Денатурация бактериофага III

ДНК некоторых вирусов, например бактериофага SP8 (стр. 160), образуют при денатурации два компонента, имеющих различную плотность в градиенте плотности хлористого цезия [c.79]

ДНК, подвергнутая тепловой денатурации, часто оказывается более эффективной, чем нативная ДНК. Прекрасной затравкой является одноцепочечная ДНК бактериофага фХ 74. В обоих случаях синтезируется двухцепочечная ДНК. [c.331]

Внеклеточные полисахариды предохраняют клетки от высушивания, от губительного действия ультрафиолетовых лучей и различных химических агентов, в том числе тяжелых металлов и лекарственных препаратов. Замечено, что капсулированные бактерии устойчивее к химиотерапевтическим средствам, чем бес-капсульные варианты. Располагаясь поверхностно, капсулы защищают клетки от бактериофагов и поглощения их простейшими, предупреждают денатурацию клеточного белка. [c.397]

В некоторых других видах РНК также обнаружено формирование спиральных структур. Сообщалось, например, что комплементарная РНК (стр. 237), получаемая ферментативным путем in vitro на ДНК (как на матрице), выделенной из бактериофага Т2, содержит при определенных условиях высокоупорядоченную двойную спиральную структуру, сходную с таковой ДНК [74]. Однако это, по-видимому, не относится к информационной РНК, присутствующей в полисомах (стр. 281). Форму двойной спирали имеют также РНК различных вирусов, в том числе РНК реовируса раневой опухоли и репликативных форм вируса полиомиелита [36, 74, 75], вируса Сендай [76] и вируса эпцефаломиокардита [77]. Об этом свидетельствуют результаты, полученные при определении относительного содержания комплементарных оснований и при изучении тепловой денатурации о том же говорят и устойчивость к панкреатической рибонуклеазе и отсутствие реакции с формальдегидом, а также данные рентгеноструктурного анализа 178, 95]. [c.59]

А. ДНК (а% Г + Ц) из бактериофага. В. ДНК (а% Г + Ц) из бактерии. С. ДНК (а% Г + Ц) из высшего шивотного или из растения. А. ДНК (Ь% Г + Ц Ь я) из бактериофага мол. вес примерно тот же, что и в случае А. А". ДНК (с% Г + Ц с > а) из бактериофага мол. вес. примерно тот же, что и в случаях А или А. А . ДНК такая же, как и в случае А, но в присутствии денатурирующего агента или в условиях, способствующих денатурации. А . ДНК такая же, как и в случае А, но в присутствии стабилизирующего агента. В. Одноцепочечная ДНК. По оси ординат отложена доля денатурированных молекул ДнК 1 — 6), где 0 — отношение наблюдаемого изменения выбранного параметра к максимальному его изменению. [c.149]

При изучении условий действия полимеразы из зобной железы теленка было показано, что, прежде чем ДНК начинает действовать как затравка, водородные связи между полинуклеотидными цепями разрываются и что в действительности роль затравки могут выполнять только однотяжные цепи или (что, по-видимому, более точно) однотяжные участки. Так, неактивная ДНК-затравка легко превращается в активную затравку при тепловой денатурации. Аналогичным образом одноцепочечная ДНК из бактериофага фХ- 74 [c.322]

Помимо обычных трудностей, присущих применяемым методам, истинные значения определяемых молекулярных весов и их связь с длинами цепей ДНК in vivo не могут быть легко определены вследствие легкого разрыва цепей крайне высокого молекулярного веса. Так, по существу монодисперсная ДНК была получена пропусканием раствора полимера через атомизатор. При этом денатурации не происходило, но молекулярный вес ДНК уменьшался, а распределение констант седиментации сужалось [166, 167]. Другие исследования влияния гидродинамического сдвига на ДНК показали, что в условиях перемешивания, которые обычно используются при выделении дезоксирибонуклеиновых кислот, легко происходит фрагментация ДНК путем разрыва двойной цепи, причем ее спиральная структура остается незатронутой [168—170[. Силы разрыва, вызывающие разрезание двойной спирали, были определены путем воздействия контролируемых сил гидродинамического сдвига на ДНК (меченную Р ) из бактериофага Т2. Было найдено, что напряжение, созданное градиентом потока при критическом сдвиге, составляет приблизительно 11-10" дин. Расчет показывает, что это напряжение сравнимо с прочностью связей [c.558]

Что касается низкой гетерогенности бактериальных ДНК по составу (но не обязательно по последовательности), то она очевидна также из данных по определению плотности ДНК методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности [245, 246[. При изучении большого числа дезоксирибонуклеиновых кислот вновь была найдена линейная зависимость между плотностью ДНК и содержанием гуанина и цитозина. Экстраполирование этих результатов показало, что двойная спираль из аденин-тиминового полидезокси-нуклеотида должна иметь плотность 1,662, а плотность соответствующего гуанин-цитозинового полимера должна быть 1,764. Если известна плотность нативной ДНК и ее величина укладывается между этими крайними значениями, то это позволяет точно определять состав ДНК. Соответствующие денатурированные ДНК имеют плотность на 0,015 выше. Если гетерогенность двух препаратов ДНК из животных тканей удалось выявить по увеличению ширины полос, то бактериальные нуклеиновые кислоты характеризуются узким распределением по составу (половина ширины полосы соответствует 3—5 мол. % гуанина + цитозина по сравнению с 11 % для ДНК из зобной железы теленка), а распределение по составу ДНК бактериофага настолько узко, что его не удалось измерить. Избирательная тепловая денатурация ДНК из зобной железы теленка (с низким содержанием гуанин-цитозиновых пар) дает фракцию нативного препарата с более высокой плотностью, чем плотность исходного препарата, из которого она была выделена [245[. [c.577]

Ясно, что ренатурация может быть легко достигнута для более однородных образцов ДНК (например, для тех препаратов, которые дают достаточно узкие зоны при ультрацентрифугировании в градиенте плотности), так как в растворах совершенно гомогенной ДНК после ее денатурации будет наибольшая концентрация комплементарных цепей. Таким образом, наиболее полно будут рена-турировать ДНК бактериофагов, в несколько меньшей степени бактериальные f ДНК и в значительно меньшей степени ДНК из животных тканей (например, из зобной железы теленка), которые весьма гетерогенны по составу (см. также стр. 601, где денатурация и ренатурация обсуждаются более детально). [c.580]

Определены оптимальные условия ренатурации ДНК после ее тепловой денатурации I308]. Концентрация ионов патрия должна быть выше 0,4 М, а температура на 25 ниже температуры плавления. Так как переход спираль — клубок воспроизводим (в отношении физических свойств и тепловой инактивации биологических маркеров), при охлаждении образуется та же вторичная структура, а сколько-нибудь заметного образования неспецифических водородных связей не происходит. Полнота ренатурации увеличивается с увеличением молекулярного веса ДНК и, как и следовало ожидать, заметно зависит от гомогенности препарата. Степень реконструкции вторичной структуры убывает в последовательности для ДНК из бактериофага > мелких бактерий > бактерий > животных тканей, и этот порядок отражает изменение числа различных молекул ДНК и различие нуклеотидного состава, которыми характеризуется каждый из источников ДНК 1308]. Как было показано фракционированием ренатурированной трансформируюшей ДНК при иомош,и ультрацентрифугирования в градиенте плотности, ренатурация не относится к процессам типа все или ничего>л а образование двойной спирали вновь после разрушения может происходить в различной степени [309]. В основном это есть результат случайного расщепления ковалентных связей в полин клеотид-ной цепи при нагревании. При стандартных условиях тепловой денатурации и последующего охлаждения можно рассчитать, что в каждой цепи ДНК с молекулярным весом 10 может происходить в среднем по три разрыва. Поэтому в процессе ренатурации будут участвовать комплементарные цепи с длиной, различающейся на i/i—1/2, что понижает ренату рацию на 20—30% [310]. Действительно, на микрофотографиях часто наблюдаются клубки на одном или на обоих концах ренатурированных цепей, которые соответствуют выступающим концам однотяжных цепей. [c.605]

Описаны аналогичные опыты по иммунологическому изучению тепловой денатурации и ренатурации ДНК из бактериофага Т4 [317]. Глюкозилировапные оксиметилцитозииовые остатки, по крайней мере частично, отвечают за образование антител. Эти детерминирующие группы вполне доступны в денатурированной ДНК. но не в нативной или ренатурированной ДНК. Таким путем удалось показать, что процесс ренатурации ДНК является бимолекулярным, зависит от ионной силы и характеризуется оптимумом температуры при 55". Доказана также и гетерологическая ренатурация ДНК из фагов Т2 и Тб [317]. [c.608]

Полинуклеотидлигаза — фермент, действием которого объясняют процессы, возникающие и развивающиеся в период репликации ДНК на обеих сторонах вилки, образующейся при раскручивании двух цепей нативной ДНК. Предполагается, что ДНК в ходе репликации синтезируется отдельными небольшими фрагментами, которые затем сшиваются в единую структуру полинуклеотидлигазой. Это предположение подтверждается тем, что большая часть вновь синтезированной бактериальной хромосомы или хромосомы бактериофага Т4 после денатурации выделяется в виде коротких цепей ДНК, содержащих от 1000 до 2000 нуклеотидов, которые с помощью полинук-леотидлигазы сливаются в более крупные цепи. [c.67]

Циклические перестановки — структурные огобенности поведения некоторых фаговых ДНК, подвергнутых температурной денатурации и последующему медленному отжигу. Напрнмер, денатурированная линейная двухцепочечная ДНК бактериофага Т2 при медленном отжиге образует кольцевые молекулы, что происходит вследствие того, что популяция молекул фаговой ДНК состоит из набора молекул с циклическими перестановками. Схематически такие структурные перестройки показаны на рис. 34. [c.87]

Рис. 6.16. Локальная денатурация (разрыв водородных связей) ДНК бактериофага Л, подвергнутой ультрафиолетовому облучению (R. S. Stafford, D. Р. Allison, R. О.

Для ответа на данный вопрос кольцевую ДНК этого вируса полностью копировали в присутствии ДНК-полимеразы бактериофага Т4, праймосомы Т4 (комплекс геликазы и РНК-праймазы), различных rNTP (рибонуклеозидтрифосфатов) и dNTP (дезокси-рибонуклеозидтрифосфатов). Затем двухцепочечные кольцевые продукты обрабатывали рестриктазой, которая расщепляет двойную цепь в специфическом участке. Продукты этого расщепления подвергали денатурации, после чего анализировали последовательность нуклеотидов ДНК методом гель-электрофореза с высоким разрешением. Было обнаружено много отдельных полос. Если продукты расщепления до электрофореза обрабатывали РНКазой, то все они становились на пять нуклеотидов короче, о чем свидетельствовала более быстрая миграция их в секвени-рующем геле. [c.25]

Рис. 5-36. Образование смеси гетеродуплексов и гомодуплексов в результате денатурации и ренатурации двух различных геномов бактериофага лямбда, содержащих ТпЮ (задача 5-44). Фаговая ДНК изображена линиями, а Тп10 в виде прямоугольников. Мутационные различия между двумя элементами ТпЮ показаны белыми и черными сегментами.

Концентрация реагентов, при которой при температуре 73 С и ионной силе 0,043 происходит 50%-ная денатурация ДНК из бактериофага Т4 Е. oli (определенная методом фиксации комплемента) [c.266]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология