Оттенение металлами

РНК высушена из замороженного состояния и контрастирована путем оттенения металлом (как описано в подписи к рис. 33) [c.86]

Выловленные из воды на сетку реплики, в особенности кварцевые и металлические, часто разрываются при высыхании из-за большого поверхностного натяжения воды. Для предотвращения разрыва на влажные реплики следует последовательно нанести капли спирта и эфира, отсасывая избыток жидкости полоской фильтровальной бумаги. Чистые углеродные реплики не смачиваются водой, но оттененные металлом уже требуют принятия этих мер предосторожности. Другая причина разрыва реплик заключается в неровной поверхности плетеных сеток. Поэтому для вылавливания реплик следует применять хорошо прокатанные, а еще лучше плоские металлические или коллодиевые сетки. / 7 // — [c.109]

Однако по отношению к оттененным металлом репликам полностью остаются справедливыми замечания, сделанные ранее применительно к методу оттенения — разрешение здесь в основном определяется зернистостью напыленного слоя,что, в свою очередь, зависит от природы поверхности и металла и условий напыления. Поэтому результаты, получаемые различными авторами в различных условиях, могут существенно отличаться друг от друга, в особенности в случае предварительно оттененных реплик. Это следует всегда иметь в виду и не прида- [c.113]

Подобными же недостатками страдают снимки, полученные с препаратов, оттененных металлами, например, хромом, сплавом Р1 —Рд и т. д. [9, 11]. В этих случаях на отдельных микрофибриллах наблюдаются дискретные области контраста, принимаемые за периодичность вдоль фибрилл. Можно думать, однако, что часто эта структура обусловлена склонностью тонких металлических слоев образовывать мелкие зерна диаметром в 30—50 А, как это отчетливо видно на снимке молекулы ДНК, оттененной сплавом Р1—Рс1 (рис. II. 12, а). [c.105]

Еще более прямым доказательством этого факта может служить электронная микрофотография оттененной металлом поверхности воды (рис. 32.8). Стеариновая кислота плохо растворима в воде, но ее карбоксильная группа -СООН весьма гид- [c.63]

Рис. 35. Метод оттенения металлами в электронной микроскопии. Длина тени в направлении пучка атомов металла равна /г с1 0, где /г—высота частицы и 0—угол, под которым атомы металла попадают

Рис. 154. Электронно-микроскопическая фотография типичных монокристаллов полиэтилена, полученных кристаллизацией из раствора и оттененных металлом [341

Рис. 4-21. Схематически показан метол приготовления реплики с поверхности образца (оттенение металлом).

Поскольку в этом случае в микроскопе под вакуумом наблюдают не образцы, а реплики, полученные после оттенения металлом, методы замораживание - скалывание и замораживание - травление можно использовать для изучения замороженных нефиксированных клеток и исключить риск проявления артефактов, вызванных фиксацией. [c.188]

При работе с материалами, оттененными металлами, полезно помнить, что на обычных фотографических снимках тени выглядят светлыми. Лишь на негативе или на негативном отпечатке они будут темными. [c.238]

Рис. VI.4. Схема оттенения металлом ренлики.

Рис. 33. Электронные микрофотографии индивидуальных 70S рибосом Е. соИ, демонстрирующие их подразделение на две неравные субчастицы (малая сверху и большая снизу) (предоставлены В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино) а - рибосомы контрастированы с помощью техники оттенения металлом. В этом случае, чтобы обеспечить надлежащий контраст, супензия выделенных 70S рибосом наносится на поверхность углеродной пленки и высушивается из замороженного состояния затем на частицы наносится ультратонкий слой металла (вольфрама или вольфрамо-рениевого сплава) путем его испарения в вакууме из такого положения, что частицы металла летят под определенным углом (в данном случае около 75 ) к поверхности пленки получаются оттененные металлом ч стицы e — рибосомы контрастированы с помощью техники негативного контраста, как описано в подписи к рис. 32.

Рис. 51. Электронная микрофотография молекул изолированной рибосомной 23S РНК Е. oli в компактной форме и их контуры (слева) (предоставлена В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино) три различных проекции пронумерованы цифрами 1, 2 и 3. РНК высушена из замороженного состояния и контрастирована путем оттенения металлом (как описано в подписи к рис. 33)

Углеродные реплики благодаря их ценным качествам (прочность, устойчивость, обеспечение высокого разрешения) получают со многих объектов, подлежаш их исследованию в электронном микроскопе. Для изготовления углеродных реплик, так же как и для углеродных пленок-подложек, применяют метод термического распыления угля, который описан выше при получении углеродных пленок-подложек. С помош ью этого метода можно получить углеродные реплики тол-ш иной 50 А и ниже, однако они не обеспечивают достаточного контраста при пол5М1ении микрофотографии. Для повышения контраста обычно прибегают к оттенению тяжелыми металлами или к само-оттенению путем напыления углерода под некоторым углом к поверхности образца. Оттенение металлом может быть либо предварительным, либо последующим. В первом случае оттеняющий слой металла наносят непосредственно на образец, а затем на оттененную поверхность напыляют углерод. Во втором случае уже готовую углеродную реплику оттеняют металлом. [c.186]

В настоящее время при исследовании углеродных отпечатков широко используют так называемое самооттенение. Для получения самооттененных отпечатков на исследуемый образец напыляют под острым углом углерод. В результате этого отпечаток будет иметь, как и при оттенении металлом, неравномерную толщину, зависящую от наклона данного участка образца к пучку частиц напыляемого углерода. В местах, обращенных к источнику напыления, откладывается наибольшее количество углерода, а на участках, расположенных в стороне от источника,—наименьшее. В местах, соответствующих теням, имеется очень незначительное количество углерода в результате миграции его по поверхности образца и отражения частиц от стенок вакуумного колокола. Соответственно увеличивается и контрастность изображения. [c.188]

Выбор пленок того или иного типа в качестве подложек в значительной степени зависит от характера объекта, так как по своей прозрачности в отношении электронного пучка все пленки, образованные легкими элементами, не намного отличаются друг от друга. Необходимо учитывать, как указывалось выше, гидрофильность или гидрофобность пленки, если объект наносится из суспензии, а также величину частиц объекта. Например, для исследования гидрозолей вполне пригодны коллодиевые пленки, так как взаимодействие электронов с малыми по размерам коллоидными частицами не вызывает эффектов, повреждаюш их пленку. Если препарат оттенен металлом, то это приводит к заметному укреплению пленки. При исследовании более крупных частиц из водных суспензий хороши пленки из 310 или кварца, которые значительно более устойчивы под электронным пучком, чем пленки из полимеров. Для препарирования объектов, взвешенных в органических растворителях, например суспензий саж в ксилоле, наилучшими являются углеродные пленки. Если требуется объект на подложке прокаливать в окислительной атмосфере, то следует применять пленки из окислов кремния или алюминия и т. д. Пленки из окиси алюминия менее удобны в том отношении, что для их изготовления необходимо иметь отдельную, хотя и не сложную, аппаратуру, тогда как другие пленки получают при помош и стандартной установки для испарения или простейшего оборудования. [c.68]

Гаррис [93] предложил способ, позволяющий определять размеры капель туманов нелетучих жидкостей, которые не смешиваются с водой. Капли осаждают на тонкую влажную пленку 2%-ного водного раствора желатины, нанесенную на стеклянную пластинку. После высушивания пленки капли смывают, например, бензолом, причем на пленке остаются отпечатки, оставленные растекшимися каплями. С этих следов при помощи двухступенчатого метода (используя коллодий в качестве материала для промежуточного отпечатка) получают оттененную металлом углеродную реплику, которую и изучают в электронном микроскопе. Из определенных таким образом диаметров отпечатков вычисляют диаметры исходных капель при помощи коэффициента растекания, который устанавливают для больших капель в световом микроскопе, используя опти ческие свойства растекшихся капель, принявших форму двояковыпуклых липз. [c.158]

Известен ряд случаев, когда применение электронного микроскопа позволило убедиться в существовании вторичных структурных неоднородностей в аморфных полимерах, а также, в связи с этим, судить о степени совместимости различных полимеров. Нанример, всем работающим в области электронной микроскопии хорошо известно, что на пленках нитроцеллюлозы, ацетилцеллюлозы, полистирола и т. п., нолученйь1х на поверхности жидкости, после оттенения металлом заметен рельеф поверхности. Это обстоятельство может быть связано с существованием неоднородностей (роев молекул) в пленках полимеров [39]. Уже при незначительном растяжении тех же полимеров, не способном привести к ориентации молекул, в местах разрыва пленок нередко обнаруживаются тонкие нити толпщ-ной 100—250 А. Это >10жн0 рассматривать как свидетельство о существовании известного упорядочения в расположении цепных молекул в аморфных полимерах. В той же работе было непосредственно электронно-микроскопически показано, что аморфные и кристаллические полимеры не совмещаются. При растяжении пленок, приготовленных из натурального каучука и полиэтилена, взятых в соотношении 1 1, образовывались нити и можно было отчетливо наблюдать, как разделялись компоненты смеси, что и указывало на их несовместимость. [c.255]

На рис. 120 показано получение самооттененных угольных реплик. Уголь наносят на препарат не под прямым углом, как для угольных феплик, предварительно оттененных металлом, а наклонно. При этом на сторонах, обращенных в сторону источника оттенения, отлагается наибольшее количество угля, а на затененных — наименьшее. Благодаря отражению угля от стенок вакуумного колокола и способности угля частично мигрировать по поверхности, он отлагается и внутри теней от выступов объекта. Таким образом, при наклонном нанесении угля на поверхность образца пустых промежутков, совсем лишенных угольной пленки, не получается, а образуется сплошная реплика с различной толщиной на разных участках рельефа исследуемой поверхности. Вследствие этого различия создается контраст в изображении. [c.372]

Рис. 120. Схема получения предварительно оттененной металлом (а, б) н самооттененной углеродной реплики (в)

Таким образом, высоте объекта дается предварительное увеличение в виде его тени, отбрасываемой на подложку. Металл, употребляемый для этой цели, должен давать непрерывную пленку подходящими металлами являются хром, золото, уран. Специфическим преимуществом этого метода является возможность достигнуть удовлетворительной контрастности для таких частиц, которые обладают слишком малой задерживающей способностью, чтобы давать обычным путем изображение с хорошим контрастом [127]. Другим преимуществом теневого метода является то, что при этом получаются препараты, более устойчивые к электронной бомбардировке, чем большинство исходных препаратов, из которых они изготовляются. Согласно Уайкову, оттенение металлом настолько улучшает возможности фотографирования молекул, что практически нижний предел тех молекулярных размеров, которые теперь могут быть различимы, определяется молекулярными неоднородностями подложки, если коллодий или формвар обладают таковыми. Однако влияние структуры этих материалов большей частью может быть устранено применением метода реплик, при котором молекулы оттеняются металлом на гладкой стеклянной поверхности и получающаяся металлическая пленка переносится на неоттененный пластик. Хилер и Бейкер [128] описали метод приготовления препаратов бактерий, который заключается в том, что поверх колонии бактерий, растущей на поверхности агар-агара, наносится [c.327]

При рассмотрении электронных микрофотографий, полученных с препаратов, оттененных металлом (фото 6), создается впечатление, что вирусная РНК расположена в центре палочки. действительности в цептре палочки имеется полый канал, а PliK погружена в белковую оболочку. Наличие этого центрального полого канала впервые было продемонстрировано Хаксли [851], использовавшим при негативном контрастировании фосфо-вольфрамовую кислоту (фото 7). [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология