Седиментация рибосомной РНК

В минорный компонент со средним коэффициентом седиментации около 4S входит также транспортная РНК к каждой рибосоме, активной в синтезе белка, прикреплено по две молекулы транспортной РНК, что составляет 3% общего количества рибосомной РНК (гл. 15). Два главных компонента рибосомной РНК имеют коэффициенты седиментации 28S и 18S (примерно 2/3 и 1/3 соответственно от всей массы РНК 808-частицы). 28S-PHK образуется [c.24]

Затем было изучено влияние ионов Mg" " на константы седиментации рибосомной РНК. При добавлении 10 М Mg " на фоне 0,15М Na константы седиментации обеих фракций оказались равными 21 и 29 s при понижении Mg" " почти до нуля стали обычными 16 и 23 s. [c.279]

Константы седиментации рибосомной РНК 5S, I6S, 23S + [c.6]

Рибосомы с константой седиментации 70 S и 80 S, полученные из клеток млекопитающих, также содержат два вида г-РНК, но-видимому соответствующие рибосомным субъединицам 30 S и 50 S. Молекулярный вес этих РНК варьирует в зависимости как от источника их получения, так и использованных методов разделения и анализа [64] в пределах от 0,7 10 — 1,0 10 (18— 22S) до 1,6 10 — 2,1-10 (28—34S). [c.54]

В каждой клетке Е. oli имеется больше 15 ООО рибосом, которые составляют почти четверть сухого веса клетки. Прокариотические рибосомы содержат приблизительно 65% рРНК и около 35% белка. Вес рибосомной частицы 2,8 10 даль-тон, диаметр 18 нм, коэффициент седиментации 70S. [c.935]

Рибосомы, связанные с эндоплазматической сетью (которые можно получить путем дальнейшего фракционирования микросомной фракции), и свободные рибосомы (которые получают нри длительном центрифугировании цитоплазмы), по-видимому, идентичны. Из этих рибосом можно экстрагировать два типа РНК каждый такой тип локализуется в одной из двух субъединиц рибосомной частицы и специфичен для нее. Молекулярные веса этих двух типов РНК равны приблизительно 5-10 и 1,3-10 , а константы седиментации колеблются в пределах 16 —18 и 23—28 3 соответственно. Очень много белков, по-видимому, ассоциировано с рибосомами или входят в их состав. Некоторые из них (но отнюдь не все ) — это, очевидно, новообразованные бе.лки, синтез которых на поверхности рибосомы только что закончился. [c.253]

Активный комплекс. Рибосомные частицы из Е. соЦ, способные осуществлять синтез белка,— это частицы с константой седиментации 70 S и средним диаметром около 180 А. Они состоят из двух неодинаковых (30 S-и 50 S-) субчастиц, образующих активную рибосому в присутствии сравнительно высоких концентраций ионов (>10 М). Каждая из таких частиц (молекулярный вес их равен соответственно 9-10 и 1,8-10 ) состоит приблизительно на одну треть из белка и на две трети из РНК. Константы седиментации РНК, содержащейся в этих субчастицах, равны соответственно 16 S и 23 S (мол. вес 6-10 и 1,2-10 ). 16S- и 23S-PHK отличаются одна от другой, вероятно, не только по молекулярному весу, но также по нуклеотидному составу и по нуклеотидной последовательности. [c.523]

Общая картина, найденная после разделения, изображена на рис. 150. Измерение оптической плотности, или суммарный метод определения РНК, обнаруживает частицы (рибосомы) с константами седиментации 50 8 и 30 8 и небольшое количество с 70 8, что вполне нормально для рибосомного препарата при низкой концентрации Что [c.469]

Р. из самых разнообразных, организмов (как прокариотич., так и эукариотич.) имеют сходное строение. Они состоят из двух разделяемых субчастиц, или рибосомных субъединиц. При определенных условиях (напр., при понижении концентрации Mg + в среде) Р. обратимо диссоциирует на две субчастицы с соотношением их мол. масс ок. 2 1. Прокариотическая 70S Р. диссоциирует на субъедишщы с коэф. седиментации 50S (мол. м. 1,5-10 ) и 30S (мол. м. 0,85-10 ). Эукариотическая Р. разделяется на субчастицы 60S и 40S. Две рибосомные субчастицы объединены в полную Р. строго определенным образом, предполагающим специфич. контакты их поверхностей. [c.264]

Однако хлоропласты и митохондрии эукариотических клеток содержат рибосомы, отличные от 80S типа. Рибосомы хлоропластов высших растений принадлежат к истинному 70S типу и практически не отличимы от рибосом эубактерий и синезеленых водорослей по вышеприведенным показателям и по более детальным молекулярным характеристикам. Митохондриальные рибосомы более разнообразны в зависимости от принадлежности организма к тому или иному царству эукариот. Наиболее изучены рибосомы митохондрий грибов и млекопитающих. Митохондриальные рибосомы грибов (Sa haromy es, Neurospora) похожи на прокариотические 70S рибосомы, но, может быть, лишь слегка крупнее (около 75S) и содержат относительно больше белка абсолютное содержание рибосомной РНК в них, повидимому, почти такое же, как в типичных 70S рибосомах. Митохондриальные рибосомы млекопитающих, однако, существенно мельче типичных 70S рибосом, имея также и существенно меньшее абсолютное количество рибосомной РНК на частицу их иногда называют мини-рибосомами . Действительно, коэффициент седиментации рибосом из митохондрий млекопитающих составляет всего около 55S, а тотальная масса рибосомной РНК на частицу более чем на 1/3 меньше, чем в типичных 70S рибосомах. В то же время, митохондриальные рибосомы млекопитающих содержат довольно много белка, так что общие размеры их как будто бы не сильно отличаются от таковых прокариотических рибосом. В целом, несмотря на ряд необычных черт, по ряду своих признаков, и в том числе по функциональному поведению, митохондриальные рибосомы млекопитающих все же близки к прокариотическим 70S рибосомам. [c.54]

Рис. 75. Седиментационные диаграммы рибосомных 50S субчастиц по мере их разворачивания путем понижения ионной силы (по L. Р. Gavrilova et al. J. Mol. Biol., 1966, V. 16, p. 473-489) предварительно 50S субчастиц были обработаны высокой концентрацией NH l для обеднения Mg2+ разворачивание прослеживается (сак дискретные переходы в состояния с пониженными коэффициентами седиментации, без деградации частиц концентрации NH4 I указаны слева коэффициенты седиментации приведены под каждой диаграммой.

Для рибосомного бачка 82 малой субъединицы печени крысы получены значения константы седиментации 2,128, коэ< эфициент диффузии I) — 5,88 см -/с и парциальный [c.338]

РНК отличается гораздо более низкой мол. массой, поскольку транскрипция с ДНК идет по относительно небольшим областям. Большую часть клеточной РНК (по массе) составляет РНК рибосом — специальных телец, в к-рых синтезируется белок. В рибосомы входят три типа РНК. В бактериях рибосомная РНК (рРНК) имеет константы седиментации 5, 16 и 23 единицы Сведберга, что соответствует мол. массам 35 ООО, 550 ООО, 1 100 ООО. В высших организмах соответственно рибосомы содержат РНК с мол. массами 40 ООО, 700 ООО, 1 700 ООО. [c.193]

Среди рибосомных РНК обнаружено два основных вида. Из рибосом Е. oli с константой седиментации 50 S и 30 S (фиг. 48) получены РНК с молекулярным весом 1,12 - 10 (23 S-РНК) и 0,56 10 (16S-PHK) соответственно [65]. Было высказано предположение, что обе эти РНК построены из одной и той же субъединицы, причем 23S-PHK является димером 16S-PHK [91]. Однако это заключение не соответствует действительности, поскольку рассматриваемые виды РНК различаются по относительному расноло/кению оснований [92, 93] кроме того, в опытах по гибридизации они образуют гибриды с различными частями бактериального генома (стр. 239). [c.54]

Наиболее удобный метод состоит в сравнении (при идентичных условиях, желательно в той же центрифужной пробирке) неизвестного вещества со стандартом, который имеет сходный состав и для которого значение s известно. Такие стандарты в настоящее время доступны, а некоторые из них даже поступают в продажу. В качестве белковых стандартов мон ет служить ряд ферментов (лизоцим М = 17 200, ао.ш = 2,15 3 дрожжевая алко-гольдегидрогеназа М = 150 000, S2o,w — 7,6 S каталаза М = 250 ООО, 2o,гй = 11,35 S). Для транспортной РНК из печени, из дрожжевых клеток и из клеток Е.соИ величина s равна 4,5 8, а для двух типов рибосомной РНК из E- oli она равна соответственно 16 и 23 S. Все эти типы РНК могут быть использованы в качестве стандартов для РНК. ДНК из фагов Л, и Т7 относительно легко получается в неповрежденном виде в двух формах — с константами седиментации 33,6 и 32,5 S соответственно их можно использовать в качестве стандартов для нормальных типов ДНК. Для любой пары стандарт—неизвестное вещество с идентичным v выполняется следующее простое соотношение [c.138]

По-видимому, основная масса синтезированных в ядрышке белков иснользуется для образования рибосом. Наличие в ядрышке рибосом впервые было показано с помощью электронной микроскопии на электронных микрофотографиях в ядрышке обнаруживалось большое количе-ство частиц, по своим размерам сходных с рибосомами цитоплазмы. Было найдено, что[в экстрактах целых клеточных ядер содержатся частицы, состав и коэффициент седиментации которых сходны с соответствующими параметрами рибосом, описанных Тео и Сато [54]. Бёрнстил иего коллеги выделили эти частицы из изолированных ядрышек и показали, что они обладают основными свойствами рибосом, т. е. имеют коэффициент седиментации 80S, распадаются на субъединицы] при удалении ионов магния, а аминокислотный состав их белка сходен с аминокислотным составом белка цитоплазматических рибосом. Факт синтеза рибосомного белка в ядрышке был подтвержден опытами, в которых изолированные ядра инкубировали в течение короткого времени с меченой аминокислотой. Затем из таких ядер выделяли ядрышки, а из них выделяли белок, обладавший самой высокой скоростью включения аминокислот. [c.40]

Весьма интересным оказалось применение метода скоростной седиментации к исследованию взаимодействующих [42] ассоциирующих частиц. Большие центробежные поля в ультрацентри-фуге являются одной из причин диссоциации рибосомных белков при их выделении методом зонного центрифугирования. Это интересное явление, обнаруженное Бреслером [43], указывает на влияние гидростатического давления на диссоциацию олигомерных белков и рибосом на субъединицы. [c.22]

Вернемся теперь к рибосомной РНК, которая составляет около 90% клеточной РНК. Выделение ее в нативном состоянии из клеток представляло большие трудности. Только замораживая ткани и немедленно депротеинизируя их 50%-м фенолом, удалось избавиться от расш,еп-ляюш его действия РНК-азы. Тогда выяснилось, что рибосомная РНК, будь то из клеток Е. oli или из клеток печени крысы, дает в ультрацентрифуге два острых пика с константами седиментации в 16 н 23 S (рис. 95). При различных выделениях удается получить препараты со значительным преобладанием одной или другой фракции. Измеряя для разных препаратов (из Е. oli) светорассеяние, можно было найти связь между средней кон-S, и средним молекулярным ве- [c.278]

Рис. 95. Картина седиментации двух пиков рибосомной РНК 5,= 16з и 52=23з) в ультрацентрнфуге.

Картина распределения ИРНК по константам седиментации свидетельствует о значительной ее гетерогенности (до 4 пиков). Однако, если контакт клеток с радиоактивным урацилом продолжать долго, то получается три пика радиоактивной рибосомной РНК, идеально совпадающие с трел1я пиками оптической плотности 30 S, 50 S и 70 S. Ясно, что дополнительные пики являются реальными веществами, а не артефактами. [c.470]

Метод выделения ИРНК был применен также в случае заражения клеток фагом Та. После адсорбции в течение 2 мин. задавался урацил в течение последующих 3—5 мин. Вскрытие клетки при 10" М Мд " снова обнаруживало в рибосомном препарате присутствие отдельного радиоактивного пика. После де-протенизации получалась меченая фракция с константой седиментации 16 8. Здесь интересна деталь время контакта бралось достаточно большим (до 5 мин.), вместе с тем радиоактивность находилась вся в ИРНК в согласии с данными Фолькина. Значит, в зараженной клетке рибосомная РНК не синтезируется. Если взять столь же длительный импульс в незараженных клетках, то практически вся радиоактивность оказывается в рибосомах. [c.471]

Единственная существенная проблема в описанном выше подходе к фрагментации РНК заключается в том, чтобы в каждом опыте получать одинаковые фрагменты. В случае рРНК дополнительную гарантию воспроизводимости фрагментации можно получить, действуя нуклеазами на целую рибосому (Сох, 1969). Было найдено, что при обработке рибосом ретикулоцитов кролика панкреатической РНК-азой теряется 20-30% рибосомной РНК, однако при этом не наблюдается заметного изменения коэффициента седиментации рибосом или их вида на электронных микрофотографиях. Размеры фрагментов РНК, выделенных после нуклеазной обработки рибосом, указывают на то, что в большой субъединице рибосомы имеется около 40, а в малой - примерно [c.154]

По приблизительной величине s часто бывает удобно идентифицировать молекулы, которые исследуются только с помощью седиментации в градиенте сахарозы. В молекулярной биологии, в особенности при изучении различных видов РНК, константа седиментации имеет двойное назначение. С одной стороны, эта величина является точной и достаточно надежной характеристикой физико-химических свойств молекулы, а с другой стороны, константа седиментации используется для обозначения этих молекул. Так, мы называем их 18S и 28S-PHK или 16S- и 23S-PHK вместо того, чтобы говорить крупные и мелкие молекулы рибосомной РНК, полученные соответственно из высших организмов или микроорганизмов . Возможно, с точки зрения чистоты языка такие обозначения и нежелательны, однако на практике они удобны и сейчас широко уиотребляются. [c.137]

Каждая рибосома состоит из двух субчастиц, как это можно видеть на рис. 5.27. Из-за мелких размеров рибосомы при дифференциальном центрифугировании седиментируют последними среди всех других органелл рибосомную фракцию можно получить лишь после центрифугирования при 100 ООО g в течение 1—2 ч (см. рис. 5.9). Опыты по седиментации вьывили существование двух главных типов рибосом, которые были названы 70S- и 808-рибосомами. 708-рибосомы обнаруживаются у прокариот, а несколько более крупные 808-рибосомы — в цитоплазме эукариотических клеток. Интересно отметить, что в хлоропластах и митохондриях содержатся 708-рибосомы, что указывает на какое-то родство этих эукариотических органелл с прокариотами (разд. 7.4.1.). [c.195]

Кривые седиментации в градиенте плотности сахарозы смесей различных пар рибосомных экстрактов . oli. Концентрация Mg " в растворах сахарозы составляла 0,01 М, что приводило к частичной диссоциации 70 S-рибосом на составляющие их 50 S- и 30 S-субъединицы. А. Одни экстракт был получен из культуры, выращенной на тяжелой среде (D2O, и С) с Н-урацилом, а друго11 — из культуры, выращенной на легкой среде (НгО. N и -С) с С-урацилом. [c.428]

В качестве радиоактивной метки. Другая культура была выращена на обычной легкой среде, содержащей HjO, и В качестве радиоактивной метки в ней присутствовал С-урацил. Видно, что меченные С рибосомы, выделенные из легкой культуры, дают три пика с характерными константами седиментации 70S, 50S и 30S, соответствующими нормальным легким рибосомам и некоторому количеству диссоциированных 50S- и 30S- yбъeдиниц. Меченные рибосомы, выделенные из тяжелой культуры, дают три более быстрых максимума с константами седиментации 86S, 61S и 38S, соответствующих тяжелым 70S-pn6o oMaM и диссоциированным тяжелым 50S- и 30S- yбъeдиницaм. На фиг. 214, Б представлена аналогичная кривая седиментации в градиенте плотности сахарозы еще одной смеси рибосом, выделенных из двух культур Е. соИ. Одну из этих культур выращивали, как и ранее, в тяжелой среде с Н-урацилом, а затем переносили на нерадиоактивную легкую среду, где она росла в течение еще 3,5 генерации, после чего из нее выделяли рибосомы. Другая культура все время росла на тяжелой среде с С-урацилом. Видно, что после 3,5 генерации в легкой среде меченные Н тяжелые 508-и 308-субъединицы рибосом по-прежнему седиментируют с той же высокой скоростью, что и меченные тяжелые 50S- и 305-субъединицы тяжелой культуры, не подвергавшейся переносу. Но меченные Н, ранее бывшие тяжелыми 705-рибосомы той культуры, которую переносили с одной среды на другую, седиментируют теперь со скоростью, лежащей примерно посередине между скоростями седиментации полностью тяжелых и полностью легких 708-рибосом. Эти результаты показывают, что, в то время как тяжелые 50S- и 305-рибосомные субъединицы остаются неизменными после переноса бактерии в легкую среду, большинство из них за это время соединилось с легкими , позднее синтезированными партнерами и образовало наполовину тяжелые , наполовину легкие гибридные 708-рибосомы. [c.430]

ДНК мелких фагов [202]. Частицы, полученные с РНК ВТМ, характеризовались константами седиментации до 152S, а инфекционность их РНК была устойчива к действию РНК-азы [525]. Комплекс с рибосомной РНК имел двойной пик в соответствии с двумя компонентами рибосомной РНК. Мы уже упоминали, что, хотя вирусные частицы этой группы имеют такие же размеры и такое же содержание белка, как и вирус желтой мозаики турнепса, они тем не менее содержат вдвое меньше РНК. Исходя из этого, можно понять, почему в такие оболочки удается загнать удвоенное количество РНК. Но удивительнее всего, что сказанное относится лишь к посторонней РНК— при реконструкции вируса с гомологичной РНК ее количество в вирусной частице никогда не бывает удвоенным. Неожиданным в опытах оказалось и то, что белки различных вирусов рассматриваемой группы, по многим свойствам непохожие друг на друга, тем не менее оказались способными взаимодействовать между собой с образованием частиц со смешанными оболочками [536]. Вирусоподобные частицы образуются также и в отсутствие нуклеиновой кислоты, но в противоположность другим верхним компонентам вируса они при этом отличаются от вируса по электрофоретической подвижности [27]. [c.222]

Рибосомы, их субчастицы и РНК различаются по коэффици- ентам седиментации при ультрацентрифугировании (например, SOS-субчастица, ЗОЗ-субчастица и т. д. S —единицы Сведбер-та). Белки, из которых состоят субчастицы, пронумерованы в том порядке, в котором они располагаются на двумерной элект-рофореграмме в полиакриламидном геле SI — S21—это номера белков меньшей субчастицы, L1 — L34 —номера белков большей субчастицы эта нумерация относится к рибосомным белкам Е. oli. [c.45]

Смотреть страницы где упоминается термин Седиментация рибосомной РНК: [c.19] [c.283] [c.335] [c.53] [c.54] [c.63] [c.248] [c.514] [c.87] [c.20] [c.127] [c.279] [c.443] [c.469] [c.476] [c.137] [c.295] [c.313] [c.409] [c.489] [c.490] [c.278]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология