Матрицы агароза

Молекула глютатиона выступает здесь в качестве гидрофильного спейсера. Во втором лигандом служит 1-тио-2-оксипропил, присоединенный к матрице агарозы прочной эфирной связью [c.395]

Определение количества субъединиц, вступивших в реакцию, проводится путем сравнения концентрации иммобилизованного белка до и после обработки 8 М мочевиной. Снижение концентрации белка в суспензии агарозы после инкубации в мочевине в 4 раза позволяет использовать препарат ЛДГ для получения мономера. Обработка иммобилизованного белка 1,5 М мочевиной приводит к разрушению нековалентных взаимодействий между субъединицами ЛДГ, но не влияет на ковалентную связь субъединицы с матрицей (агарозой). Удаление мочевины из системы при промывании буфером ведет одновременно и к удалению диссоциировавших субъединиц. Остающийся связанным белок является мономером ЛДГ, который используется для дальнейших исследований. [c.386]

На рис. 2 представлена предполагаемая структура агарозной матрицы. Агароза обладает достаточно большими порами, в которые легко проникают белки с молекулярными массами до нескольких миллионов, и в то же время жесткость агарозы достаточна для придания ее частицам сферической формы, что обеспечивает хорошую скорость потока. Полагают, однако, что сохранение размеров пор связано с образованием водородных [c.13]

Если названные обстоятельства не лимитируют концентрацию лигандов в сорбенте, то естественно, что с позиций полноты использования матрицы следует увеличивать эту концентрацию вплоть до максимума, обусловленного плотностью расположения активированных групп на матрице (для 4%-ной агарозы и ц/.люлозы — до 0,1 М). [c.401]

К матрице аффинного сорбента, помимо общих для всех хроматографических матриц требований (нерастворимость п гидрофильпость, жесткость, подходящая форма и размер гранул, химическая стабильность в условиях модификации и в самом хроматографическом процессе, отсутствие неспецифической адсорбцип ж др.), предъявляется требование наличия химических групп, позволяющих с помощью несложной химической реакции ковалеитио связывать с матрицей разнообразные биологические молекулы (лиганды и спейсе-ры). Наиболее удобными с этой точки зрения оказались гидроксильные группы полисахаридных матриц — агарозы и сефадексов, а также амидные группировки полиакриламидного геля. Если иметь в виду аффинную хроматографию белков или использование белко- [c.342]

Стабильность матрицы агарозы можно значительно повысить путем сшивания эпихлоргидрином [34, 56], 2,3-дибромпропанолом [34, 36] или дивинилсульфоном [34, 58] перед активацией бромцианом. Устойчивость в водной среде как в кислой, так и в щелочной областях (pH 3—14) растет с увеличением числа сшивок. Возможность использования хаотропных солей, главным образом для элюирования антител, обсуждается в разд. 10.2. Благодаря сшиванию гели приобретают большую устойчивость в органических растворителях, таких, как спирт, диметилформамид, тетра-гидрофуран, ацетон, днметилсульфоксид, хлороформ, хлористый метилен, дихлорэтан и дихлорэтан — пиридин (1 1). [c.188]

В обычной аффинной хроматографии для иммобилизации субстратов в качестве носителей используются агароза и сшитая сефароза. В качестве сшивающего агента обычно выступает ВгСМ, а мостик образован а,о)-диамином. Эти полисахаридные носители подвержены биодеградации, и, следовательно, органические полимерные гели более удобны в качестве матрицы и допускают более широкий набор химических модификаций. Именно эти причины побудили Уайт-сайдса и сотр. разработать новый метод иммобилизации ферментов в сшитых органических полимерных гелях [126]. По своей простоте и универсальности этот метод превосходит ранее предложенные. Особенно ценен он при иммобилизации относительно лабильных ферментов для использования в ферментерах большого размера при проведении реакций органического синтеза, катализируемых ферментами. [c.257]

Свойства агарозы были рассмотрены в первой книге >той серии, посвященной электрофорезу [Остерман, 19811. Однако ввпду центральной роли, которую играют агарозные матрицы в иекотор .г хроматографических методах (гель-фнльтрация, аффинная хроматография), имеет смысл привести здесь некоторые данные еще раз. Как и [c.53]

UlLrogel АсА — еще один вариант жесткой матрицы, обеснечп-вающе широкие возможности выбора размера иор. Здесь контролируемая пористость ПААГ сочетается с жесткостью агарозы — сетка ПААГ полимеризуется внутри жесткого каркаса агарозы. Химнчес- [c.55]

Матрицам на основе акриламида (биогелп серии Р ) в меньшей степени, чем софадексам, свойственна ионная сорбция (можно элюировать и водой), но гидрофобную сорбщш они проявляют заметно. Так, на биогеле Р2 для урацила и цитозина мояшо получить К 1,8, а для адепина и гуанина — Kd 3,1. Агароза обнаруживает склонность как к гидрофобной сорбции, так и к ионной (за счет остатков сульфокислоты). [c.114]

Как видно из нриведеппых данных, процентное содержание агарозы в гелях отражено в маркировке этих матриц. Диаметры здесь даны для набухших гранул. На рис. 62 представлены графики селективности матриц сефарозы. [c.119]

Аналогичные динамические характеристики для ультрогелей серии А представлены на рис. 70. Фирменными данными для матриц Ultrogel АсА мы не располагаем. Судя по его составу, следует проявлять осторожность при работе с ультрогелем АсА22 (2% агарозы и 2% ПААГ). [c.129]

Если для данного, не слишком широкого интервала молекулярных масс можно выбирать из нескольких матриц, графики селективности которых перекрывают этот интервал, то предпочтительно выбрать ту из них, для которой интервал Kav будет лежать ближе к пределу исключения (область малых значений /Tav)- Фракционирование займет меньше времени, а разрешение пиков от этого выиграет кроме того, улучшатся условия для сохранения биологической активности. Ультрогели серии АсА, а также сефадексы и биогели серии Р средней и крупной пористости могут в этом плане оказаться наиболее подходящими матрицами, так как пределы исключения для них ниже, чем у других сефадексов и гелей агарозы. [c.134]

Никаких неприятностей не происходит, если воспользоваться сшитой агарозой. По данным Ансари и Мэйг, колонка с сефарозой L-6B выдерживала воздействие 6 М гуанидинхлорида без видимых изменений своих характеристик в течение 10 мес. Жесткость матрицы позволила им увеличить скорость элюции до 6,8 мл/см -ч. Авторы использовали колонку размером 1,5 х 90 см, а элюцию вели 6 М раствором гуанидинхлорида в 0,1 М Na-фосфатном буфере. pH 7. Для семи белков с молекулярными массами от 2900 до 69 ООО был получен совершенно линейный калибровочный график [Ansari, IVIage, 19771. [c.153]

Агароза — очень гидрофильный материал с крупныл1и норами и весьма жесткой матрицей, каркас которой образуют пучки линейных молекул полимера, связанных водородными связями. Модификация происходит также по гидроксилам полисахарида, но лишь на поверхности пучков каркаса и поэтому — с относительно малой плотностью расположения ионогенных групп. Химическая стойкость невысока. Сшитые агарозы фирмы Pharma ia (типа Sepharose L ) обладают повышенной химической и тепловой устойчивостью и еще большей жесткостью, чем обычная агароза. [c.251]

По размерам пор новые обменники не уступают агарозе, обеспечивая АГ скл= 10 (для глобулярных белков). Изменения pH и ионной силы элюента яе вызывают набухания или сжатия гранул. Свободный объем колонки, упакованной монодисперсными сферами, составляет около 40% ее полного объема ввиду отсутствия мелких гранул колонки, заполненные Моно Beads , создают малое сопро-, тивление для протекания элюента. Специалисты фирмы утверждают-что белки не обнаруживают каких-либо неспецифических взаимодействий с материалом новой матрицы. Как ун<е указывалось, но вые ионообменники поставляются только в готовых к использованию колонках. Для обеспечения хорошего разрешения белковых пиков рекомендуется загружать эти колопки из расчета не более 5 мг белка на один пик. [c.277]

Во всех приведенных примерах реактивная группа активированной матрицы реагирует с нуклеофильным атомом азота в непротонп рованной аминогруппе. Для успешного протекания эти реакции приходится вести в более или менее щелочной среде. Недавно был предложен новый вариант активации матриц, несущих ОН-групиы (агароза, целлюлоза и др.), при котором образуется очень реактивная, так называемая трезилатная группировка (см. ниже). Присоединение лиганда идет с замещением всей этой группы в очень мягких [c.346]

Таким образом, здесь рекомендуется следующее соотношепие 100 мг Br iV на 1 мл набухшей агарозы. Иногда его увеличивают в два и даже трп раза в пользу Br N для получения более высокой плотности расположения (концентрации) активных групп на матрице. Забегая вперед, заметим, что это далеко не всегда выгодно. [c.349]

Недавно фирма Pier e начала выпуск аффинного сорбента для очистки гликопротеидов под названием Gly o-Gel В , в котором борная кислота закреплена непосредственно на матрице 6 %-ной агарозы. [c.374]

Довольно высокая концентрация соли, которую рекомендуется вводить в буфер для связывания лиганда (0,5 М), нужна для блокирования неспецифической сорбции ионного характера, которая свойственна Br N-активированной агарозе. Напомним, что лиганд связывается с матрицей через остаток изомочевины, который относительно легко протонируется с появлением положительного заряда на присоединенном двойной связью атоме азота [S hnaar et al., 1977]. [c.377]

Однако значительно большие возможности открывает нековалентное связывание НК с матрицей целлюлозы. Во-первых, его удается осуществить и для относительно малых фрагментов НК, а во-вторых, с целлюлозой можно связать и нативную двунитевую ДНК. Способы такого связыпания исиользуют неспецифическую сорбцию, вернее, запутывание нитей НК в сетке целлюлозы. Здесь ото происходит успешнее, чем в агарозе, у которой пустоты крупнее, а инти собраны в плотные жгуты. Во многих сл учаях связь оказывается достаточно прочной, чтобы обеспечить надежное задержание НК в колонке аффинного сорбента в условиях многократных промывок, связывания и элюции очищаемых макромолекул. [c.392]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология