Рецептор lq выделение и очистка

Выделение и очистка рецепторов [c.8]

Настоящий раздел посвящен достижениям рентгеноструктурного анализа белков, знание пространственного строения которых представляет для человека поистине жизненный интерес. Речь пойдет об аспартатных протеиназах, прежде всего протеиназе вируса иммунодефицита человека (HIV) и ренине, одних из главных участников системы регуляции тонуса стенок кровеносных сосудов, скселетных мышц и других тканей. Ниже показано, что поиск радикальных терапевтических средств борьбы с синдромом приобретенного иммунодефицита (AIDS), другими видами вирусных заболеваний, гипертонией, т.е. решение сугубо прикладных задач экстраординарной важности, требует высокого уровня развития теоретической молекулярной биологии. Необходимой, хотя и не в полной мере достаточной, предпосылкой для его достижения является информация о трехмерных структурах соответствующих белковых молекул. В отличие от структурных исследований мембранных рецепторов, сдерживающим моментом здесь служат не трудности выделения, очистки и кристаллизации белков, а сложности более принципиального порядка. [c.80]

Исключительно важное значение химия поверхности адсорбентов и носителей имеет в газовой и жидкостной хроматографии для анализа сложных смесей, препаративного выделения чистых веществ и управления технологическими процессами. Химия поверхности играет важную роль и в процессах, протекающих в биологических системах. К ним относится, в частности, взаимодействие биологически активных веществ, в том числе лекарственных препаратов, с рецепторами — местами их фиксации в организме. Изучение модифицирования поверхности необходимо для решения вопросов совместимости искусственных материалов с биологическими. Химическое модифицирование адсорбентов применяется при разработке эффективных методов вывода из крови разного рода токсинов (гемосорбция). Прививка к поверхности крупнопористых адсорбентов и носителей соединений с определенными химическими свойствами необходима для иммобилизации ферментов, их хроматографического выделения и очистки, а также для иммобилизации клеток. Иммобилизованные ферменты и клетки эффективно используются в промышленном биокатализе, обеспечивая высокую избирательность сложных реакций в мягких условиях. Очистка и концентрирование вирусов гриппа, ящура, клещевого энцефалита и других для получения эффективных вакцин требует применения крупнопористых адсорбентов с химически модифицированной поверхностью. [c.6]

Поскольку в электропластинках Torpedo на долю ацетилхолинового рецептора приходится 2% мембранного белка, достаточно всего 50-кратной степени очистки для получения этого рецепторного белка в чистом виде. Напротив, для выделения ацетилхолинового рецептора из мышц необходима >10 000-кратная степень очистки. Но даже и это достигается только с применением специального приема — использования денервиро-ванной мышцы, а денервация сама по себе приводит к 20-кратному увеличению концентрации рецептора (см. ниже). [c.264]

Использование радиолигандного метода позволило приступить к выделению и очистке рецепторов гормонов из мембран. В настоящее время многие рецепторы получены в достаточно гомогенной форме, определены их коэффициент седиментации, молекулярная масса, радиус Стокса, степень гидрофобности и т. д. Рецепторы нескольких гормонов выделены в высокоочищенном виде. Удалось показать, что в большинстве случаев гормональные рецепторы — это гликопротеины. [c.239]

Клеточные рецепторы принадлежат к числу мембранных белков. Участок молекулы рецептора, пронизывающий цитоплазматическую мембрану, построен из неполярных аминокислот, в силу чего между (П1м и липидныуп компонентами мембраны осуществляются гидрофобные взаимодепствия. Помимо них рецепторные белки образуют в ряде случаев ковалентные сложноэфирные связи с остатками фосфорной кислоты фосфолипидов мембраны (рис. 1). Тесная связь рецепторного белка с клеточной мембраной диктует необходимость использования для выделения рецепторов солюбилизирующих мембрану детергентов. С целью дополнительной очистки в ряде случаев прибегают к удалению из препаратов рецепторных белков ковалентно присоединенных к ним комг-оиентов клеточной мембраны. [c.8]

При анализе методов, используемых для выделения клеточных рецепторов, обращает на себя внимание стремление к применению максимально щадящих методов на стадии элюции рецептора с сорбента. Так, применение сорбентов с иммобилизованными лактинами для очистки рецептора инсулина продиктовано прежде всего стремлением избежать воздействия на рецепторный белок растворов с низкими значениями pH, концентрированных растворов амидов (мочевина) или других денатурирующих белок веществ. В то же время в кислой среде (или с применением денатурирующих агентов) производится элюция с иммобилизованных лигандов (антигены или гаптены) различных по специфичности антител, не приводящая к их инактивации. Различие подходов к способам элюции клеточных рецепторов и антител (иммуноглобулины) с иммобилизованных лигандов, выбранных эмпирическим путем, связано с конформационнон лабильностью рецепторных белков. Так, для ряда изученных к настоящему времени рецепторов (например, рецептор для эпидермального фактора роста) характерны выраженные изменения конформации при переходе из нейтральной в слабокислую среду (см. гл. 3). [c.11]

Хроматографию по сродству обычно применяют для очистки одногр компонента системы, состоящей из двух или более взаимодействующих веществ. Основной принцип заключается в прикреплении одного компонента к нерастворимой пористой матрице (иммобилизация). Связанный компонент (лиганд) может быть использован для специфической сорбции другого компонента в условиях, благоприятных для их взаимодействия и образования комплекса. Элюция сорбированного вещества может включать любую процедуру, ведущую к диссоциации. комплекса. Для очистки ферментов чаще всего используют конкурентные ингибиторы, связанные с носителями. В качестве лигандов могут быть взяты также кофакторы, субстраты ли фрагменты субстратов. В иммунологии хроматографию по сродству широко применяют для очистки антител на связанных антигенах и для выделения антигенов на связанных антителах. Метод с успехом используют для выделения белков-рецепторов, связывающих витамины и гормоны. ХрО матографию по сродству примедяют также для концентрирования разбавленных белковух растворов, удаления денатурированных или модифицированных ферментов из активных препара- [c.215]

Концентрация рецепторов в клетке крайне низка. Обычно она составляет (0,Д—0,5) 10 i2 молей на 1 мг белка. В клетках крови число -адренергических рецепторов порядка 1000 молекул на клетку. Для получения мембранного рецептора в гомогенном виде необходима очистка в 200—500 тысяч раз. Выделение рецепторов затруднено также тем, что после разрушения клеток, выделения и очистки субклеточных структур рецепторы, локализованные в этих структурах, нельзя тестировать по их биологическим эффектам, так как в большинстве случаев биологический эффект опосредуется согласованной работой многих структур, а подчас и вовсе требует целостности клетки или даже определенного многоклеточного ансамбля. Так, например, после получения очишенной фракции плазматических мембран а-адренергические рецепторы не удается тестировать по повышению проницаемости этих мембран для Са +, так как такие мембраны обычно становятся свободно проницаемыми для всех ионов. Тестировать -адренергические рецепторы по ускорению липолиза нельзя после разрушения жировой ткани ц. выделения мембран. Однако эти мембраны содержат аденилатциклазу, акти--вация которой является первым этапом в процессах ускорения липолиза -адренергическими агонистами. Тестируя - рецепторы по активации аденилатциклазы, можно выделить и очистить плазматическую мембрану, в которой локализованы и -рецепторы и аденилатцик--лаза. Следующим этапом должна быть солюбилизация мембраны детергентами или органйческими раствори- телями, так как практически вс мембранные рецепто- ры — интегральные белки мембраны. После солюбилизации аденилатциклаза сохраняет свою активность, [c.131]

В настощее время в виде очищенных индивидуальных белков получены рецепторы стероидных гормонов (прогестинов, глюкокортикоидов и половых гормонов) и холинергический рецептор никотинового типа. Успех в выделении холинергического рецептора в значительной степени определился удачным выбором объекта. Было обнаружено, что концентрация этих рецепторов в электрическом органе ската Torpedo или угря Ele trop-horus в сотни раз выше, чем во всех других исследованных тканях и объектах. В электрическом органе тысячи мембран соединены параллельно в одну батарею , в результате чего изменение потенциала на каждой из мембран, возникающее под действием ацетилхолина И составляющее десятки милливольт, суммируется и дает на выходе потенциал, равный киловольту. Эти мембраны буквально насыщены холинергическими рецепторами. Из 1 кг электрического органа можно выделить сотни миллиграммов гомогенного препарата холинергического рецептора. Для получения индивидуального белка достаточна его очистка всего в сто раз. [c.143]

Природный (-f) и синтетический (—) оптические изомеры АБК одинаково воздействуют на растения, ио из геометрических изомеров гормональной активностью обладает только 2-цис-форма (об изомерах АБК см. с. 111). В растительных экстрактах обнаружены лищь следы 2-траяс-изомера, да и эти следовые количества образуются, вероятно, в результате изомеризации природной 2-iiii - )opMbi в процессе выделения и очистки. Поэтому, скорее всего, в клетках существует неизвестный пока рецептор только для 2- ис-формы АБК. Изучение аналогов АБК пока не много дало для понимания структурных требований к молекулам с АБК-подобной физиологической активностью. Ясно только, что для активности важно присутствие двойной связи в кольце. [c.129]

Условия сохранения активности вируссодержащего материала. Поскольку условия в клетке более благоприятны для вирусных частиц, чем те, воздействию которых они подвергаются на различных этапах концентрирования и очистки, необходимо определять условия, позволяющие сохранить максимум биологической активности вируса в процессе очистки (pH, солевой состав среды, температура и другие факторы). В процессе очистки может инактивироваться как новерхностная оболочка вируса, так и нуклеиновая кислота. Вирусняя нуклеиновая кислота не подвержена каким-либо воздействиям, пока зрелая вирус-пая частица интактна. Оболочка вируса надежно защищает нуклеиновую кислоту от нуклеаз. Она не только отвечает за нативность нуклеиновой кислоты, по и за процесс проникновения ее в клетку. Это специфическое свойство оболочки вирусов обусловлено наличием рецепторов — определенных химических группировок на поверхности вирусов, реагирующих с соответствующими участками поверхности клеток. Поэтому необходимо избегать какого-либо изменения поверхностной оболочки вирусов. Если поверхностная оболочка состоит главным образом из белка, то пригодны те способы сохранения активности вируса, которые эффективно применяются при выделении белков. [c.29]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология