Вирусы в качестве векторов

Рис. 9.5. Геном вируса лейкоза мышей Молоки-ретровируса (РНК-вирус, содержащий ген фермента обратной транскриптазы), ДНК-тран-скрипт которого встраивается в геном млекопитающего и может использоваться в качестве вектора для переноса генов млекопитающих в клетку [2296].

Эукариотические вирусы до сих пор нашли более скромное применение в качестве векторов. Практически используются только онкогенный вирус SV 40 и его производные. Все эти векторы — дефектные вирусы, не способные давать полноценные вирусные частицы в клетке хозяина. Анализируемую ДНК можно вводить и в другие репликоны, способные размножаться в клетках, например бактериофаги. Чаще всего из известных фагов в качестве векторов применяют сконструированные производные фага X и фагов М13 и fd. В векторах на основе бактериофага I. используется его особенность, состоящая в том, что большая часть его ДНК не участвует в размножении фага в клетке. Это позволяет вводить чужеродную ДНК в ДНК фага X в качестве вектора. [c.120]

В качестве векторов могут также использоваться вирусы растений. Их нуклеиновые кислоты реплицируются и проявляют свои функциональные свойства (экспрессируют) в клетках растений-хозяев, где потенциал вирусов и воспринимающих клеток объединяется и реализуется в приумножении организованных частиц патогена (например, для вируса мозаики табака в среднем Ю частиц на клетку, для вируса мозаики цветной капусты — порядка i частиц на клетку). [c.513]

Несомненно, что при создании живых поливалентных вакцин в качестве векторов наиболее целесообразно использовать вирусы, уже применяемые как живые вакцины. При этом, как показали опыты, генно-инженерные манипуляции без особых проблем можно осуществлять лишь на крупных ДНК-содержащих вирусах, так как размер их генома не имеет строгих ограничений при упаковке в вирион и поэтому допустима встройка в такую вирусную ДНК от одного до нескольких чужеродных генов. [c.437]

Принцип действия клеточного дисплея заключается в экспрессии на поверхности клеток гетерологичных белков (белков-пассажиров), которые отсутствуют у данного организма, объединенных в составе гибридной молекулы с помощью пептидного спейсера с полипептидной цепью белка-носителя, обеспечивающего заякоривание всей конструкции в мембране клеток. При этом используют гибридные белки трех типов, в которых белок-пассажир находится на N-конце, С-конце или во внутренней части белка-носителя в виде сэндвича. Для успешного выполнения своих функций белки-носители должны отвечать, по крайней мере, четырем требованиям 1) обладать эффективной сигнальной или транспортной последовательностью, обеспечивающей прохождение гибридного белка через внутренние мембраны клеток 2) проявлять сильные якорные свойства для прочного удерживания белка-пассажира на поверхности клеток 3) должны быть совместимыми с белками-пассажирами, т.е. не дестабилизироваться после объединения с ними 4) демонстрировать устойчивость к протеолитическим ферментам, присутствующим в периплазматическом пространстве или культуральной жидкости. В качестве векторов для генов гибридных белков используют экспрессирующие плазмиды или хромосомы вирусов. [c.350]

Однако вирусы в качестве векторов обладают и существенными недостатками имеют небольшую емкость, патогенны и неспособны встраиваться в хромосомы хозяина. Небольшую емкость можно увеличить, если инфицировать вирусом (например, ВМЦК) растительные протопласты, а не клетки. В этом случае инфекция не передается от клетки к клетке, нет необходимости в упаковке ДНК в вирусные частицы. [c.148]

Многочисленные исследования демонстрируют успешное использование вируса осповакцины в качестве вектора для конструирования эффективных живых вакцин против различных вирусных инфекций (табл. 14.1). [c.395]

Векторы на основе ДНК-содержанщх вирусов растений. Вирусы можно рассматривать как разновидности чужеродной нуклеиновой кислоты, которые реплицируются и экспрессируются в клетках растений. Подавляющее большинство фитовирусов в качестве носителя генетической информации содержат РНК. Только 1 — 2 % вирусов, инфицирующих растения, относятся к ДНК-содержа-щим. Именно эти вирусы удобны для использования в технологии рекомбинантных ДНК, а также в качестве векторов. [c.147]

Книга охватывает все таксоны бактерий и посвящена проблемам теоретической и прикладной бактериологии. Поскольку в природе преобладают сапрофитные формы, паразитические и патогенные бактерии отдельно не рассматриваются. Не обсуждаются также специальные методы прикладных областей микробиологии, равно как и не делается попытка охватить всю микробиологию. Вирусы упоминаются только в связи с бактериофагами, используемыми в качестве векторов в процессе переноса генов, водоросли — только в связи с цианобактериями (сине-зелеными водорослями) дрожжи, плесневые грибы и простейшие упоминаются лишь вскользь. [c.7]

Полученный целевой ген с помощью ферментов лигаз сшивают с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. В качестве вектора могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека, животных и растений. [c.99]

Впервые возможность переноса ДНК при помощи микроинъекций в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки мыщи была проиллюстрирована Дж. Гордоном и др. В этом эксперименте в несколько сотен оплодотворенных яйцеклеток инъецировали плазмидный вектор pBR322, содержащий ген тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV) и часть генома обезьяньего вируса 40 (SV40). Из 78 потомков, рожденных приемными матерями, два содержали плазмидную ДНК. Авторы сделали вывод, что эти данные свидетельствуют о возможности использования рекомбинантных плазмид в качестве вектора для введения чужеродных генов непосредственно в эмбрионы мыщей, которые сохраняют эти гены в ходе развития . К сожалению, плаз- [c.428]

В случае использования в качестве векторов вирусов человека, животных и растений чужеродный ген встраивают в ДНК вируса, и он реплицируется вместе с размножением последнего в клетке. Применяют в качестве вектора космиды, представляющие собой гибрид плазмиды с фагом. Космиды используются для клонирования больших (до 45 тыс. пар нуклеотидов) фрагментов ДНК эукариот. [c.99]

В последнее время в качестве вектора активно используют безопасный для человека вирус оспы канареек, который лишь частично жизнеспособен в организме человека, но не дает потомства. Данный вирус обеспечивает развитие полноценного иммунного ответа, прежде всего Т-клеточного, против целевых антигенов, в том числе антигенов HIV. В настоящее время проводятся клинические испытания такого рекомбинантного вируса на добровольцах. [c.446]

Перенос рДНК в клетки прокариот или введение последовательностей клонированной ДНК в рецепторные эукариотические клетки (например, млекопитающих) с помощью фаговых векторов называют трансфекцией Альтернативный метод — использование вирусов эукариот, то есть когда эукариотическая клетка инфицируется — (заражается) вирусом В качестве векторов при этом чаще используют литические вирусы типа вируса полиомы и SV40, а также челночные векторы, сконструированные на основе ретровирусов и папилломавирусов [c.202]

Для получения линий иммортализованных фибробластов человека были выбраны два варианта воздействия онкогенного вируса SV40 на нормальные клетки tsA мутантом вируса и вектором pSVSneo, содержащим последовательность ДНК, кодирующую ранние белки вируса SV40, в том числе большой Т-антиген, а также бактериальный ген neo в качестве селективного маркера. [c.267]

Следующий раздел касается некоторых фундаментальных аспектов биологии ретровирусов, на которых базируется их применение в качестве векторных молекул. Разд. 9.3 дает представление о различных конструкциях ретровирусных векторов. В разд. 9.4—9.6 описаны методы размножения вирусов, инфицирования клеток и тестирования вирусных препаратов. Заключительный, разд. 9.7 касается некоторых практических вопросов, которые следует принимать во внимание при работе с данными векторами. [c.274]

Большинство работ по созданию живых вирусных вакцин проводились на ВКО, однако в качестве кандидатов на роль векторов для вакцинации рассматриваются и другие вирусы аденовирус, полиовирус и вирус ветряной оспы. Вектор на основе живого аттенуированного полиовируса (его исследования только начинаются) привлекателен тем, что позволяет проводить пероральную вакцинацию. Такие слизистые вакцины (вакцины, компоненты которых связываются с рецепторами, расположенными в легюгх или желудочно-кишеч-ном тракте) пригодны для профилактики самьгх разных заболеваний холеры, брюшного тифа, фиппа, пневмонии, мононуклеоза, бешенства, СПИДа, болезни Лайма. Но до любых клинических испытаний любого на первый взгляд безобидного вируса как системы доставки и экспрессии соответствуюхцего гена необходимо убедиться в том, что он действительно безопасен. Например, повсеместно используемый ВКО вызывает у людей осложнения с частотой примерно 3,0-10 . Поэтому из генома рекомбинантного вируса, который предполагается использовать для вакцинации человека, желательно удалить последовательности, ответственные за вирулентность. [c.242]

Еще одним подходом, дающим надежду на увеличение эффективности переноса генов, является использование в качестве векторов ретровирусов. Основное преимущество этих векторов заключается в том, что они способны эффективно инфицировать большое число различных клеточных типов. Общий вид вирусного вектора, используемого для трансгеноза, изображен на рис. 66. Ретровирусные векторы обеспечивают интеграцию единичной копии трансгена в эмбрионы на разных стадиях развития. Первые эксперименты, продемонстрировавшие внедрение и наследование у мышей экзогенно введенного мышиного вируса лейкемии Молони (MoMLTV), были проведены еще в середине 70-х годов прошлого века Енишем с сотрудниками [c.191]

Исследуются и возможности использования ДНК для лечения наследственных заболеваний. В настоящее время усилия в этой области направлены на встраивание ДНК нормальных генов в соматические клетки, такие, как клетки костного мозга (генная терапия). В последние годы осуществляются эксперименты in vitro и на животных, где в качестве векторов для введения генов используются ретровирусы. До весны 1985 года такие исследования на людях не проводились. Более ранние попытки осуществления генной терапии для лечения аргининемии с использованием вируса папилломы Шоупа и Р-талассемии с использованием Р-глобиновых генов были преждевременными и не дали клинического эффекта. Применение генной терапии половых клеток, то есть встраивание нормальных генов в дефектные половые клетки, оплодотворенные яйцеклетки или эмбрионы [c.33]

Векторы на основе ДНК-содержащнх вирусов растений. Подавляющее большинство фитовирусов в качестве носителя генетической информации содержат РНК. Лишь 1—2 % от числа вирусов, инфицирую-56 [c.56]

Вирус осповакцины привлекателен в качестве вектора по нескольким причинам. Во-первых, у него широкий спектр клеток-хозяев (от позвоночных до беспозвоночных). Во-вторых, его большой геном (187 т.п.н.) позволяет внедрять фрагменты чужДНК размером до 25 т п.н. В-третьих, его безопасность подтверждена [c.400]

Аденовирусы удобны в качестве векторов, так к"к 1) имеют широкий круг клеток-хозяев 2) размножаются до 10 зирусов па клетку, образуя приблизительно 10 частиц в 1 мл культуральной среды 3) обеспечивают высокий уровень экспрессии, поскольку клетки остаются живыми до поздних стадий инфекции 4) их ДНК не интегрируется в клеточную хромосому, минимизируя тем самым риск активации онкогенов. У вирусов очень [c.404]

В последние годы в качестве безопасного вектора активно изучают штамм вируса осповакцины MVA, полученный германскими учеными в результате множественных пассажей VA на куриных эмбрионах в 1970-х гг. Штамм MVA является высокоаттенуированным вариантом вируса осповакцины, он способен in vitro размножаться на культурах клеток птиц, но практически не размножается в клетках млекопитающих. Тем не менее при вакцинации экспериментальных животных или людей рекомбинантными вариантами VA штамма MVA наблюдается эффективный иммунный ответ против целевых белков, чьи гены встроены в вирусный геном. Получаемые рекомбинантные MVA не вызывают побочных реакций при введении экспериментальным животным в очень высоких дозах. Предполагается, что VA штамма MVA можно будет использовать в качестве вектора для вакцинации даже иммунодефицитных людей. [c.395]

Введение ДНК в клетки животных. В качестве векторов часто используют геномы вирусов животных. Соответствующие рекомбинантные молекулы, содержащие вставку чужеродной ДНК, обьгчно упаковываются в вирионы и проникают в клетки хозяина путем инфицирования. В отличие от фага упаковку ДНК вирусов животных in vitro осуществить пока не удается и она всегда происходит in vivo. Введение рекомбинантных геномов в клетки животных путем инфицирования представляет собой наиболее эффективный способ (по существу [c.257]

Цель настоящей главы — очертить рамки практического использования ретровирусов в качестве экспрессирующих векторов общего назначения и описать методы размножения вирусов, тестирования и инфицирования, которые являются общими для большинства процедур, описанных выше. Всех деталей специализированных экспериментов мы касаться не будем. Большинство ретровирусных векторов, описанных на сегодняшний день, ведет свое происхожедние либо от вирусов птиц, либо от вирусов лейкоза мышей (ВЛМ, МЬУ). В данной главе мы сконцентрируем внимание на векторных системах типа МЬУ и экспериментальных процедурах, связанных с использованием этих векторов. [c.274]

Вопрос о применении геной терапии всегда вызывал споры, но большинство ученых согласны с Т. Фридманом и Р. Роблином, которые еще в 1972 г. (S ien e 175 949-955) писали Мы считаем, что геная терапия сможет облегчить симптомы некоторых наследственных заболеваний человека, поэтому необходимо продолжать исследования, направленные на ее развитие. Ключевые моменты генной терапии — адресная доставка терапевтического гена и обеспечение его экспрессии в определенных клетках или тканях. Сначала в качестве основного средства доставки терапевтических генов рассматривали векторы, полученные на основе вирусов человека. Это было связано с наличием у них механизмов проникновения в специфические foieTKH. Наиболее многообещающими считали векторы на основе ретровирусов. Но нативный ретровирус - это инфекционный агент, который по- [c.492]

В качестве иллюстраций векторных систем приводим рис 68а, на котором изображены плазмиды ol El, pBR322, вирус SV40 и челночный вектор [c.197]

В случае простейшего ретровирусного вектора транс-дейст-вующие вирусные структурные гены удаляют и на их место встраивают один или несколько рестрикционных сайтов для клонирования. Известно несколько векторов этого типа (см., например, [18, 19]). В качестве примера вектора, рассчитанного на клонирование одиночных генов, можно назвать вектор на основе вируса лейкоза мышей Молони (Mo-MLV), обозначаемый рМХ1112 (рис. 9.3, а). В этой конструкции полилинкер содержащий множественные рестрикционные сайты для клонирования, введен на место удаленных вирусных генов gag, pol и env. Клонированный в данном векторе чужеродный ген эффективно экспрессируется благодаря промотору в составе вирусного 5 -LTR, а наличие ч с-действующих вирусных последовательностей позволяет этой системе формировать инфекционные части- [c.279]

Смотреть страницы где упоминается термин Вирусы в качестве векторов: [c.301] [c.501] [c.441] [c.555] [c.54] [c.240] [c.328] [c.202] [c.171] [c.73] [c.359] [c.363] [c.375] [c.259] [c.214] [c.126] [c.141] [c.397] [c.500] [c.216] [c.336] [c.293]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология