Фосфориметрия

Диапазон линейности градуировочного графика в методе фосфориметрии значительно шире, чем в методе флуориметрии. Это обусловлено тремя основными причинами. [c.516]

Люминесцентные методы включают в себя исследования с использованием флуоресценции (флуориметрия) и фосфоресценции (фосфориметрия). Наиболее широко люминесцентные измерения используются как методы анализа и контроля за протеканием химических и биохимических реакций, а также для кинетических исследований быстрых реакций электронно-возбужденных молекул. [c.49]

Измерение фосфоресценции обычно проводят в твердой фазе при температуре жидкого азота, поскольку в жидких растворах фосфоресценция интенсивно тущится ничтожными количествами примесей. Для разделения обычной флуоресценции и фосфоресценции или замедленной флуоресценции необходимо периодически прерывать пучок возбуждающего света и регистрировать испускание только в течение темпового периода, т. е. когда короткоживу-щая флуоресценция оказывается полностью затухшей. В большинстве современных спектрофлуориметров это достигается тем, что при измерении спектров фосфоресценции вокруг образца вращается полый цилиндрический стакан, имеющий вырезы в боковой стенке. При вращении стакана вокруг его оси образец освещается возбуждающим светом, проходящим через вырезы, и долгоживущая люминесценция регистрируется через те же самые вырезы. Для измерения общей люминесценции вращающийся стакан надо удалить. Поскольку при использовании стакана с вырезами поглощается только некоторая доля возбуждающего света, то для определения полной скорости испускания долгоживущей люминесценции наблюдаемую интенсивность надо разделить на коэффициент фосфориметра, равный отношению светового периода к сумме времени светового и темпового периодов. Это справедливо, если время затухания долгоживущей люминесценции достаточно велико по сравнению со временем светового и темпового периодов, поскольку уменьшение интенсивности за воемя темпового периода будет [c.67]

Выходы долгоживущей флуоресценции и фосфоресценции определяются тем же методом, что и выходы быстрой флуоресценции, т. е. сравнением площади под исправленным спектром испускания с площадью под спектром быстрой флуоресценции стандартного соединения. Для получения соответствующей величины площади интенсивность долгоживущей люминесценции нужно разделить на коэффициент фосфориметра. [c.70]

Рис. 14.4.86. Схема фосфориметрии с временным разрещением для образцов, адсорбированных на фильтровальной бумаге а) возбуждение фосфоресценции б) измерение фосфоресценции

Часто соединение, имеющее долгоживущую люминесценцию, также имеет и быструю флуоресценцию. Если выход последней уже определен обычным способом, то выходы фосфоресценции и замедленной флуоресценции при тех же условиях можно определить, не сравнивая с другим раствором. Отношение выхода замедленной флуоресценции к выходу быстрой флуоресценции вычисляется сравнением интенсивностей одного из главных максимумов в спектрах, которые идентичны по форме. Регистрируемый спектр испускания не надо исправлять, но следует сделать поправки на коэффициент фосфориметра и чувствительность прибора, при которой измеряются два спектра. [c.70]

Для измерения в миллисекундном диапазоне (фосфоресценция) используют механические стробирующие устройства, например систему из двух дисков с прорезями, вращающихся с немного различающимися скоростями. Вариантом стробирующего устройства с визуальной или фотографической регистрацией служит первый фосфороскоп Вуда. Разновидностью метода стробирования является и используемый иногда метод определения времени затухания фосфоресценции по зависимости регистрируемой интенсивности фосфоресценции от скорости вращения цилиндра с прорезями в стандартном фосфориметре. [c.104]

Выходы долгоживущей флуоресценции и фосфоресценции определяются тем же методом, что и выходы быстрой флуоресценции, т. е. сравнением площади под исправленным спектром испускания с площадью под спектром быстрой флуоресценции стандартного соединения. Для получения соответствующей величины площади интенсивность долгоживущей люминесценции нужно разделить на коэффициент фосфориметра. Иногда соединение имеет и долгоживущую люминесценцию, и быструю флуоресценцию. Если квантовый выход последней уже определен обычным способом, отношение выхода замедленной флуоресценции к выходу быстрой флуоресценции можно вычислить по сравнению интенсивности одного из максимумов в спектрах, которые идентичны по форме. Измеряемый спектр испускания не надо исправлять по чувствительности фотоумножителя, но необходимо сделать поправки на коэффициент фосфориметра и чувствительности прибора, при которых измеряются оба спектра. [c.160]

Для выполнения первых трех задач необходима установка счета фотонов для диапазона 10 —10 с (рис. 4.17) или импульсный фосфориметр с осциллографом с памятью, для других задач — наносекундный [c.220]

Люминесцентный анализ обладает высокой чувствительностью, низкими пределами обнаружения и используется преимущественно для обнаружения и количественного определения следовых количеств веществ в природных, промышленных и биологических объектах. Он включает в себя атомно-флуоресцентный анализ, флуориметрию, фосфориметрию, анализ по спектрам люминесценции кристаллофосфоров, хемилюми-несцентный анализ. [c.513]

Флуориметрией и фосфориметрией называют люминесцентную спектрометрию, основанную на флуоресценции и фосфоресценции соответственно. Оба метода имеют ряд преимуществ над абсорбционными [c.658]

В некоторых случаях метод фосфориметрии оказывается более чувствительным, чем метод флуориметрии. Применяя более мощные световые потоки возбуждения и специальные приборы, позволяющие регистри- [c.516]

Метод фосфориметрии используется для определения полиароматических углеводородов, витаминов, антибиотиков и других органических веществ. [c.516]

При анализе смесей люминофоров используют метод фосфориметрии с временным разрешением. Этот метод [c.516]

По сравнению со спектрофлуориметрами и спектрофосфориметрами установки со светофильтрами являются более простыми в работе и более дешевыми. К тому же, поскольку абсорбционные или интерференционные светофильтры обладают большей светосилой, чем монохроматор, флуориметр или фосфориметр со светофильтрами обеспечивают большую чувствительность количественных определений. Широко используются оба типа люминесцентных спектрометров. Конечно, приборы со светофильтрами не применяются для получения информации [c.658]

Во-первых, флуориметрия и фосфориметрия являются в общем более чувствительными, чем абсорбционные методы. Это объясняется тем, что в люминесцентном методе можно непосредственно измерять мощность испускаемого излучения. В отличие от этого в абсорбционных методах необходимо определять разность между двумя большими уровнями излучения, мощности падающего Ро и пропущенного Р излучения. Поскольку всегда легче измерять малый сигнал без всякого фонового сигнала, чем измерять разность двух больших сигналов, флуориметрия и фосфориметрия обеспечивают большую чувствительность,, чем абсорбционная спектрофотометрия. В то время как для абсорбционной спектрофотометрии зависимость между поглощением и концентрацией линейна согласно закону Бера часто в 10—100-кратном интервале концентраций, в то же время для флуориметрии и фосфориметрии обычно зависимость между мощностью люминесценции и концентрацией линейна в интервале трех или четырех порядков значений концентрации. Хотя этот более широкий линейный диапазон не обязательно нужен для количественного анализа, он часто имеет большое практическое значение и требует меньше точек на калибровочном графике. [c.659]

Дополнительным преимуществом, часто используемым в фосфориметрии, является временная разрешающая способность. Поскольку фосфоресценция имеет относительно долгое время жизни, можно различать частицы, используя зависимость люминесценция — время. Это дает дополнительную информацию для качественной идентификации и количественного определения данных частиц, уменьшая мешающие влияния флуоресценции и фосфоресценции других компонентов пробы, а также флуоресценции самого определяемого вещества. К тому же благодаря использованию временной разрешающей способности устраняют рассеяние от пробы. Для получения разрешения по времени в фосфориметрии применяют два обычных механических приспособления. В первом вокруг кюветы с пробой можно вращать с различной скоростью сплошной цилиндрический стакан с вырезами в боковой стенке. Таким образом пробу облучают возбуждающим светом через вырез фосфоресцирующее излучение может достигать детектора только после того, как стакан поворачивается на угол 90°. Изменяя скорость вращения стакана, можно менять время запаздывания между поглощением пробой и измерением ее фосфоресценции. Второе обычное приспособление состоит из двух вращающихся дисков с тонкими вырезами (щелями), расположенных на противоположных сторонах кюветы с пробой. Так как щели не совпадают друг с другом, то, подбирая соответствующую скорость вращения дисков, можно изменять время запаздывания между возбуждением пробы и измерением ее люминесценции. [c.659]

Несмотря на явные преимущества разрешения по времени, фосфориметрия не столь широко применяется, как флуориметрия. Это связано с дополнительной сложностью оборудования для фосфориметрии, меньшим числом фосфоресцирующих частиц и неудобствами охлаждения проб для получения адекватной фосфоресцентной квантовой эффективности. До сих пор в фосфориметрии необходимо было использовать специальные смешанные растворители, которые образовывали бы прозрачные твердые стекла при охлаждении. Один такой растворитель, часто называемый ЕРА, представляет собой смесь в соотношении 5 5 2 диэтилового эфира, изопентана и этилового спирта. Недавно успешно были использованы для фосфориметрии замерзшие водные растворы в виде снега , [c.660]

Мощность флуоресцентного и фосфоресцентного излучения, испускаемая пробой, является прямой функцией квантового выхода. Поэтому квантовый выход интересующего процесса люминесценции должен быть постоянным и воспроизводимым, если необходимо разработать успешный флуориметрический или фосфориметрический метод анализа. Когда квантовый выход значительно уменьшается, то говорят, что люминесценция затухает. К сожалению, многие посторонние вещества могут оказывать влияние на квантовый выход и тушить люминесценцию. В частности, тяжелые атомы или парамагнитные частицы сильно влияют на скорость интеркомбинационной конверсии, которая, в свою очередь, изменяет квантовый выход флуоресценции или фосфоресценции, тем самым приводя к погрешности в анализе. В фосфориметрии, конечно, желательно увеличить скорость интеркомбинационной конверсии, в то время как в флуориметрии — уменьшить. Поэтому, для того чтобы предотвратить тушение в большинстве флуориметрических методик, тяжелые атомы и парамагнитные частицы должны быть удалены из раствора пробы. Кислород, будучи парамагнитным, является особенно серьезной помехой, и его также удаляют, пропуская азот через анализируемые растворы. [c.660]

В отличие от абсорбционных методов в флуориметрии и фосфориметрии непосредственно измеряют сигнал излучения. Хотя и возможно компенсировать дрейфы таких параметров, как мощность источника и положение кюветы в абсорбционной спектрофотометрии, такая компенсация не всегда удобна для люминесцентного метода. Например, любой дрейф или изменение мощности первичного источника излучения при разных длинах волн отражается соответствующим дрейфом в мощности люминесценции. В большинстве высококачественных люминесцентных спектрометров эти трудности преодолеваются либо путем соответствующей стабилизации мощности источника излучения, либо контролированием мощности источника и применения соответствующих поправок. [c.660]

Дайте определение следующих терминов разрешающая способность, светосила, коэффициент пропускания светофильтра, микрофотометр, фотографическая эмульсия, фотолиз, колориметр, определяемое вещество, спектрофотометр, флуориметр, фосфориметр, спектрофлуориметр, раствор сравнения, коллимирование, люминесценция, резонансная флуоресценция, внутренняя конверсия, интеркомбинационная конверсия, колебательная релаксация, триплетное состояние и эффект внутреннего фильтра. [c.670]

Объясните, как временная разрешающая способность фосфориметра с вращающимся стаканом вокруг кюветы может устранить помехи от рассеяния и флуоресценции пробы. [c.671]

Если время жизни долгоживущей люминесценции имеет тот же порядок, что и время темнового и светового периодов, долгоживущая люминесценция будет затухать в течение темнового периода до того, как будет зарегистрирована фотоумножителем, и для получения полной скорости испускания долгоживущей люминесценции в цикле наблюдаемую интенсивность надо разделить на коэффициент фосфориметра, меньший /3/4. Коэффициент фосфориметра, или отношение наблюдаемой интенсивности долгоживущей люминесценции в противофазе (Ро) к полной скорости испускания долгоживущей люминесценции (Р), можно вычислить, сделав два допущения. Первое допущение состоит в том, что долгоживущая люминесценция затухает экспоненциально, а второе — что время прерывания возбуждающего света первым прерывателем мало по сравнению с полным временем цикла (т. е. фронт нарастания интенсивности возбуждающего света крутой). При не очень узкой входной щели монохроматора возбуждения второе допущение выполняется лишь приближенно. При этих двух допущениях коэффициент фосфориметра выра- [c.261]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология