Ионизация электрораспылением

Рис. 9.4-8. Интерфейсные системы для сочетания хроматографов и масс-спектрометров в режиме on-line, а — устройство на основе делителя потока (ГХ-МС) б —устройство для сочетания со спектрометрами с ионизацией потоком ускоренных частиц в — устройство для сочетания с последующим термораспылением г —устройство для сочетания с последующим электрораспылением или ХИ при атмосферном давлении.

Как MALDI, так и ионизацию электрораспылением можно легко сочетать с ферментативным расщеплением белков для последующего определения их параметров. После расщепления белка полученная смесь целиком помещается в MALDI-спектрометр и анализируется. В наиболее благоприятных случаях можно определить массу более чем 90% пептидных фрагментов. Этот подход можно использовать для определения изменений в белке, например при определении параметров рекомбинантных белков или для идентификации ковалентно-связанных модификаторов белка. Масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением, вследствие того, что она легко сочетается как с ЖХ-МС, так и тандемной масс-спектрометрией, может быть источником еще и дополнительной информации о последовательности аминокислот в белке. При химической ионизации пептид фрагментируется на два комплементарных ряда ионов, которые имеют последовательности аминокислот, начиная с С- и N-терминальных атомов пептида. Тандемная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением оказывается более экспрессной и находит более разнообразное применение, чем традиционные биохимические методы, такие, как последовательное отщепление аминокислот по методу Эдмана. [c.308]

Низкие скорости потока (100 нл/мин) делают возможным сочетание КЭ с масс-спектрометрией (МС). Главная проблема при таком сочетании состоит, однако, в том, что в переходнике из капилляра в источник ионов элюент не будет всасываться из капилляра за счет существующего там вакуума. При падении давления 1 бар в капилляре длимой 1 м (внутренний диаметр 50 мкм) линейная скорость потока составляет 1 см/с. Возникающий в результате этого ламинарный параболический профиль потока привел бы к заметной потере эффективности. По этой причине перед ионизацией нужно проводить "улучшение" потока в капилляре. Ионизация электрораспылением позволяет осуществлять МС-детектирование биополимеров в результате образования множества заряженных частиц. В качестве примера показано разделение четырех фосфониевых ионов. Если записать общий ионный ток, то получим только два пика. Селективное детектирование отдельных соединений возможно при определенном соотношении масса/заряд (правая часть рис. 30). [c.40]

Рис. 9.4-6. Методы мягкой ионизации, а — масс-спектр пептида Tyr-Ala-Gly-Phe-Leu, полученный при ионизации методом ББА 5 — масс-спектр цитохрома лошади (1пмоль), полученный методом MALDI, в качестве матрицы использовали 2,5-дигидроксибензойную кислоту в — масс-спектр цитохрома лошади (1 пмоль/мкл) в 50% водно-метанольном растворе (-(-1% уксусной кислоты), полученный методом электрораспыления в спектре присутствуют многозарядные ионы ( ионный конверт ).

Ионизация термо- и электрораспылением идеально подходит для сочетания жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии в режиме оп-Ипе. [c.274]

Потребовалось более 20 лет, чтобы группа методов ионизации при атмосферном давлении (АДИ), использованных в первых приемах, разработанных для связи ЖХ и МС [14.3-5], развилась, пожалуй, в наиболее гибкую группу интерфейсов и методов ввода пробы. Термин АДИ означает три различных метода, которые отличаются в основном принципом распыления интерфейсы с тепловым распылителем, электрораспылением и ионным распылением. [c.626]

Этот метод основан на том, что в растворах полярные соединения в результате взаимодействия с растворителем легко образуют ионы и заряженные комплексы, и поэтому масс-спектрометрический анализ таких растворов не требует предварительной ионизации пробы. Электрораспыление включает три основные стадии 1) собственно распыление, которое сопровождается образованием маленьких высокозаряженных капель 2) десорбцию ионов из этих капель, сопряженную с образованием псевдо-молекулярных ионов 3) формирование в масс-спектрометре ионного пучка для анализа. [c.35]

Рутинный анализ конъюгатов лекарственных веществ методом ЖХ-МС с ионизацией термораспылением был невозможен, но внедрение ионизации электрораспылением позволило применить этот метод для определения неразрушенных глюкуронидных и сульфатных конъюгатов. Чувствительный и селективный мониторинг глюкуронидов и сульфатов при исследовании метаболитов лекарственных веществ можно осуществить и применяя сканирование нейтральных молекул по потерям масс 176 (разрыв гликозидной связи С-О) и 80 (отрыв 80з) соответственно. [c.307]

Одним из чрезвычайно интересных новых областей приложения масс-спектрометрии, которые активно изучается в настоящее время, является биохимия, или, точнее, определение параметров белков. Это является результатом внедрения таких методов, как MALDI и ионизации электрораспылением, которые обеспечивают экспрессное и точное определение средних молекулярных масс белков при малом количестве материала (на уровне пикомолей или ниже). Определяют среднюю молекулярную массу белка, так как для разделения различных изотопных пиков потребовалось бы спектральное разрешение по массе свыше 10000. В сравнении с другими, более традиционными биохимическими методами для определения молекулярной массы биологических макромолекул, такими, как SDS-PAGE и гель-проникающей хроматографии, масс-спектрометрия обеспечивает быстрое и легкое измерение, требующее малых количеств материала и обеспечивающее непревзойденную точность. Однако масс-спектрометрия является деструктивным методом, и использованный образец нельзя восстановить для последующих экспериментов. [c.307]

MALDI и ионизация электрораспылением сильно различаются по виду предоставляемой информации. Спектр MALDI относительно прост, в нем присутствует интенсивный пик изучаемого белка с m/z, соответствующим однозарядному иону (см. рис. 9.4-6,б). Кроме того, в спектре могут находиться менее интенсивные пики, соответствующие многозарядным ионам, например [М + 2Н] + и димерам, связанным водородной связью, т. е. [2М + Н]+. С использованием подходящих (внутренних) стандартов можно достичь точ- [c.307]

Плазменная десорбция (PD) Термораспыление (TS) Ионизация электрораспылением (ESI) [c.15]

Следует заметить, что ионизацию электрораспылением полезно использовать вместе с времяпролетными масс-спектрометрами, обеспечивающими измерение массы больших молекул. Однако простые секторные и квадрупольные масс-спектрометры также вполне пригодны для этих целей. Дело в том, что при электрораспылении возникают многозарядные ионы, которые регистрируются при значениях массовых чисел minz [c.35]

Интерфейс с электрораспылением (ЭРИ) работает при значительно более низких скоростях потока, обычно 1-10 мкл/мин. Процесс ионизации с электрораспылением включает распыление потока жидкости в аэрозоль с каплями, несущими большой заряд, и ионизацию определяемых молекул после удаления растворителя из заряженных капель. ЭРИ относится к интерфейсам АДИ, поскольку проба вводится после соответствующего деления с хроматографической колонки или непосредственно через инфузионный аппарат с помощью иглы из нержавеющей стали в десольватационную камеру при атмосферном давлении (рис. 14.3-7). В то время как игла находится при заземленном потенциале, к цилиндрическому электроду прикладывается сильное электрическое поле (2-5 кВ), которое заряжает поверхность жидкости, выходящей из иглы, при этом создается тонкий аэрозоль из заряженных капелек. Двигаясь в электрическом поле, капельки проходят через поток осушающего азота. Поток газа предназначен для испарения растворителя, а также чтобы предотвратить попадание незаряженных частиц в источник ионов. Затем ионы проходят через капилляр и попадают в вакуум первого уровня откачки, а затем, после прохождения через систему линз и дальнейшую откачку, в масс-анализатор. [c.627]

Сравнение различных ЖХ-МС-интерфейсов затруднительно. Общие рекомендации по использованию ЖХ-МС-интерфейсов дать невозможно выбор интерфейса сильно зависит от конкретной задачи, которую необходимо решать (см. табл. 14.3-2). Если требуется максимальная чувствительность, часто наилучшим оказывается интерфейс АДХИ (с тепловым распылением) возможно, лишь в некоторых случаях он будет превзойден интерфейсом с электрораспылением. Однако методы ХИ вряд ли могут обеспечивать какую-либо структурную информащ1Ю. Для этих целей следует использовать методы с ионизацией ЭУ, такие, как интерфейс с пучком частиц. Выигрыш в химической информации (когда может бьггь получен типичный характер фрагментации) может компенсировать значительно более низкую чувствительность. Сравнение различных интерфейсов по подходяш им для них скоростям потока и пределам обнаружения проведено в табл. 14.3-1 и 14.3-2. [c.629]

I. Газовая фаза (для летучих соединений) П. Жидкости (подвижные фазы в ВЭЖХ) III. Конденсированные среды (нелетучие вещества в специальных матрицах) Электронный удар (EI) Химическая ионизация ( I) Термораспыление (TS) Электрораспыление (ES) Ионизация быстрыми атомами (FAB) другие вторично-эмиссионные методы [c.307]

В зависимости от способности анализируемых соединений к протонированию при использовании метода термораспыления некоторые вещества вообще не регистрируются, что является одним из главных недостатков этого способа. Например, при pH элюента 4,0 можно детектировать анилин (рКд 4,6), имидазол (рКд 7,0) и другие ароматические и гетероциклические амины, но пиразол (рКд 2,5), фенол (рКд 9,9) не образуют ионов 8Н+ в растворе в заметных количествах. Более универсальным методом является поэтому т.н. электрораспыление, когда процесс испарения растворителя осуществляется в электрическом поле (1-6 кВ). Это приводит к неселективной ионизации практически любых органических соединений. Вместо электрораспыления иногда используют сочетание термораспыления с последующей ионизацией электронным ударом. [c.311]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология