Метод биотестов

В последние годы на смену биотестам in vivo на лабораторных животных приходят методы биотестирования in vitro с использованием антител, тканей-мишеней, иммобилизованных клеток-мишеней. [c.314]

Газовая стерилизация. Этот метод применяется для обработки оптики, кардиостимуляторов, сложной техники (аппаратов искусственного кровообращения), изделий из полимеров, стекла, металлов. Используют окись этилена или смесь ОБ (окись этилена с бромистым метилом), озон, а также пары раствора формальдегида в этиловом спирте, которыми наполняют стационарные газовые стерилизаторы или портативные анаэростаты. Для поддержания температуры (35 или 55 °С) анаэростаты помещают в термостат или водяную баню. Для упаковки используют полиэтиленовую пленку (два слоя), пергамент и специальный упаковочный материал. Выбор метода и режима газовой стерилизации зависит от вида стерилизуемого изделия (например, смесью ОБ разные изделия стерилизуют от 4 до 16ч). Стерилизованные газом изделия применяют после их выдержки (в течение 1 — 21 сут) в вентилируемом помещении. Срок сохранения стерильности для изделий в упаковке из полиэтиленовой пленки — 5 лет, пергамента или бумаги — 20 сут. Контроль процесса ведут по показаниям приборов (термометров, мановакуумметров), а контроль эффективности стерилизации — с помощью биотестов. [c.440]

В последние годы, благодаря быстрому развитию биотехнологии клеточных культур, стало возможным использовать иммобилизованные монослои клеток-мишеней в биотестах — высокочувствительных специфических системах, предназначенных для количественного определения ряда биологически активных веществ. Основные принципы, лежащие в основе метода биотестирования, иллюстрирует рис. 10.1. [c.318]

Ко второй группе относят функционально-специфические методы (или биотесты) определения биологической активности гормонов. Они основаны на сопоставлении действия гормонов на физиологические функции органов или клеток-мишеней. Благодаря функциональной специфичности ответа ткани-мишени, она будет узнавать только молекулы, обладающие по отношению к ней определенной биологической активностью, в то время как другие молекулы, даже с очень сходной структурой, никакого ответа в клетках-мишенях не вызовут и, следовательно, не будут определены с помощью данного биотеста. Необходимо отметить, что величина специфического ответа клеточной культуры на действие гормона пропорциональна количеству занятых рецепторов клеточной поверхности и поэтому зависит от концентрации биологически активного вещества в пробе, действию которого подвергают ткань-мишень. На практике при биотестировании сравнивают величины ответа ткани-мишени после инкубации с тестируемым и контрольным (стандартным) растворами. [c.318]

Для изучения транспорта ауксинов и других фитогормонов часто используются меченые индольные соединения. Суть метода определения ауксинов в процессе их транспорта заключается в том, что на отрезок какой-нибудь части растения, в частности на верхушку отрезка стебля или на верхушку декапитированного колеоптиля, накладывается блок агара с ИУК, называемый блоком-донором, а к нижней части отрезка прикладывается пустой агаровый блок, называемый блоком-рецептором, или приемником. Об активности передвижения ауксинов из блока-донора в блок-рецептор судят по величине изгиба биотеста — колеоптиля, к которому прикладывают блок-приемник с поступившей в него ИУК. [c.43]

Прогресс в исследовании фитогормонов в значительной мере объясним успехами в технике их очистки и препаративного выделения. Начиная с 1952 г. в практике изучения природных ростовых веществ используется хроматографическое разделение растительных экстрактов. В сочетании с биотестами указанный прием позволил обнаружить в тканях растений ауксины, гиббереллины и кинины. И до настоящего времени эти методы анализа остаются ведущими в исследовании свойств природных регуляторов роста. [c.9]

В связи с разработкой биотестов стал возможным комплексный анализ ряда гормонов с помощью как структурно-специфических, так и функционально-специфических методов, что позво- [c.318]

В целом следует признать, что биотесты представляют собой удобные методы, позволяющие обнаружить активность фитогормонов или ингибиторов. Этими методами целесообразно пользоваться на начальном этапе работы при первичном выделении чистого продукта из тех или иных сложных органических субстратов. Однако и на различных ступенях химической очистки также прибегают к методам биологического контроля фитогормонов (Муромцев, Русанова, 1966), тем более что химические методы идентификации фитогормонов или еще недостаточно чувствительны, или мало специфичны (Кефели и др., 1964 Романова, Иванова, 1970). [c.21]

Приведем несколько данных о подвижности абсцизовой кислоты в разных смесях растворителей. Имеющиеся сведения о цветных реакциях природных ауксинов и ингибиторов говорят скорее о подсобном характере этого приема анализа, который может на первом этапе дать лишь общую характеристику расположения веществ на хроматограммах, причем индольные ауксины и абсцизовая кислота на хроматограммах с помощью цветных реакций не обнаруживаются. Тем большее значение для обнаружения физиологически активных веществ приобретают биологические методы исследования (биотесты). [c.33]

Зоновый диффузионный метод определения токсичности веществ основан на том, что активное вещество диффундирует с центра нанесения сквозь агаровую среду (или пластинку, или на поверхности почвы) и создает стерильную зону, в которой не развивается чувствительный к препарату микроорганизм. Чем сильнее токсичность вещества для биотеста, тем больше стерильная зона вокруг места нанесения испытуемого вещества. [c.152]

В последнее время в тканях многих растений был обнаружен терпеноидный ингибитор роста — абсцизовая кислота, которая вместе с фенолами входит в состав -ингибитора. Абсцизовая кислота подавляет на 50% рост отрезков колеоптилей в дозе 0,08 мг/л, т. е. обладает в 100 раз более сильным действием на рост биотестов, чем фенольные ингибиторы. Хотя предлагаемый метод не предусматривает выделения отдельных чистых веществ, при выборе системы растворителей следует руководствоваться правилом выбирать такую смесь, которая позволила бы разделить природные регуляторы друг от друга на наибольшее расстояние. В таблице приводятся данные о разделении ИУК, гиббереллина, флоридзина, /г-кума-ровой и абсцизовой кислот в нескольких смесях растворителей. [c.13]

Помимо перечисленных существуют и некоторые другие биотесты на цитокинины, однако они либо более сложны, либо менее специфичны. Поэтому подробнее эти методы здесь не рассматриваются. [c.73]

Тест на рост отрезков колеоптилей пшеницы используется как для определения ауксинов, так и для определения природных ингибиторов роста. К гиббереллинам и кининам он практически не чувствителен. Недостатками этого метода являются трудоемкость препарирования отрезков колеоптилей, утомительная процедура выталкивания первичного листика из колеоптильного цилиндра, длительный процесс выбора сорта пшеницы, пригодного для теста. При подборе сорта для такого биотеста обычно руководствуются следующими требованиями 1) семена сорта должны обладать хорошей всхожестью 2) за 48 час. выращивания проростки должны достигать 18—20 мм длины 3) нарезанные колеоптили за инкубационный период должны прирастать таким образом, чтобы результаты промеров их приростов можно было уложить в одновершинную кривую Гаусса, что позволит определить степень стандартности материала 4) отрезки должны обладать хорошей чувствительностью к ИУК, т. е. прирост отрезка колеоптиля в растворе ИУК должен превышать прирост контрольного отрезка на 250—300%. [c.18]

Приводится описание определения свободных природных гиббереллинов в растительном материале. В основе метода лежит экстракция этанолом, очистка и хроматографическое разделение экстрактов ай бумаге. Для определения гиббереллиновой активности применяются биотесты —реакция проростков карликового гороха Пионер и образование стебля у рудбекии. [c.194]

Еще одним биотестом, используемым для обнаружения фитогормонов, является метод молодых колеоптилей пшеницы (Wright, 1961), которые после первых суток роста, будучи изолированными от зерновки, обладают повышенной чувствительностью к гибберелли-ну и кинетину. При инкубации на растворах этих веществ удается вызвать стимуляцию их роста даже дозой 10 М. Недостатком этого метода опять же является отсутствие его специфичности, так как колеоптили легко реагируют на оба фитогормона. [c.19]

Современные методы люминесцентного анализа позволяют определять малейшие изменения интенсивности биолюминесценции не только у фотобактерий, но и у многих других биологических объектов, что позволило разработать комплекс высокочувствительных биотестов на присутствие токсичных веществ [5, 6]. [c.29]

Химические методы анализа и биотесты на росичке показали, что трифлоралин не выщелачивается и не перемещается в почве [c.254]

Примером практического применения метода является разработанный в лаборатории Стефана Бидея (США) метод биотестирования тиреотропного гормона (ТТГ) с помощью иммобилизованных клеток щитовидной железы человека. Эти эксперименты позволили получить стандартный препарат бычьего ТТГ в качестве альтернативного вторичного стандартного препарата по отношению к менее доступным препаратам ТТГ человека в рутинных лабораторных биотестах. [c.319]

Классификация по природе процессов, используемых для получения аналитического сигнала. Тест-методы могут быть разделены на физические, химические, биохимические и биологические. Физических методов немного, и они не играют большой роли в практике химического анализа. Биохимические методы обычно основаны на использовании ферментов и иммуносистем. Выделенные природные ферменты, особенно иммобилизованные, в известной мере приобретают свойства химических реагентов, поэтому, несмотря на специфику ферментов как химических соединений (особенности происхождения, условия хранения, время сохранения активности), ферментные методы можно отнести к химическим. Иммунометоды больше тяготеют к биологическим методам. Биологические методы, базирующиеся на использовании микроорганизмов, органов, тканей и даже высокоорганизованных организмов и целых популяций, упомянуты только в разделе, посвященном определению суммарных показателей (биотесты). [c.211]

Биологические тесты используются при наличии отработанных методик, предварительно выверенных в лаборатории при строго контролируемых условиях и при различных диапазонах концентраций данного токсиканта, однако они не заменяют аналитические методы, так как у казывают лишь на факт присутствия в водоеме концентраций, соответствующих чувствительности данного теста. В отношении возможностей использования биотестов для количественного определения токсикантов зкоперименталь-ных данных пока мало, хотя при дальнейших разработках не исключена возможность применения биологических экспресс-тестов и для этой цели. [c.245]

В изучении функций фитогормонов метод биопроб, или биотестов, сыграл и продолжает играть ведущую роль. Биотестом, или бионро-бой, считают такие объекты (растение или отдельные его части), которые обладают повышенной чувствительностью в отношении вводимых извне фитогормонов или ингибиторов. [c.17]

Большинство методов определения гиббереллинов основывается на общем принципе — повышенной чувствительности стебля или отдельных его участков к этому фитогормону (Mi halski, 1967 Hoad, Kuo, 1970). Михальский (Mi halski, 1967) провел большую сравнительную работу по изучению разнообразных гиббереллиновых проб. Он обнаружил наибольшую чувствительность у салата Винтера, реагирующего на 10 ° г/мл гибберелловой кислоты. Однако чувствительность к фитогормону — это лишь одно из свойств биотеста. Другим его положительным качеством должна являться специфичность. Михальский показал, что специфическое свойство гиббереллинов — проявлять свое действие только на целом растении — исчезает, если в качестве теста использовать часть растения. Эта закономерность была прослежена на целых растениях риса, кукурузы, гороха, огурцов, салата. [c.20]

Кроме биотестов, в основе которых лежит рост, существуют и другие методы, основанные на действии фитогормонов на некоторые биохимические реакции. Так, для определения гиббереллинов использовали метод индукции а-амилазы в эндосперме ячменя (Paleg,. 1961), для обнаружения кининов применяли методы задержки разрушения хлорофилла (Osborne et al., 1961 Kende, 1964). [c.21]

Начиная с 20-х и кончая 50-ми годами текущего столетия, биотесты были единственным орудием в руках экспериментаторов, исследующих фитогормоны. С помощью этой высокочувствительной техники удалось вскрыть гормональную природу таких сложных явлений, как фото- и геотропизм, рост стебля и процесс корнеобразова-ния, однако при этом исследователи вынуждены были искать объекты, свободные от тормозящих факторов, для чего в опытах брали бесхлорофильные или этиолированные ткани. Введение в круг физиологических исследований метода хроматографии на бумаге в значительной степени изменило характер работ, проводимых в области физиологии роста, переведя их на уровень количественных определений отдельных хроматографически очищенных ростовых веществ. [c.21]

Кулаева О. Н. 1966. Определение кининовой активности веществ с помощью биотестов. — В сб. Методы определения регуляторов роста и гербицидов . М., Наука , стр. 120. [c.224]

Содержание пуринов можно определять также при помощи микробиологических методов в качестве биотеста широко применяется шутАпт Neurospora, для роста которого необходим аденин [42]. [c.105]

В данной статье изложено несколько методов определения цитокининовой активности с помощью биотестов и рассмотрены их сильные и слабые стороны. На этом основании в каждом конкретном случае может быть выбрана методика, наиболее отвечающая поставленной задаче и условиям эксперимента. Следует иметь в виду, что лучше всего не ограничиваться одним из биотестов, а параллельно использовать два различных метода определения цитокининовой активности веществ. [c.73]

Тонкослойная хроматография. Обычно в зоне абсцизовой кислоты на бумажной хроматограмме находятся сопутствующие вещества (возможно фенольной природы), которые затрудняют идентификацию этого ингибитора. Поэтому для дальнейшей очистки мы применяли метод тонкослойной хроматографии. Для этого ингибирующую зону, определенную по биотесту, вырезают из бумажной хроматограммы и элюируют 96%-ным этиловым спиртом 2— 3 раза. Спирт упаривают под вакуумом при температуре 40° до небольшого объема и этот объем наносят на пластинки с тонким слоем в виде полосы, отступая от края пластинки на 1,5 см. При приготовлении пластинок применяли общепринятую методику [7]. В качестве адсорбента использовали селикагель Н , который очень удобен при определении ростовых веществ, так как не содержит соединений, мешающих проведению биологических тестов. Удобны готовые пластинки Силуфол ЦУ -254 с люминисцентным индикатором, что значительно облегчает идентификацию веществ по флюоресценции или поглощению в УФ-свете. [c.92]

Определение цитокининовой активности веществ с помощью биотестов. Кулаева О. И. Сб. Методы определения фитогормонов, ингибиторов роста, дефолиантов и гербицидов . М., Наука , 1973 г., стр. 63—73. [c.195]

Активность ростовых (веществ после хроматографической разгонки экстрактов и их извлечения определяли в З-иратнон повторности биологическим методом, описанным Кефели и Турецкой (1963). В качестве растворителей применяли кислую смесь (н-бутанол, ледяная уксусная кислота, вода в соотношении 40 12 28 соответственно). Биотестом служили колеоптиля [c.141]

Определение содержания активного агента в препарате служит для оценки эффективности производства и одновременно является основой для стандартизации конечного продукта. Его осуществляют различными методами, а именно морфологически (подсчет числа клеток), культурально (определение числа жизнеспособных клеток в среде) или с помощью биотестов (определяя на соответствующих хозяевах ЛД50 и ИД50). Эффективность некоторых препаратов (например, В. thuringiensis) устанавливают по результатам биотеста, сопоставляя их с показателями препарата-стандарта. [c.154]

См. работу об использовании грибков как биотеста [Ni holas D. J. D. Analyst, 77, 629 (1952)]. Сообщается, что этим методом обнаруживается даже 0,0001 у молибдена в 50 мл раствора. [c.28]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология