Удаление мочевины

Фиг. 42. Схема, иллюстрирующая денатурацию и ренатурацию белка. Полипептидная цепь нативного белка, свернутая и скрепленная внутримолекулярными дисульфид-ными мостиками, развертывается в результате восстановительного разрушения этих мостиков в 8 М мочевине с добавлением -меркаптоэтанола. После удаления мочевины и меркаптоэтанола происходит

Самосборка белков. Специфическое взаимодействие определяет уникальное свойство белков — их способность к самосборке. Например, после обработки молекулы гемоглобина мочевиной она распадается на функционально неактивные протомеры. После удаления мочевины они самопроизвольно объединяются в нативную структуру гемоглобина. Возьмем более поразительный пример — гигантскую молекулу вируса табачной мозаики с 40 ООО ООО Да. Она состоит из одной молекулы РНК и 2130 белковых субъединиц, каждая из которых имеет ММ 17 500 Да. Если РНК и субъединицы разделить добавлением детергента, а затем убрать его, то нативная структура вируса полностью восстановится, сохраняя его биологические свойства. Самосборка не требует никакой дополнительной информации, происходит самопроизвольно путем взаимодействия комплементарных поверхностей молекул. Подчеркнем, что комплементарность поверхности молекулы белка определяется мозаикой радикалов аминокислот (поверхность третичной структуры). Последовательность [c.48]

Вторичная и третичная структуры белка легко нарушаются при самых различных воздействиях нагревании, действии растворителей, даже энергичном встряхивании. При нарушениях такого рода исчезают свойства природного белка — происходит его денатурация. Иногда такие превращения обратимы. Так, например, гемоглобин при действии мочевины диссоциирует на 4 составляющие его субъединицы. После удаления мочевины снова образуется частица гемоглобина, обладающая свойствами природного белка. [c.390]

Определение количества субъединиц, вступивших в реакцию, проводится путем сравнения концентрации иммобилизованного белка до и после обработки 8 М мочевиной. Снижение концентрации белка в суспензии агарозы после инкубации в мочевине в 4 раза позволяет использовать препарат ЛДГ для получения мономера. Обработка иммобилизованного белка 1,5 М мочевиной приводит к разрушению нековалентных взаимодействий между субъединицами ЛДГ, но не влияет на ковалентную связь субъединицы с матрицей (агарозой). Удаление мочевины из системы при промывании буфером ведет одновременно и к удалению диссоциировавших субъединиц. Остающийся связанным белок является мономером ЛДГ, который используется для дальнейших исследований. [c.386]

Доказать термодинамическую гипотезу свертывания очень трудно. Обычно полагают, что термодинамическая гипотеза подтверждается экспериментами по повторному свертыванию панкреатической рибонуклеазы [4351. В этих опытах восстановленная несвернутая рибонуклеаза повторно окислялась в присутствии 8 М мочевины причем образовывалась случайная система водородных связей. В результате получалось около 100 различных продуктов, каждый из которых характеризовался своим набором из 4 дисульфидных связей (возможны (2-4) /2 -4 = 105 систем связей S—S [436, 4371 кроме того, существуют различные теоретические возможности образования петель. Удаление мочевины и добавление меркаптоэтанола (рис. 4.3) приводило к постепенному и в конечном счете количественному образованию нативной структуры. Этот факт показывает, что исходя из 100 различных групп, находящихся в исходных конформациях, можно получить нативную структуру. Хотя это число и невелико, данный опыт свидетельствует об уникальности продукта свертывания, однако он не позволяет решить вопрос о локальном или глобальном минимуме. [c.182]

Исследуемый материал растворяют в 6 М мочевине при pH 7,2 и добавляют меркаптоэтанол в 10-кратном молярном избытке по отношению к содержанию цистеина. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, затем к ней добавляют иод- или бромацетат в 50—100-кратном молярном избытке по отношению к цистину, содержащемуся в исследуемом образце, оставляют на 2 ч при комнатной температуре и на сутки при 4°С. После этого раствор диализуют против дистиллированной воды для удаления мочевины. [c.166]

Обычно обработка тиомочевиной нафтено-парафиновых фракций производится после удаления мочевиной компонентов с прямыми цепями. Таким образом, в аддукте тиомочевины [c.249]

Удаление мочевины и р-меркапто-этанола [c.197]

Возможность использования сорбентов — катионитов, активных углей, слоистых силикатов - для извлечения из воды мочевины и ее производных рассмотрена в работах [29, 108, 109]. Показано [108], что для удаления мочевины (5 г/дм ) из водных растворов могут быть применены сильнокислотные катиониты в Н -форме, при этом наиболее эффективным оказался катионит КУ-2Х8. Из активных углей лучшие [c.86]

Эти уреидокислоты осаждаются при действии нитрата ртути (II). 1—5 мг вещества, исследуемого на присутствие аминокислоты, кипятят в маленькой колбочке с мочевиной и 1—2 мл насыщенной на холоду баритовой воды в течение 0,5 часа с обратным холодильником. По охлаждении смесь разбавляют водой и осаждают барий, пропуская углекислоту. Фильтрат выпаривают в чашке, остаток извлекают несколькими каплями воды и вливают по каплям этот водный раствор в смесь равных объемов спирта и эфира, взятую в количестве 50—80 мл. Осадок промывают для удаления мочевины смесью спирта и эфира, растворяют в небольшом количестве воды и после фильтрования обрабатывают разбавленным раствором нитрата ртути (II). После добавления 1—2 капель раствора щелочи выпадает белый хлопьевидный осадок, растворимый в избытке щелочи. [c.268]

Для количественного восстановления рибонуклеазы и других белков оказалось необходимым проводить реакцию в концентрированных растворах мочевины. Однако если последующий диализ для удаления мочевины провести нельзя, это может явиться большим недостатком. [c.78]

Удаление мочевины из организма в аппаратах искусственная почка [c.57]

Крахмальные гели, содержащие мочевину, тоже дают удовлетворительные результаты при электрофорезе, и с ними легче работать, чем с полиакриламидными гелями. Хотя крахмальные гели в присутствии мочевины прозрачны, они становятся мутными после удаления мочевины во время их окрашивания и отмывания. Поэтому окрашенные зоны белков видны только на поверхности гелей. [c.320]

Диализ для удаления мочевины и -меркапто-этанола [c.41]

Диализ для удаления мочевины [c.62]

В настоящее время известны 2 способа удаления мочевины, накапливающейся в крови в результате нарушения деятельности почек, основанные на диализе и адсорбции. Первый - это гидролиз мочевины И крови путем использования микрокаисулированной уреазы в аппарате искусственная почка . Микрокапсулы представляют собой раствор ([эермента, окруженного сферической ультратонкой оболочкой. Заключенный в. микрокапсулу фермент способствует удалению нежелательных для организма метаболитов. Второй метод - это удаление мочевины из организма больного путем каталитического гидролиза ее в диализной жидкости. [c.233]

Удаление мочевины. Почти всю мочевину, содержащуюся в полученных фракциях, удается удалить диализом. После 72 ч диализа в растворе остается не более 1—5% ее первоначального содержания. Если данная фракция растворима в воде, ее освобождают отмочеви- [c.207]

Пространственная структура зависит не от длины полипептидной цепи, а от последовательности аминоютслотных остатков, специфичной для каждого белка, а также от боковых радикалов, свойственных соответствующим аминокислотам. Пространственную трехмерную структуру или конформацию белковых макромолекул образуют в первую очередь водородные связи, а также гидрофобные взаимодействия между неполярными боковыми радикалами аминокислот. Водородные связи играют огромную роль в формировании и поддержании пространственной структуры белковой макромолекулы. Водородная связь образуется между двумя электроотрицательными атомами посредством протона водорода, ковалентно связанного с одним из этих атомов. Когда единственный электрон атома водорода участвует в образовании электронной пары, то протон притягивается соседним атомом, образуя водородную связь. Обязательным условием образования водородной связи является наличие хотя бы одной свободной пары электронов у электроотрицательного атома. Что касается гидрофобных взаимодействий, то они возникают в результате контакта между неполярными радикалами, неспособными разорвать водородные связи между молекулами воды, которая вытесняется на поверхность белковой глобулы. По мере синтеза белка неполярные химические группировки собираются внутри глобулы, а полярные вытесняются на ее поверхность. Таким образом, белковая молекула может быть нейтральной, заряженной положительно или же отрицательно в зависимости от pH растворителя и ионо-генных групп в белке. К слабым взаимодействиям относят также ионные связи и ван-дер-ваальсовы взаимодействия. Кроме того, конформация белков поддерживается ковалентными связями 8—8, образующимися между двумя остатками цистеина. В результате гидрофобных и гидрофильных взаимодействий молекула белка спонтанно принимает одну или несколько наиболее термодинами-чесю выгодных конформаций, причем, если в результате каких-либо внешних воздействий нативная конформация нарушается, возможно полное или почти полное ее восстановление. Впервые это показал К. Анфинсен на примере каталитически активного белка рибонуклеазы. Оказалось, что при воздействии мочевиной или р-меркаптоэтанолом происходит изменение ее конформации и, как следствие, резкое снижение каталитической активности. Удаление мочевины приводит к переходу конформации белка в исходное состояние, и каталитическая активность восстанавливается. [c.35]

Денатурацию вызывают различные агенты и факторы тепло, ультрафиолетовое излучение, органические растворители, мочевина, солянокислый гуанидин, бромистый литий, детергенты, кислоты, щелочи и т. д. Состояния, к которым приводит вызванная этими агентами денатурация, могут быть весьма различными. Так, например, полная денатурация нагреванием часто оказывается необратимой, а денатурация под действием лгочевины обычно обратима — при удалении мочевины нативная форма белка восстанавливается. Совершенно очевидно, что состояния, в которых оказывается молекула белка при обратимой и необратимой денатурации, должны существенно различаться. [c.115]

Следует указать, что радиационно-нолимеризационный метод очистки имеет универсальный характер. Он может быть применен не только к очистке сточных вод заводов сульфатной целлюлозы, но и для удаления мочевины и красителей. В качестве полимеризующегося агента могут быть использованы, но-видимому, многие мономеры. Так, было обнаружено, что очистка черного стока может быть осуществлена с использованием акролеина, полимеризация которого происходит на воздухе. [c.111]

Для повышения степени биологического окисления загрязнений сточных вод не исключена возможность применения последовательного озонирования и биологической очистки. В Высшей национальной школе химии г. Ренна (Франция) автором изучалось влияние преозонирования сточных вод, содержащих мочевину, на эффективность последующей биологической очистки. Результаты показали, что предварительное озонирование бытовых вод позволяет создать наилучшие условия для деградации мочевины биологическим путем. Параллельному исследованию подлежали две пилотные установки аэротенков (с одинаковой нагрузкой на ил — 0,6 кг ХПК на 1 кг беззольного вещества в сутки). В одну установку подавались воды, прошедшие предварительное озонирование, а в другую — не подвергавшиеся обработке озоном. В первом аэротенке процент удаления мочевины достигал 99, что почти в 3 раза превышало эффективность окисления, достигаемую во втором аэротенке, т. е. при отсутствии предварительного озонирования. Другими словами, озонирование перед биологической очисткой создавало благоприятные условия для жизнедеятельности биомассы вследствие насыщения воды кислородом и ускорения гидролиза мочевины, ведущего к аммонификации органического азота с последующим его эффективным усвоением нитрифицирующими бактериями. [c.40]

Если в нуклеозидном пятне содержится несколько нуклеозидов и требуется их идентифицировать, это пятно следует элюировать до удаления мочевины. Надежного метода идентификации нуклеозидов мы ре] омендовать не можем. Наилучшие результаты дает адсорбция этих веществ на древесном угле с последующим илюированием смесью этанол — аммиак и хроматографией по методу Феликса и др. [2] (см. ниже). Если в распоряжении имеется еще одна порция смеси, то лучше использовать ее для непосредственного разделения нуклеозидов в системе Феликса и др. [2], системе Хочкисс [29] или же в какой-либо другой подходящей системе,, применяющейся для этой цели в лабораторной практике. [c.15]

Удаление мочевины и обессоливание. Мочевипу и соли можно удалить из выделенных олигонуклеотидов различными методами. [c.87]

Возможно, вскоре удастся создать системы из нескольких иммобилизованных ферментов. Так, если заключить в микрокапсулы три фермента — уреазу, глутаматдегидрогеназу и глю-козодегидрогеназу, то их можно будет использовать для удаления мочевины из крови больных с почечной недостаточностью. [c.171]

Одна из наиболее трудных и интересных задач биохимии — это выяснение физических основ строения белковых молекул, отличающихся тонкой организацией и высокой специфичностью. Эта задача приобретает особое значение из-за того, что биологическая активность таких макромолекул чувствительна к изменениям их пространственной конформации. Так как биологические полимеры способны разворачиваться (например, при нагревании или обработке мочевиной) и затем снова сворачиваться, возвращаясь в исходное состояние, разумно предположить, что в основном конформации, принимаемые различными биополимерами, наиболее выгодны термодинамически. Некоторые данные, подтверждающие эту гипотезу, были получены в серин экспернмеитов, выполненных Анфинсеном и др. (1961 г.). Эти исследования показали, что даже при разрыве всех четырех дисульфидных связей рибонуклеазы и полной ее денатурации мочевиной после удаления мочевины и реокисления дисульфидных мостиков белок снова приобретает правильную нативную конформацию [c.237]

Целлюлозная мембрана с толщиной 20 мкм применяется при гемодиализе для удаления мочевины из крови при 37 С. Концентрация мочевины (мол.масса 60) в крови составляет 0,2 г/л, тогда как в диализате, как можно предполагать, ее не содержится. Коэффициент диффузии мочевины в мембране ргшен 4,5 10 м /с, а коэффициент распределения ргшен 1,5. Коэффициент массопереноса со стороны крови равен 10 м /с, а в диализате 4 10 м /с. Рассчитайте поток мочевины и оцените влияние сопротивления в погргшичном слое. [c.389]

Так, один из путей увеличения числа читаемых полос ДНК состоял в соответствующей подготовке полиакриламидного геля после завершения электрофореза к радиоавтофафии. Исключение диффузии фрагментов ДНК, достигаемое их фиксацией с помощью уксусной кислоты, и одновременное удаление мочевины позволили несколько повысить чувствительность и разрешающую способность метода. Более значительное улучшение было достигнуто путем удаления воды и экспонированием предварительно высушенного геля. [c.195]

Метод состоит в следующем. Питательную среду сливают, а клеточный монослой заливают 10%-ным раствором дезоксихолата натрия в насыщенном растворе мочевины в воде (1 г мочевины на 1 мл бидистиллированной воды при 22 ) примерно 1—2 мл на 3X10 клеток. Клетки обрабатывают 30—60 минут при комнатной температуре. Лизис контролируют под микроскопом. Клетки разрушаются в течение нескольких минут, а лизис наступает после разбавления смеси до 5—10% конечной концентрации лизата, Разведение можно производить исходной культуральной жидкостью, стерильной водой или физиологическим раствором, охлажденными до 4 В этих условиях происходит полный цитолизис Центрифугирование лизата при 10 ООО об/мин не ведет к образованию осадка, характерного для обломков клеток. Наряду с этим происходит гидролиз клеточных белков и нуклеиновых кислот, так как ну-клеазы и протеазы в данных условиях резистентны к мочевине [483]. Низкомолекулярные вещества из лизата удаляют при помощи диализа в течение суток против бидистиллированной воды Полного удаления мочевины можно достичь с помощью уреазы, [c.39]

Является ли скручивание апомиоглобина и последующее включение гема спонтанным процессом Если к нейтральному раствору апомиоглобина добавить мочевину или гуанидин, то молекула белка разворачивается (денатурирует). Содержание а-спиралей в этих условиях (т.е. в 8 М растворе мочевины) близко к нулю. После удаления мочевины путем диализа степень а-спирализации возрастает до 60%, т. е. апомиоглобин вновь скручивается. Последующее добавление гема к этому раствору приводит к образованию биологически активного миоглобина (рис. 3.22). При восста- [c.62]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология