Центрифугирование приближение к равновесию

Аналитическое ультрацентрифугирование полимеров [1, 2, 4, 12] включает в себя три следующих экспериментальных метода скоростную седиментацию, изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к нему. Скоростная седиментация позволяет определить константу седиментации и полидисперсность образца. Седиментация макромолекул в зоне (зонное ультрацентрифугирование) — ценный метод обнаружения гетерогенности высокомолекулярного образца. Метод приближения к равновесию позволяет рассчитать молекулярную массу М и получить сведения о неоднородности полимера, а изучение седиментационного равновесия (состояния, достигаемого транспортным переносом макромолекул, хотя сам метод и не является истинно транспортным) — молекулярную массу (надежнее, но с большей затратой времени, чем в предыдущем методе) различных типов усреднения. Метод центрифугирования в градиенте плотности заключается в исследовании седиментации, состояния равновесия и приближения к нему в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности это — широко используемый метод определения молекулярной массы, наличия неоднородности и ее типа, служащий и для препаративных разделительных целей. [c.14]

Седиментационный анализ включает следующие три основных экспериментальных метода скоростную С., изучение седиментационного равновесия и процесса приближения к равновесию. Скоростная С. позволяет определить константу С. полимера и полидисперсность образца изучение седиментационного равновесия — мол. массу различных типов усреднения изучение приближения к равновесию — мол. массу (менее надежно, но и с меньшей затратой времени, чем в предыдущем методе) и неоднородность состава полимера. Процесс С., состояние равновесия и приближение к нему м. б. исследованы также в условиях искусственно создаваемого в кювете градиента плотности центрифугирование в градиенте плотности — важный метод определения мол. массы, наличия неоднородности и ее типа служит также для разделения. [c.198]

Величину Л4 можно определить также методом равновесия и приближения к нему (см. стр. 23), а также методом центрифугирования в градиенте плотности. Типы усреднения получаемых молекулярных масс указаны в соответствующих разделах. [c.104]

При достаточно длительном центрифугировании по мере приближения к равновесию концентрация вещества в ячейке перераспределяется (фиг. 24). Вначале всюду в ячейке концентрация одинакова (со). Через [c.107]

Рассмотрение принципов, лежащих в основе равновесного распределения в гравитационном поле, привело Сведберга к убеждению, что этот метод можно использовать для определения молекулярного веса макромолекул, если бы экспериментатор имел в своем распоряжении гравитационные поля порядка 10 —10 д. Создание таких полей стало возможным после разработки в Упсальской лаборатории ультрацентрифуги, и к 1926 г. она была использована для определения молекулярного веса гемоглобина [446, 447] и яичного белка [448]. Популярность этого метода в течение двух следующих десятилетий медленно снижалась в основном вследствие того, что для достаточно близкого приближения к равновесным условиям необходимо длительное время. Однако в последние годы значение равновесного центрифугирования опять повысилось благодаря нескольким факторам. Ряд усовершенствований конструкции прибора и экспериментальных методов привел к значительному расширению применения этого метода для прецизионных измерений [449, 450]. Полагали, что использование 0-растворителей позволит надежно оценить всю функцию распределения по молекулярным весам образцов полидисперсных полимеров по сравнению с ограниченной характеристикой средних значений молекулярного веса таких материалов другими методами. В то же время были разработаны конструкции кювет и экспериментальные методы, которые позволили производить наблюдения за столбиками жидкости высотой 1 мм или менее, что сократило время, необходимое для близкого приближения к равновесию, от нескольких суток до 1 час [451, 452]. Наконец, разработка метода центрифугирования в градиенте плотности позволила исследовать распределение по химическому составу этот способ нашел эффективное применение для изучения биологически важных макромолекул и обещает приобрести равное значение при исследовании синтетических полимеров. [c.157]

Метод приближения к седиментационному равновесию был разработан для того, чтобы избавиться от недостатков предыдущего метода, связанных с большими затратами времени, необходимого для установления равновесия. С помощью этого метода можно определять молекулярные веса, когда центрифугируемый раствор находится в состоянии приближения к равновесию. Вначале макромолекулы распределяются по всему объему аналитической ячейки равномерно затем по мере центрифугирования молекулы оседают, и плотность раствора в области мениска постепенно уменьшается. Изменение плотности тщательно регистрируют, а затем путем сложных расчетов, включающих большое число переменных, определяют молекулярный вес данного соединения по формулам [c.62]

Диаграмма плавкости системы п-ксглол — ж-ксилол представлена на рис. 5.1. При понижении температуры смеси заданного состава А до 0°С начнется выпадение кристаллов п-ксилола, а состав жидкой фазы постоянно смещается при дальнейшем снижении температуры вдоль кривой равновесия /,о приближения к эвтектической точке (—52,7°С). При этой температуре кристаллизуется эвтектическая смесь, и вся система затЕ.ердевает, иоэтому для выделения п-ксилола охлаждение не доводят до эвтектической температуры и кристаллы п-ксилола отделяют фильтрованием или центрифугированием. [c.75]

Ионный обмен в статических условиях. Этот метод применения отличается чрезвычайной простотой, но в то же время и весьма малой аффектпвностью. Процесс осушествляется в основном путем контакта всего подлежащего ионному обмену электролита в растворе с определенным количеством ионита и последующего разделения обеих фаз фильтрованием, декантацией, центрифугированием и т. д. Полнота обмена, достигаемая при помощи этого метода для любой данной системы, легко может быть вычислена, если известна константа равновесия этой системы. Очевидно, что дл тех ионообменных реакций, которые не доходят до конца, достижение сколько-нибудь полного превращения связано с необходимостью многократного повторения процесса в статических условиях. Число последовательных операций, необходимых для полного превращения, разумеется, зависит от степепп приближения к равновесию. Равновесие [c.71]

Хорошо известный метод исследования избирательной сольватации — светорассеяние [53] в связи с осмотическим равновесием это явление было рассмотрено Айзенбергом [54]. Из изложенного выше ясно, что центрифугирование в градиенте плотности — удобный альтернативный метод [42, 54]. Этот вопрос не будет здесь рассматриваться более подробно, поскольку количество данных для синтетических полимеров мало. Укажем только на одно обстоятельство, играющее важную роль при анализе полимер-гомологов (см. раздел Е). Для полимера определенного химического состава не зависит (или практически не зависит) от молекулярного веса. Это является следствием того факта, что величина фа/йФ1 в уравнении (XI11-24) пропорциональна Мг-Этот результат нельзя рассматривать как точное общее правило, а лишь как хорошее приближение. Можно показать, что он выполняется довольно точно, если для расчета свободной энергии полимерного раствора хорошим приближением является формула Флори — Хаггинса. Это доказательство со всеми подробностями приведено в работе Херманса и Энде [42] и здесь не будет повторяться. [c.432]

Это приближенная формула, так как в концентрированном растворе р зависит от х, и эффектами неидеальности здесь пренебречь нельзя. Вообще следовало бы начать с того, что и уравнение (11.49) является приближенным. Но не обращая пока внимания на эти осложнения, видим, что уравнение (11.71) предсказьшает параболическое распределение концентрации растворенного вещества. Это означает, что при равновесии устанавливается градиент плотности. Согласно уравнению (11.71), др/дх ос дс /дх ос сР-х. На практике, используя соли тяжелых металлов типа sQ, можно создать градиент с перепадом плотности более чем 10% в обыкновенной пробирке для центрифугирования прн максимальных скоростях современных ультрацентрифуг. [c.260]

Перед добавлением твердого сульфата аммония его взвешивают, разбивают все комки и медленно добавляют соль к раствору при перемешивании. Первую порцию можно растворить достаточно быстро, но по мере приближения к заданному проценту насыщения последние порции соли необходимо добавлять более медленно. Растворенный воздух может выходить из раствора и вызывать вспенивание, но это не оказывает какого-либо вредного воздействия на белки однако если вспенивание происходит в результате слишком энергичного перемешивания, то поверхностное натяжение, действующее на белки, попавшие в пузырьки, может привести к их денатурации. После растворения последней порции соли перемешивание необходимо продолжать в течение 10—30 мин до достижения полного равновесия между растворенными и агрегированными белками затем раствор центрифугируют. Обычно достаточно центрифугировать при Ю д/мип (например, при 10 ООО в течение 10 мин или при 3000в течение 30 мин). При высоких концентрациях соли может понадобиться более длительное центрифугирование. Надосадочную жидкость сливают, измеряют ее объем и подсчитывают количество соли, необходимое для следующего фракционирования. Осадок растворяют в нужном буфере. Следует отметить, что объем буфера не должен превышать объем осадка более чем в 1—2 раза, так как этого достаточно, чтобы концентрация соли оказалась значительно ниже точки преципитации белков, присутствующих в растворе. Если весь осадок не [c.70]