Белки осаждение

Белки, осаждение солями — см. Белки, высаливание. [c.14]

Высаливание белков. Осаждение белков из растворов солями называется высаливанием. Принцип высаливания заключается в следующем. Молекула белка удерживается в растворе вследствие действия на нее стабилизирующих факторов электрического заряда и водной оболочки (гидросферы). Ионы щелочных и щелочноземельных металлов несут заряд, противоположный заряду белковой мицеллы, и обладают большей гидрофильностью, чем белок. Поэтому при добавлении соответствующего количества солей в раствор белка он осаждается. При уменьшении количества солей в растворе, что достигается диализом или разбавлением водой, белки могут вновь перейти в раствор. [c.39]

Существующие методы осаждения белка можно разделить на методы обратимого осаждения и методы, применение которых ведет к разрушению пространственной структуры белковых молекул. При высаливании белков, осаждении их спиртом и ацетоном на холоду получаются осадки, которые можно затем вновь растворить без потери биологических свойств белка. При осаждении кипячением, минеральными и органическими кислотами, солями некоторых тяжелых металлов белки теряют свои биологические свойства. [c.61]

В случае хранения в замороженном состоянии при —20 °С рекомендуется разделять антисыворотку на партии небольших объемов, чтобы не подвергать ее многократному замораживанию и размораживанию. При использовании некоторых методов необходимо, чтобы иммуноглобулины IgG были отделены от других сывороточных белков. Осаждение сульфатом аммония или комбинирование этой операции с ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [31, 36] или с аффинной хроматографией при использовании белка А, иммобилизованного на носителе [48], позволяет легко, но более или менее тщательно очистить эти иммуноглобулины. Иммуноаффинная хроматография, используя очищенный иммобилизованный антиген, дает возможность производить очистку специфических антител белка при разделении фракции IgG или даже антисыворотки. [c.97]

К 5 каплям 1% раствора белка прибавляют 1 каплю 5% раствора азотнокислого серебра. Выпадает осадок белка, который не растворяется в избытке реактива (отличие от других солей тяжелых металлов). При очень малых концентрациях белка осаждение солями тяжелых металлов может не произойти, так как ионы металла могут оказаться в избытке и произвести пептизацию. [c.44]

Примечание. Метод пригоден для анализа свежей сыворотки. Из образцов сыворотки, простоявшей более 24 час., следует удалить белки осаждением трихлоруксусной кислотой. [c.189]

Осаждение белков минеральными кислотами. Концентрированные минеральные кислоты, за исключением Н3РО4, осаждают белки. Осаждение белков в этом случае объясняется дегидратацией белковых молекул, образованием солей в белке и др. [c.39]

Реакция обусловлена обезвоживанием коллоидных частиц белка. Осаждение наступает только из нейтральных или слабокислых растворов и лучше в присутствии электролитов, например хлористого натрия. Кратковременное воздействие органических растворителей при низкой температуре — от [c.40]

Нагреть до кипения сначала сильно подкисленный, а затем сильно подщелоченный раствор белка. Осаждения не наблюдается, так как в этих условиях образуются продукты неглубокого гидролиза белка кислотный или щелочной альбуминаты. [c.150]

Соли щелочных металлов вызывают обратимую коагуляцию белка, называемую высаливанием. Например, если к белку, осажденному из раствора концентрированным раствором хлористого натрия или сернокислого аммония, прибавить воду, то его можно опять перевести в коллоидный раствор. [c.211]

Получение чистых нативных биологически активных белков— гораздо более трудная задача, чем их простое осаждение. Для этого обычно используют метод высаливания, которое основано на том, что многие растительные белки выпадают в осадок при насыщении их растворов различными минеральными солями (хлористым натрием, сернокислым натрием, сернокислым магнием и т. д.) и все белки осаждаются при насыщении их растворов сернокислым аммонием. Отдельные группы белков выпадают в осадок при определенной концентрации сернокислого аммония в растворе. Этот метод осаждения белков под действием сульфата аммония уже давно применяется при работе с белками. Осажденные при высаливании белки освобождаются от солей диализом и вновь переходят в раствор, но их свойства при этом не изменяются. [c.213]

Наиболее эффективны методы осаждения белков, основанные на разрушении водных оболочек, окружающих белковые молекулы. Это может быть достигнуто кипячением раствора белка или же добавлением избытка средних солей (высаливание белка). Осаждение белка кипячением часто сочетают со слабым подкислением и добавлением небольших количеств средней соли. [c.61]

Предварительные опыты по применению этого метода для определения цинка в инсулине показали, что, как и при определении цинка с дитизоном, присутствие белка мешает определению цинка с кристаллическим фиолетовым. Поэтому мы проводили, как и при определении с применением дитизона, предварительное отделение белка осаждением его трихлоруксусной кислотой. [c.227]

Хорошо известно, что растворимость белков находится в тесной зависимости от pH и от концентрации солей в растворе. Минимум растворимости наблюдается при изоэлектрической точке. Если же к белку в изоэлектрической точке добавить кислоту илн щелочь, то растворимость его увеличится. Плохая растворимость белков в изоэлектрической точке используется для выделения их из смеси с другими белками. Осаждение белков в изоэлектрической точке происходит, вероятно, за счет появления солеобразных связей между анионными и катионными группами соседних молекул белка (см. гл. VII). [c.112]

Белки, осаждение изоэлектрическое — методический прием дробного осаждения белков из растворов при достижении значения pH, соответствующего изоэлектрической точке одного из компонентов белковой смеси. Остальные белки остаются в растворе. [c.14]

Белки, осаждение нонами тяжелых металлов — осаждение, основанное на образовании нерастворимых в воде комплексов между белками и тяжелыми металлами. Этот тип осаждения является необратимым. [c.14]

Белки, осаждение органическими растворителями — осаждение, основанное на изменении диэлектрической постоянной раствора белка. Органические растворители (метанол, ацетон и другие) обладают диэлектрической постоянной в три-четыре раза меньшей по сравнению с таковой воды. Добавление к раствору белка органических растворителей приводит к снижению диэлектрической постоянной раствора, что увеличивает взаимное притяжение разноименных зарядов. [c.14]

Амфотерные свойства белков проявляются благодаря наличию свободных -МНз СООН групп. В кислой среде белки могут диссоциировать как основания, а в щелочной — как кислоты. При взаимодействии с кислотами и основаниями белки образуют солеподобные соединения, способные выпадать в осадок. На этом основан один из методов выделения белков — осаждение путем высаливания. Амфотерность белков используют при разделении их на отдельные фракции (метод электрофореза) с целью диагностики различных заболеваний и контроля за изменениями функциональных состояний. [c.239]

Белки, осаждение — потеря белком растюримости, происходящая в результате сближения отдельных могГекул, потери стабилизации, их взаимодействия в образованием надмолекулярных агрегатов, теряющих способность находиться в растворенном состоянии. Белок осаждается при повышении температуры до 45—50 С( при действии ионов тяжелых металлов, органических растворителей, кислот, солей. Дестабилизация белковых молекул является результатом влияний, меняющих варяженность поверхностных групп, разрушающих гидратную оболочку, что в целом и снижает гидро-фильность молекул. Осаждение белка может быть обратимым. [c.14]

На основании опыта работы лаборатории авторов было найдено, что выделение очищенного белка осаждением сульфатом аммония желательно проводить при 0° и затем хроматографировать на ДЭАЭ-целлюлозе этот метод дает хорошие результаты, если быстро обессоливать пробы. За качеством препаратов следили с помощью чувствительных методов анализа N-концевых аминокислот (см. раздел 3, б). [c.220]

ДСН переводит в растворимую форму большинство белков, которые нельзя солюбилизировать другими методами [896], а также белки, осажденные ТХУ с целью их концентрирования [801] (избыток ТХУ удаляют ацетоном). [c.225]

До сих пор речь шла о неспецифической окраске белков. Если в ходе электрофореза ферменты не утрачивают своей биологической активности, то их локализацию в геле можно осуществить с помощью специфической ферментативной реакции или цепи реакций, дающих окрашенные продукты. В этом случае гель вымачивают в растворе соответствующих субстратов. Разумеется, фиксировать белки осаждением в этом случае нельзя и приходится мириться с некоторым размыванием белковых полос. Впрочем, низкомолекулярные субстраты зачастую диффундируют в гель быстрее, чем довольно крупные молекулы красителей и продолжительность вымачивания бывает можно сократить. [c.90]

Основная причина агрегации белков заключается, вероятно, в электростатических и вандерваальсовых силах, сходных с силами, действующими при высаливании белков в отсутствие органического растворителя. Гидрофобные взаимодействия имеют здесь меньшее значение из-за солюбилизирующего влияния органических растворителей на неполярные участки белковой глобулы. Было установлено, что вблизи изоэлектрической точки белков осаждение происходит при более низкой концентрации органического растворителя. Это подтверждает предположение о том, что агрегация, происходящая в данном случае, сходна с агрегацией, наблюдающейся при изоэлектрическом осаждении белков. На рис. 3.9 схематически изображены молекулы белков в смеси воды с органическим растворителем агрегация здесь происходит за счет взаимодействий между противоположно заряженными участками на поверхности белков. [c.74]

Осаждение белков. Добавление к водному экстракту, содержащему белки, таких растворителей, как этанол, ацетон, метанол, н-пропанол, диоксан и др., вызьшает осаждение белка вследствие снижения активности воды. По мере возрастания концентрации органических растворителей снижается способность воды к сольватации заряженных гидрофильных молекул белка. Молекулы белка, расположенные вокруг гидрофильных участков на поверхности белка, могут быть замещены молекулами органического растворителя. Суммарное действие органического растворителя на белки состоит в снижении их растворимости до уровня, при котором начинается агрегация и осаждение. Установлено, что вблизи изоэлектрической точки белков осаждение происходит при более низкой концентрации растворителя. Па осаждение влияет размер молекулы крупные агрегируют быстрее, чем мелкие. Наиболее широко используются в качестве [c.51]

Многие реагенты способны вызывать осаждение или коагуляцию коллоидно-растворимых белков. Осаждение может быть обратимым и необратимым иными словами, выпавшее в осадок вещество может снова растворяться или же становится нерастворимым. Кипячение растворов белков, особенно при добавлении уксусной кислоты и хлористого натрия или других электролитов, приводит к необратимой коагуляции белка. Эта реакция является одной из наиболее часто применяемых для обнаружения растворенных белковых веществ (например, для открытия белка в моче). Необратимое осаждение вызывают также минеральные кислоты (азотная, платимохлористоводородная, фосфорновольфрамовая, фосфорномолибдеповая, метафосфорная, железосннеродистая), пикриновая кислота, таннин и соли тяжелых металлов. Белки сохраняют растворимость, если их осаждать из водных растворов спиртом и ацетоном кроме того, обратимое осаждение может быть вызвано различными нейтральными солями, например сульфатами аммония, натрия и магния. Для этого необходимы определенные концентрации солей, минимальная величина которых зависит от вида белка (ср. альбумины и глобулины). [c.397]

Белки, осажденные сульфатом аммония, почти не денатурируются после удаления соли из белкового осадка (диализом через целлофановую мембрану) его растворяют и используют для различных целей. На этом принципе основано приготовление некоторых видов концентрированных лечебных сывороток и нротивокоревого у-глобулина. [c.184]

Содержимое пробирок отфильтровывают через бумажные фильтры. В фильтратах—альбумины. Фильтраты подкисляют 17о-ным раствором уксусной кислоты — пояиляются осадки альбуминов. Их отфилмровыиают, а в фильтратах с помоп ыо биуретовой реакции доказывают отсутствие белка. Осаждение белков путем высаливания применяется в промышленности. [c.21]

Высаливание. Растворы нейтральных солей широко используются не только для повышения растворимости белка, но и для избирательного осаждения разных белков, т. е. их фракционирования. Процесс осаждения белков нейтральными солями называется высаливанием. Характерной особенностью белков, осажденных в процессе высаливания, является то, что после удаления соли они сохраняют свои нативные биологические свойства. Сушность процесса высаливания заключается в том, что ионы забирают на себя гидратную оболочку белка, одновременно нейтрализуя заряд белковой молекулы. Способность к высаливанию наиболее ярко выражена у многозарядных анионов, в частности у сульфатов. На практике для высаливания чаше всего применяют сульфаты натрия и аммония. Помимо солей для осаждения белков могут быть использованы органические водоотнимаюшие (гидрофильные) растворители — этанол, ацетон, метанол и др. Высаливание достаточно широко применяется для разделения и очистки белков. Для каждого белка существует своя зона высаливания, т. е. диапазон концентраций соли, позволяющий дегидратировать и осадить белок. После удаления высаливающего агента белок сохраняет все свои природные свойства и функции. [c.72]

Определение. Ткань стирают в ступке с 5%-ной трихлоруксусной кислотой до тонкой суспенсии. При работе с мышцами для этого необходимо добавлять кварцевый песок, очишенный кипячением с КгСггО и концентрированной Н2504. Осадок отфильтровывают или центрифугируют. После этого из раствора удаляют мешающие вещества (фосфорилированные производные и следы белка) осаждением Ва(0Н)2, прибавляя на каждые 0,1—0,5 мл 1%-ного гомогената 0,2 мл раствора Ва(0Н)2. Когда смесь побуреет, то избыток бария удаляют прибавлением 0,2 мл 5%-ного раствора цинка (на каждые 0,2 бария). Осадок центрифугируют или фильтруют. Для облегчения центрифугирования до прибавления Ва(ОН)г объем удобно довести до 5,6— [c.219]

Высапивание белков. Осажденные солями щелочноземельных металлов белки не подвергаются глубоким изменениям и могут быть вновь растворены, если соли удалить методом диализа. Такой способ разделения белков называют высаливанием. Чаще всего для высаливания используют сернокислый аммоний (NH4)2S04- При полуна-сыщении (N114)2804 выпадают в осадок глобулины сыворотки крови, 100% насыщение приводит к осаждению альбуминов. Определение глобулин-альбуминового коэффициента, имеющего значение для Диагностики воспалительных процессов и поражений печени (абсолютное или относительное увеличение глобулинов), используют в клинико-биохимических лабораториях. [c.23]

Методы биохимии растительных продуктов (1978) -- [ c.38 , c.41 ]

Биологическая химия Издание 3 (1960) -- [ c.14 ]

Биологическая химия Издание 4 (1965) -- [ c.14 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 1 (1961) -- [ c.70 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.14 ]

Катализ в химии и энзимологии (1972) -- [ c.278 , c.284 , c.293 , c.297 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 1 (1961) -- [ c.70 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология