Иммунодиффузия

Сравнительно новой разновидностью зонального электрофореза является электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране [6]. Ацетат-целлюлозная мембрана, по-видимому,— очень хорошая поддерживающая среда, уже нашедшая благодаря ряду достоинств широкое применение. Выше мы отмечали, что приготовление крахмального и агарового гелей—довольно трудоемкая операция, осложняющая метод. В то же время способы предварительной обработки ацетат-целлюлозной мембраны почти так же просты, как и в случае с фильтровальной бумагой. При этом разделение белков происходит лучше и быстрее, а для анализа достаточно 5—1000 мкг белка, растворенного в объеме 0,1—10 мкл. Как белки, так и гликопротеиды очень хорошо окрашиваются на ацетат-целлюлозной мембране, поэтому она является прекрасной поддерживающей средой с точки зрения количественной оценки этих соединений. Электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране позволяет получить больше белковых фракций сыворотки крови, чем электрофорез на бумаге, но меньше, чем электрофорез в крахмальном геле. С помощью электрофореза на ацетат-целлюлозной мембране можно определять весьма малые количества индивидуальных белков, благодаря чему он очень подходит для анализа гомогенности выделенного нативного белка. Ацетат-целлюлозные мембраны могут быть использованы также в опытах по иммунодиффузии, что является еще одним достоинством этого метода электрофореза. [c.14]

Для приготовления полужидкого геля используют ряд веществ. Их наиболее важным свойством должна быть инертность по отношению к исследуемым белкам и иммунной сыворотке. Эти вещества не должны вступать с ними в какие-либо реакции. К таким веществам можно отнести агар, крахмал, желатину, пектин и т. д. В настоящее время наиболее широко применяется агар, который оказался наилучшей средой при повседневной постановке реакций иммунодиффузии. При нагревании агар легко растворяется в воде и растворах солей и образует плотный гель при комнатной температуре. Прозрачность агара позволяет ясно различать возникающие в геле линии преципитации и окрашивать их соответствующими красителями. [c.18]

Особое значение методов иммунодиффузии в изучении белков состоит в том, что с их помощью можно характеризовать белки на основании свойств, отличных от тех, которые были известны ранее. Электрофорез позволяет фракционировать белки в соответствии с их физико-химическими свойствами, в то время как с помощью классических методов иммунологии можно проводить дальнейшую дифференцировку белковых компонентов по антигенным свойствам. [c.18]

Поэтому методы иммунодиффузии открывают перед исследователем дополнительные возможности [c.19]

ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ ИММУНОДИФФУЗИИ [c.19]

Фиг. 9. Комбинация электрофореза в крахмальном геле с иммунодиффузией

Разрешающая способность иммуноэлектрофореза намного превышает возможности зонального электрофореза, но не следует забывать, что, подобно другим методам иммунодиффузии, иммуноэлектрофорез выявляет минимальное число реагирующих систем антиген—антитело. [c.148]

Иммунодиффузия. На участке между зонами разделения исследуемого образца и контрольных веществ гель сефадекса удаляют (фиг. 32). Всю поверхность пластинки заливают слоем расплавленного 1 %-ного агара толщиной I мм. После его затвердения между зонами исследуемого образца и контрольных соединений вырезают продольную канавку, которую заполняют специфической иммунной сывороткой. Пластинку помещают во влажную камеру и образовавшиеся полосы преципитации фотографируют в нативном состоянии или после окрашивания (фиг. 32). [c.153]

Принцип метода. Это один из методов иммунодиффузии, в котором антиген и иммунная сыворотка мигрируют в геле навстречу друг другу не за счет диффузии, а под влиянием электрического поля. [c.154]

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОДИФФУЗИИ [c.157]

Примененные Коном (стр. 71) для электрофореза ацетат-цел-люлозные мембраны могут быть также успешно использованы в опытах по иммунодиффузии, Ацетат-целлюлозные мембраны лишены ряда недостатков, присущих агаровому гелю. [c.161]

Интерпретация результатов иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза на ацетат-целлюлозной мембране не отличается от описанной соответственно на стр. 131 и 142. [c.162]

Серологическое исследование. Для серодиагностики применяют РСК. Комплементсвязывающие антитела в достаточных титрах выявляются лишь на поздних стадиях заболевания. Через 2 — 3 нед заболевания антитела можно выявить у большинства больных в реакции иммунодиффузии. [c.329]

Рис. 4, Результаты встречной иммунодиффузии в агаре [100]

Иммунодиффузию в агаре можно проводить по методу Хансона [14]. После гель-фильтрации на пластинках 10-20 см гель сефадекса удаляют механическим путем, оставляя только полоску шириной 3—5 см, содержащую разделяемые белки. Затем пластинку заливают расплавленным агаром (охлажденным до 50 °С), который при застывании образует гель толщиной 1 мм. При аккуратном выполнении этой операции агар покрывает полоску сефадекса, не нарушая слоя. Таким путем удается получить хорошие зоны преципитации, однако следует заметить, что эта методика требует большого экспериментального навыка. Иммунодиффузию в геле агара можно также выполнять после переноса белков на ацетилцеллюлозные мембраны [57] или полоски фильтровальной бумаги [13]. Полоски помещают на агаровый гель, где осуществляют иммунодиффузию. [c.271]

Наиболее широкое применение находит методика, включающая перенос белков на ацетилцеллюлозные мембраны с последующей иммунодиффузией в самой мембране. Для этого на мембрану помещают две полоски фильтровальной бумаги, пропитанной антисывороткой [15, 17, 55]. Можно перенести белки и на две мембраны, тогда одну из них проявляют реактивом на [c.271]

В настоящее время стал применяться предложенный Грабаром комбинационный метод иммунодиффузии и электрофореза (иммуноэлектрофореза), отличающийся значительной чувствительностью. [c.242]

А. используют при приготовлении плотных бактериальных сред, применяемых для культивирования и диагностики бактерий, а также как желнрующее в-во в пищевой (особенно в кондитерской) пром-сти. Агароза-носитель в гель-хроматографии, аффинной хроматографии, гелевом электрофорезе, иммунодиффузии и иммуноэлектрофорезе. [c.28]

На основе этих методов иммунодиффузии или иммуноэлектрофореза разработано много различных технических приемов, описание которых дается в ряде опубликованных работ [4, 5, 6, 42, 55, 86]. Наблюдение за специфическими преципитатами, соответствующими отдельным антигенам, — то, как эти преципитаты перекрещиваются, образуют щпоры или непрерывные линии или же вызывают появление плеча, —лежит в основе сравнения структуры этих антигенов [4, 86]. [c.103]

Для контроля за степенью очистки белков чаще применяют метод электрофореза. Большинство авторов в качестве носителя используют гомогенные гели или градиент концентрации акриламида. Основной способ при этом — электрофорез в диссоциирующей среде ДДС-Na соответственно процедуре, которую описал Лэммли [68]. В определенных случаях завершающим приемом при этом являются иммунодиффузия [29, 114] либо иммуноэлектрофорез [17, 80, 118]. При исследовании структуры некоторые авторы прибегают к двумерному электрофорезу. Тогда первая миграция молекул может происходить в гомогенном геле полиакриламида с ДДС-Na или без него во втором направлении молекулы мигрируют в полиакриламидном геле с ДДС-Na в присутствии восстановителей дисульфидных связей (р-меркапто-этанол) [10, 40, 61, 78]. Чтобы охарактеризовать субъединицы легуминов гороха и конских бобов, Матта и др. [77, 78] применяют сочетание ДДС-Na с р-меркаптоэнталом и электрофокусированием. Рестани и др. [92 пользуются этим же способом применительно к глобулинам люпина, а Ху и Еэзен [53] демонстрировали гетерогенность белков сои. Указанные методы с [c.155]

Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии. [c.17]

В сущности все методы иммунодиффузии основаны на явлении, которое наблюдал Бекхольд взаимодействии антиген — антитело в геле. Растворимый белковый антиген и иммунная сыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте встречи обоих реагентов возникает полоса преципитации, которую можно легко наблюдать и регистрировать. [c.18]

Электрофорез и классические иммунологические реакции также используются для сравнения белковых смесей и отдельных нативных белков. Однако разрешающая способность этих методов ограничена, так как они дают либо физико-химическую, либо имму-нохимическую характеристику. В сравнении с ними метод иммунодиффузии более информативен, так как с его помощью в двух или нескольких сравниваемых белковых смесях можно обнаружить не только идентичные компоненты, но и возможные общие антигенные структуры, присутствующие в разных компонентах [И—13]. [c.19]

Особое значение приобрела комбинация иммунодиффузии с электрофорезом, названная методом иммуноэлектрофорезаН]. С его помощью можно одновременно электрофоретически разделить компоненты белковой смеси и получить их иммунологическую характеристику. Простота осуществления, высокая разрешающая способность и, наконец, очень малое количество материала, требуемое для анализа, ставят иммуноэлектрофорез в ряд наиболее ценных методов аналитического изучения белков. Соединение иммуноэлектрофореза с двойной диффузией в геле позволяет выявлять идентичность определенных компонентов двух белковых смесей [10]. [c.19]

Анализ белков сыворотки осуществляется разнообразными им-мунохимическими методами, но здесь мы коснемся лишь двух методов двойной иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза. Оба метода нашли широкое и многостороннее применение. Их используют для исследования нефракционированной сыворотки и для анализа отдельных белковых фракций. С появлением этих методов уда- [c.19]

Фракции белка, разделившиеся в крахмальном геле, можно идентифицировать в реакции преципитации со специфической антисывороткой. Для этого Шёрлен и Голь [25] предложили комбинировать электрофорез в крахмальном геле с иммунодиффузией в агаровом геле. [c.82]

Попытки разработать методы иммунодиффузии, позволяющие количественно оценивать содержание антигенов и антител, делались неоднократно. Одна группа таких методов основьгоается на двойной диффузии в геле по Ухтерлони (см. стр. 131), другая — на измерении скорости диффузии и степени мутности полос преципитации при иммуноэлектрофорезе (стр. 137). Пока эти методы еще не получили широкого распространения. [c.157]

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

Агарозные гели используются для фракционирования белкоа и нуклеиновых кислот (гель-фильтрация, электрофорез) и их характеристики (иммунодиффузия, иммуиоэлектрофорез). Б агаровых гелях иммобилизуют бактерии и лимфоидные клетки а молекуляр-но-биологических и иммунологических исследованиях. [c.501]

Концентрацию иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Титр специфических АТ (изогемагглютинины групп крови, АТ, образующиеся после вакцинации, например про-тивокоревые или противостолбнячные, и др.) в сыворотке крови выявляют с помощью различных иммунологических реакций РА, РНГА и др. Для определения катаболизма иммуноглобулинов используют радиоизотопные метки. [c.90]

Другие исследования. Проводится также биологическое исследование — внутрибрющинное заражение мыщей и морских свинок с последующим обнаружением гриба во внутренних органах. При серологическом исследовании сывороток больных наиболее специфична реакция иммунодиффузии. Специфические антитела обнаруживают также в РСК, особенно на поздних сроках заболевания. Аллергическая проба специфична с аллергеном из тканевой формы гриба. [c.330]

Для идентификации грибов применяют реакцию иммунодиффузии или прямую РИФ с сыворотками к экзоантигенам HS, F или HL кокцидий. Применяют также методы геноидентификации. [c.333]

Серологическое исследование. Для сероэпидемиологических исследований в очагах применяют реакцию латекс-агглютинации или иммунодиффузии. Для диагностики и оценки состояния больных ставят РП, РСК, РИФ, ИФА, позволяющие выявлять титры специфических IgM и IgG. Для подтверждения кокцидиоидного менингита важным является обнаружение антител в ликворе больных, так как другие методы исследования при этой форме заболевания часто оказываются безрезультатными. [c.333]

НА в структуру КПА-1 и БД в структуру КПА-П вводили посредством реакции азосочетания. Для исследования иммуногенно-сти КПА-1 и КПА П проводилась иммунизация кроликов водными растворами КПА-1 или КПА-П. Методом встречной иммунодиффузии в агаре было установлено [102], что полученные иммуносыворотки (соответственно, А и Б) не взаимодействуют с исходным полимером-носителем - терполимером ВП-КК-п-КАФ, но реагируют с соответствующим КПА, использованным в низкой концентрации (2.010 мол/л). [c.185]

Иммунизацией кроликов КПА П1 была получена иммуносыворотка В, которую использовали в качестве тест-системы для определения наличия КБА, содержащих 3-ГАКв крови опьггных животных и пациентов. Объектом исследования служили сыворотки крови рабочих резиновой промышленности, имеющих повышенный риск заболеваний опухолями легких и желудка [107]. Определение наличия 3-ГАК-КБА в сыворотке крови проводилось методом встречной иммунодиффузии в агаре. В опытах использовалась сыворотка 56 рабочих. Контролем служила сыворотка крови 30 [c.186]

Сочетание иммунодиффузии с гель-фильтрацией в тонком слое представляет собой чувствительный метод, напоминающий и дополняющий иммуноэлектрофорез. Далее мы называем этот метод имм шо-гель-фильтрацией, хотя были предложены и другие термины, например, иммунохроматография [17, 53] и гелевая иммунофильтрация [54]. Известно несколько вариантов этого метода 13—15, 17, 53—55]. Грант и Эвералл [54] проводили иммунодиффузию в слое сефадекса. Хотя в цитируемых здесь работах приводятся отличные спектры иммунопреципитации, эта методика, как отмечают сами авторы, имеет ряд недостатков [56, 57]. [c.271]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.271 , c.272 , c.328 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.75 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.240 , c.245 , c.335 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.251 , c.253 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология