некоторых случаях, когда реакция на химический индивидуум отсутствует, заполнение пробела является существенным. [c.67]

Влияние рамановского испускания на результаты измерений слабой флуоресценции исследовали Эйзенбранд и Пихер [71]. Они зарегистрировали фотографическим методом главную ра-мановскую полосу воды при 0,342 мкм и две полосы бензола — при 0,993 и 0,306 МКМ . Позднее Эйзенбранд [72] сравнил интегральные интенсивности рамановской полосы флуоресценции разбавленного раствора оксипирентрисульфоната натрия при возбуждении ртутной линией 365 нм. Он установил, что интенсивность рамановской полосы равна интенсивности флуоресценции при концентрации флуоресцирующего вещества около 10 г/мл. Зная коэффициент погашения последнего при 365 нм, он рассчитал, что в виде рамановского рассеяния испускается [c.69]

Ширина щели подбирается так, чтобы добиться отклонения на всю щкалу самописца. Усиление усилителя затем снижается до трехкратного и регистрируется отклонение. Отношение этих двух положений пера самописца точно соответствует чувствительности нового диапазона (приблизительно 3000). При этом диапазоне чувствительности увеличивают ширину щели или устанавливают длину волны ближе к максимуму флуоресценции так, чтобы получить отклонение пера на всю щкалу самописца. Коэффициент усиления усилителя теперь снижают до единицы и по показанию самописца определяют чувствительность нового диапазона (приблизительно 1000). Эта процедура повторяется при меньших напряжениях на фотоумножителе, так что получается ряд точных значений чувствительности, соответствующих приблизительно 300, 100, 30, 10, 3, 1. Если используются стабилизированные усилитель и источник высокого напряжения, эти величины доллшы воспроизводиться в пределах нескольких процентов в течение длительного времени. Рекомендуется проверять линейность в некоторых интервалах (особенно при малых чувствительностях), помещая фильтры с известным пропусканием в пучок возбуждающего света или измеряя интенсивность флуоресценции нескольких растворов с известной концентрацией флуоресцирующего вещества при таких условиях, для которых известно, что интенсивность флуоресценции пропорциональна концентрации. [c.210]

Метод освещения в линию г на рис. 78) дает для разбавленных растворов неискаженные спектры возбуждения и испускания, и сигнал пропорционален концентрации флуоресцирующего вещества. В этом отношении этот метод похол< на фронтальный метод и метод освещения под прямым углом. Применение этого метода для измерения очень слабой флуоресценции имеет два серьезных недостатка. Первый состоит в том, что непоглощенный возбуждающий свет непосредственно поступает в анализирующий монохроматор, и если используется одинарный монохроматор, то некоторое количество света, рассеиваемое в монохроматоре, будет проходить через выходную щель при всех длинах волн, и слабое испускание раствора может быть замаскировано этим фоновым испусканием. Этот недостаток может быть устранен использованием двойного монохроматора для анализа флуоресценции или использованием фильтра, расположенного между образцом и анализирующим монохроматором, который поглощает возбуждающий свет, но пропускает флуоресценцию. Этот фильтр должен иметь очень слабую собственную флуоресценцию. Вторым недостатком является наложение нежелательных длин волн возбуждающего света. Оно может вызываться рассеянием света внутри монохроматора возбуждения (если это одинарный монохроматор) или фильтрами, которые используются для выделения нужной длины волны возбуждающего света. Нежелательные длины волн возбуждающего света в области полосы флуоресценции будут проходить прямо через второй монохроматор и вызывать очень большой фон. Вопросы, связанные с флуоресценцией фона, подробно обсуждаются в гл. V. [c.218]

Работы последней четверти прошлого века были посвящены изучению влияния концентрации флуоресцирующих, веществ в растворе на цвет и яркость флуоресценции ее зависимости от температуры, растворителей, степени аггрегации флуоресцирующих веществ и некоторых других условий тушению флуоресценции и ее длительности. Для исследования этой последней Александр Эдмон Беккерель (1820—1891), много работавший в области фосфоресценции (как он называл флуоресценцию), предложил в 1879 г. фосфороскоп, усовершенствованный в 1888 г. Э. Видеманом . [c.20]

Интенсивность свечения прямо пропорциональна интенсивности возбуждающего излучения /о, и, увеличивая последнюю, можно добиваться очень большой чувствительности сиектрофлуориметри-ческих измерений. Надежно регистрируется, например, свечение растворов с концентрацией флуоресцирующего вещества порядка моль/л, что превышает чувствительность метода абсорбционной спектрофотометрии. [c.350]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология