Микросом препараты

В полученных разными методами препаратах микросом определяют содержание белка, учитывая, что теоретический выход препаратов по белку составляет 20—30 мг на 1 г ткани. [c.373]

В дальнейшей работе используют препараты микросом, полученные методом низкоскоростного центрифугирования (Са-микросомы). [c.373]

РНК обнаружена в препаратах микросом, ядер, митохондрий, хлоропластов и в растворимой фракции растительных клеток. Относительные количества РНК, найденные в различных фракциях, широко варьируют и могут изменяться по мере развития организма. По-видимому, какая-то часть РНК, обнаруженной в разных фракциях, обусловлена загрязнением рибосомами, которые, вероятно, и содержат основную массу РНК. У животных и у микроорганизмов количество рибосомной РНК составляет до 90% от ее общего количества в клетке. Справедливо ли такое же [c.475]

Этот вопрос может быть решен только путем фракционирования микросом, однако такая процедура требует предварительного растворения микросом, а все попытки растворения приводили к утрате активности. Инактивация, возможно, связана с тем, что растворимые препараты микросом нуждаются в иных, конечных акцепторах электронов, чем кислород однако такая возможность до сих пор не изучена. Другой путь исследования мог бы состоять в открытии ингибиторов, специфичных по отношению к начальным ферментам такие ингибиторы могли бы, например, затормозить систему, активирующую шрадан, не влияя на способность микросом активировать паратион. [c.172]

Работа выполнена на субклеточных фракциях головного мозга кроликов. Субклеточные фракции микросом, миелина и синаптосом получены с помощью метода дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы (Белик и др., 1969). Первоначально были использованы водные растворы следующих ПАВ тритон Х-100, трис-дезоксихолат (дезоксихолевая кислота, нейтрализованная 1 М раствором трис до нейтральной реакции по бромтимоловому синему), додецилсульфат натрия и дигитонин. В ходе работы по определению ККМ оказалось желательным исследовать влияние ряда других ПАВ дезоксихолата натрия, октил-сульфата натрия, а также провести сравнение двух препаратов дигитонина. [c.119]

Рис. 27. Поглощение Са2+ суммарной фракцией мембран саркоплазматического ретикулума из сердец голубя (1) т морской свинки (2) (А) и кинетика поглощения Са + препаратом микросом сердца морской свинки в начальный промежуток времени (Б)

Данный феномен получил в дальнейшем простое объяснение. Кофеин действительно взаимодействует с определенным белком (частью кальциевого канала) на поверхности мембраны саркоплазматического ретикулума. Однако рецептор для кофеина не располагается равномерно в сети ретикулума, а локализован в терминальных цистернах. Поэтому добавление кофеина к нефракционированному препарату микросом, к тому же не полностью насыщенному Са +, вызывало выход катиона из фрагментов терминальных цистерн и не затрагивало Са -ь, [c.86]

Несмотря на некоторое сходство, система транспорта Са + тромбоцитов по структуре, вероятно, не идентична (Ia-транс-портной системе саркоплазматического ретикулума. Во-первых, концентрация Са-транспортирующего фермента в микросомах тромбоцитов невелика и, во-вторых, активность микросом из тромбоцитов в десятки раз уступает таковой в препаратах ретикулума. Как видно из рис. 33, процессы, обеспечивающие [c.95]

Полярографический метод. Измерение скорости потребления кислорода препаратами микросом проводили с помощью стационарного платинового электрода открытого типа на полярографе ЬР-60. [c.59]

Получение препарата микросом из печени крысы. Все операции по получению мембранных препаратов проврдят при 0°С. [c.371]

Препарат хранят при —20 °С в течение 2 нед. Белок в препаратах микросом определяют микробиуретовым методом в присутствии 1%-ного дезоксихолата натрия (с. 81). [c.372]

Активация глюкоэо-6-фосфатазы детергентами. Процедура активации фермента в мембранных препаратах проводится прй 0°С под действием тритона Х-100 или дезоксихолата натрия. К 0,9 мл суспензии микросом (примерно 20 мг белка) добавляют 0,1 мл детергента до необходимой концентрации. Через 10 мин инкубации при помешивании действие детергентов прекращают пятикратным разведением суспензии 0,25 М сахарозой. Обработку микросом детергентами проводят непосредственно перед началом экспериментов. [c.372]

Определяют гидролазную активность фермента в полученных разными методами препаратах микросом в день выделения и после хранения. Перед определением активности фермента в неактивированных мембранных препаратах суспензию микросом разводят сахарозой в [c.373]

То, что рибонуклеопротеидные гранулы (рибосомы) не равномерно диспергированы в цитоплазме животных клеток или в препарате частиц, полученных из микросом, а часто собраны в группы (цепи или кластеры), было отмечено еще в ранних электронно-микроскопических наблюдениях Дж. Паладе и др. Доказательство того, что такие агрегаты рибосом представляют собой частицы, соединенные цепью мРНК и находящиеся в процессе трансляции, были представлены одновременно несколькими группами в 1963 г. [c.55]

За период с 1936 по 1960 г. с помощью методов дифракции рентгеновских лучей, поляризационной микроскопии, измерений электрических характеристик мембран, их проницаемости и поверхностной активности были получены многочисленные факты, свидетельствующие в пользу моделей Даниелли — Давсона. Но наиболее мощную поддержку эта модель получила на рубеже 1950—1960 гг. благодаря прогрессу, достигнутому в технике приготовления ультратонких срезов тканевых препаратов для электронной микроскопии. На полученных микрос тографиях различных мембран была отчетливо видна трехслойная структура толщиной [c.582]

Таурин, подобно глицину, содержится в желчи в виде парного соединения с холевой кислотой. Синтез таурохолевой кислоты осуществлен при помощи препаратов микросом из печени морской свинки, катализирующих следующие реакции [1116] [c.384]

После того как были получены эти сведения, можно было уже попытаться наметить какую-то схему биосинтеза холестерина, которая объясняла бы указанный способ включения ацетата. Ряд данных наводил на мысль, что главными промежуточными продуктами в биосинтезе холестерина иа ацетата являются мевалоновая кислота и сквален. Процесс биосинтеза удобнее рассматривать по отдельным стадиям. Таких ключевых стадий три 1) превращение ацетата в мевалонат, 2) синтез сквалена из малоната и 3) переход от сквалена к холестерину. Биосинтез мевалоната из ацетата был впервые продемонстрирован в опытах с бесклеточными препаратами из печени крысы. Реакция протекает в присутствии растворимых ферментов, микросом, КоАЗИ АТФ, глутатиона, восстановленного НАДФ и ионов [c.414]

Подобно ароматическим углеводородам ароматические амины при "метаболических превращениях in vitro под действием микросом-ных препаратов из печени, активированных восстановленным НАДФ, и в присутствии кислорода дают те же продукты, которые образуются и in vivo [c.153]

Как показали недавно проведенные опыты, во всех частях покоящегося семени синтез белка может быть полностью выключен [49]. Является ли это следствием структурной неполноценности рибосом или отсутствия информационной РНК, еще не выяснено. В препаратах неотмытых микросом из семядолей ненабухших семян земляного ореха наблюдается лишь незначительное включение аминокислот в белок. В то же время аналогичные препараты из набухших семян быстро включают аминокислоты. Имеются данные, указывающие на то, что во время поглощения воды происходит активация или синтез информационной РНК [49]. [c.481]

В более поздних работах, выполненных на мышах, О Брайн [72, 73] подтвердил данные Дейвисона для печени крыс, но он показал, что если вместо ДПН использовать ДПН-Н, то можно исключить надосадочную фракцию. Вероятно, роль этой фракции в опытах Дейвисона сводилась к восстановлению ДПН до ДПН-Н. Приведенный выше пункт б можно было объяснить наблюдением, что окисление ДПН-Н почками кролика тоже тормозится шраданом, хотя этот препарат совершенно лишен способности активировать шрадан. Далее, количество шрадана, подвергавшегося активированию, было очень небольшим по сравнению с общим количеством ДПН-Н, которое использовалось препаратом микросом. [c.162]

Иначе говоря, активирование шрадана связано с утилизацией ДПН-Н, но на эту реакцию используется лишь небольшая часть ДПН-Н, потребляемого микросомами. Что касается приведенного выше пункта а , то он может быть объяснен недостаточной чистотой препаратов пиридиннуклеотидов, применявшихся Дейвисоном. Этим же можно объяснить и другое расхождение Дейвисон сообщил, что неочищенный ТПН (трифосфопиридиннуклеотид) или ТПН-Н неэффективны, тогда как О Брайн показал, что при использовании комбинированного препарата микросом и надосадочной жидкости ТПН несколько более эффективен, чем ДПН. [c.163]

Способность препаратов печени активировать паратион полностью исчезала после ее гомогенизации, и это явление существенно задержало дальнейшее изучение активирующей системы. Дейвисон [29] нашел, что активирующая способность гомогенатов печени крысы может быть восстановлена путем добавления магния и ДПН (дифосфопиридиннуклеотида) вместе с никотинамидом точно так же, как это наблюдалось при активировании шрадана. Активность обработанных таким образом гомогенатов была сосредоточена только во фракции микросом и надосадочной жидкости. Каждая из этих фракций сама по себе обладала некоторым действием, но полное активирование паратиона достигалось только при совместном применении обеих фракций. Различные гуггибиторы влияли на эту систему так же, как и на систему активирования шрадана, описанную выше. [c.167]

При скармливании урацильных препаратов остаточное содержание бромацила в молоке состЗ Вляло приблизительно 4 %, тербацила— от 0,25 до 0,6% от концентрации в корме. Под действием секрета рубца, гомогената печени и надосадочной жидкости, полученной при отделении микросам при 10 000 д, бромацил и тербацил не разлагаются [100]. [c.192]

Присутствие примесей в растворе ПАВ изменяет концентрационную область перехода их из истиннорастворенного в коллоидное состояние. Было определено значение ККМ для чистых водных растворов ПАВ и в системе, содержащей микросомы. Полученные экспериментальные данные представлены в табл. 2. Для удобства сравнения в ней приведены также концентрации ПАВ, активирующие Mg +-, Na -, К " -АТФазу. Оказалось, что для каждого ПАВ величина ККМ превышает его активирующую концентрацию. Разница между этими величинами значительна для всех изученных ПАВ, за исключением дигитонина (препарат № 1), для которого эта разница наименьшая. Возможно, что величина ККМ в данном случае занижена вследствие содержания в этом препарате электролитов. Известно, что добавки электролитов к водным растворам чистых ПАВ приводят к значительному (но до определенного значения) понижению их ККМ (Демченко, 1961, 1962). Дальнейшее увеличение добавок электролитов практически не влияет на ККМ, однако понижает растворимость ПАВ. Растворимость препарата дигитонина № 1 была действительно понижена. Поэтому мы исследовали другой препарат дигитонина (препарат № 2). Значение ККМ для этого препарата значительно выше, а именно в водном растворе 4.2 г/л, а в суспензии микросом 3.4 г/л, что свидетельствует о большей его чистоте. На этом препарате в отличие от первого наблюдали явление снижения величины ККМ под влиянием добавок (суспензия микросом). Этот факт согласуется с утверждением о том, что при добавке других менее эффективных веществ к препарату ПАВ, загрязненному электролитами, изменение ККМ зарегистрировать не удается. [c.124]

ИЗ уксусной кислоты, являются ферменты, содержащиеся в мик-росомах и надосадочной фракции гомогенатов печени крысы. Используя в качестве исходного вещества сквален, полученный в результате биосинтеза. Блох и Чен обнаружили, что если система ферментов содержит целые микросомы, то в выделяемом холестерине содержится в 10 раз больше С ", чем в ланостерине. Однако при использовании препаратов, не содержащих целых микросом, количество С в холестерине незначительно по сравнению с его содержанием в ланостерине. На основании этого был сделан вывод, что с целыми микросомами протекает как реакция циклизации, так и деметилированле, в то время как препараты, не содержащие этих частиц, способны вызывать только циклизацию, но не деметилирование образующегося ланостерина. Эти работы и ряд подобного рода доказательств привели к заключению, что цепь превращений сквален-> ланостерин холестерин представляет собой основной путь в биогенезе стероидов. [c.418]

Они необходимы для функционирования гидроксилаз, действующих на биолипиды, а также на лекарственные препараты [2051]. Сходные гемопротеиды обнаружены у бактерий, например у псевдомонад [2051]. Но особое значение, по-видимому, имеет тот факт, что, согласно результатам анализа последовательности аминокислот в белковой части цитохрома эндоплазматической сети клеток млекопитающих, т. е. микросом, между этим цитохромом и митохондриальным цитохромам с имеется лишь отдаленное сходство [1221]. Если эти внемитохондриальные цитохромы произошли в эволюции от клеточной мембраны, то исходным хозяином митохондрий была бы фотосинтезирующая клетка 14, Д 19, Е). [c.186]

Высказана гипотеза, что системы митохондриального и ретикулярного транспорта Са + в клетках функционируют синхронно (G. Fiskum, А. Lehninger, 1982). Показано, что энерги-зованные митохондрии печени в суспензии понижают концентрацию свободного Са + до 0,5 мкмоль/л, а внесение в среду печеночных микросом приводит к дальнейшему уменьшению уровня Са + до 0,2 мкмоль/л. Аккумуляция Са + препаратом эндоплазматического ретикулума сопровождалась снижением уровня митохондриального Са - - на 7 нмоль/мг белка. Таким образом, можно предположить, что в зависимости от уровня клеточного Са + каждая из кальцийтранспортирующих систем (митохондрии или эндоплазматический ретикулум) в той или иной степени участвует в регуляции концентрации свободного Са +. [c.47]

Основной интегральный белок в / -трубочках скелетных мышц Мд-АТФаза — полипептид с молекулярной массой 103— 107 кД. Из-за высокой каталитической активности этого фермента (свыше 15 мкмоль Р /мг белка в 1 мин в мембранных препаратах, обогащенных / -трубочками) и близости молекулярных масс Са-АТФазы саркоплазматического ретикулума и Мд-АТФазы долгое время предполагали, что Mg-ATФaзa, присутствующая как примесь в препарате саркоплазматического ретикулума, представляет собой модифицированную Са-АТФазу. Этот фермент называли базальной АТФазой ретикулярных мембран (на фоне базальной АТФазы в препарате микросом дополнительно проявлялась активность Са-стимулированной экстра-АТФазы). Предполагали, что базальная и экстра-АТФа-зы способны к взаимному превращению. В пользу этого свидетельствовал тот факт, что при воздействии детергентов активность Mg-АТФазы исчезает, а активность Са-АТФазы увеличивается. [c.58]

Длй количественной оценки эффективности С1ЮС0ба выделения субклеточных структур можно использовать метод, предложенный А. И. Арчаковым и соавторами (1973). Суть его заключается в следующем. Определив общую активность индикаторных ферментов мёмбран цитоплазматической сети в исходном гомогенате и полученном препарате (активность ферментов рассчитывают на общее количество белка гомогената или фракции), можно легко рассчитать выход микросомной фракции в процентах от содержания ее в гомогенате. Измеряя удельную активность индикаторных ферментов цитоплазматической сети (выделяемая структура) и загрязняющих препарат структур (митохондрий, лизосом, пероксисом) в гомогенате и изолированном препарате микросом, можно рассчитать степень очистки фракции по формуле [c.52]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология