Флуоресценция стандартных веществ

Для получения истинных спектров флуоресценции необходима дополнительная обработка спектров, получаемых на приборе,— калибровка с учетом спектральной чувствительности прибора, поскольку чувствительность применяемых фотоумножителей неодинакова для разных длин волн. Для калибровки прибора используются истинные спектры флуоресценции ряда веществ. Полученный на приборе спектр флуоресценции стандартного вещества сравнивается с истинным спектром и определяется пересчетный коэффици- [c.66]

Определяют квантовый выход флуоресценции исследуемого вещества по квантовому выходу флуоресценции стандартного вещества. [c.69]

Относительные значения ординат истинных спектро флуоресценции стандартных веществ для разных частот при 20 С [c.156]

Зная абсолютный квантовый выход флуоресценции стандартного вещества <р1, можно вычислить квантовый выход флуоресценции другого вещества. Квантовый выход флуоресценции вещества определяют следующим образом. [c.159]

Приготовляют разбавленный раствор ( ) <0,1) стандартного вещества в том же самом растворителе, определяют оптическую плотность его на длине волны возбуждения флуоресценции исследуемого вещества. [c.69]

Измеряют спектр флуоресценции раствора стандартного вещества при таком же геометрическом расположении (как и для исследуемого вещества) и одинаковых интенсивности и длине волны возбуждающего света. Исправляют полученный спектр на чувствительность фотоумножителя по частотам или волновым числам. [c.69]

Измеряют площади под исправленными спектрами флуоресценции исследуемого и стандартного вещества. [c.69]

Более просто определяется относительный выход флуоресценции, особенно если есть возможность сравнить флуоресценцию исследуемого вещества с флуоресценцией стандартного соединения, выход флуоресценции (Ф/ ) которого известен (табл. 16.1). [c.268]

Область, в которой флуоресценция пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, обычно очень узка поэтому соотношение (с—с )/(а—Ь), где а — интенсивность флуоресценции для стандартного вещества, Ь — то же для соответствующего контрольного вещества, с — интенсивность флуоресценции для испытуемого вещества и ё — то же для соответствующего контрольного раствора, должно быть не менее 0,40 и не более 2,50. Поэтому необходимо построить рабочую кривую зависимости интенсивности флуоресценции с поправкой на контрольный раствор от концентрации. [c.55]

Для определения концентрации веществ, обладающих флуоресценцией, используют количественное флуориметрическое определение. Оно включает такие операции, как подготовка анализируемой пробы и стандартного раствора измерение интенсивности флуоресценции стандартного раствора, анализируемого раствора и контрольной пробы (если она имеет флуоресценцию). [c.253]

В табл. 25 приведены квантовые выходы флуоресценции ряда веществ в разных растворителях. Некоторые из этих веществ можно использовать вместо бисульфата хинина в качестве стандартного вещества. Довольно доступным является антрацен, который можно легко очистить зонной плавкой. Паркер и Рис [158] исследовали некоторые другие вещества в качестве стандартов для флуоресцентных измерений. Щелочные растворы эозина непригодны из-за их быстрого разложения. Сильнощелочные растворы флуоресцеина разлагаются медленно, а слабощелочные растворы (pH 9,6 в карбонат-бикарбонатном [c.250]

Для определения квантового выхода фф , сравнивают интенсивности флуоресценции исследуемого /ф и стандартного веществ /фл. Концентрации обоих веществ выбирают так, чтобы поглощение их растворов при длине волны возбуждения и и было одинаковым и не превышало 0,02 Есй = ъ с д. 0,02. При этих условиях интенсивность поглощенного света составляет [c.159]

Стандартные веществ для определения квантовых выходов флуоресценции [c.159]

ПРИЛОЖЕНИЕ 3 Характеристики стандартных веществ для флуоресценции [c.371]

Пользуясь кривой почернения, находят логарифмы интенсивности линии комбинационного рассеяния (лежащей на фоне) и интенсивности фона в окрестности линии, а затем и самые интенсивности. Разность этих последних величин дает число к, характеризующее интенсивность измеряемой линии комбинационного рассеяния /к по отношению к интенсивности соответствующего места спектра флуоресценции. Проделав ту же операцию для линии стандартного вещества, находят аналогичное число а, характеризующее интенсивность линии стандартного вещества / (см. табл. 28) также по отношению к интенсивности соответствующего места спектра флуоресценции. [c.338]

На рис. 4-6 спектр поглощения антрацена в этаноле сравнивается с его спектром флуоресценции. Этот рисунок является хорошим примером зеркальной симметрии и служит иллюстрацией стандартной формы представления спектров флуоресценции и возбуждения, предложенной Паркером и Рисом 1109]. Они приводят доводы в пользу того, чтобы по оси ординат откладывать число излученных квантов на единицу интервала частот, а по оси абсцисс — частоту. Если изображать флуоресцентные данные таким способом, то получается, что интегральная площадь под кривой испускания прямо пропорциона льна истинной эффективности флуоресценции данного вещества. Сравнивая эту величину с соответствующей площадью, полученной в тех же условиях для стандартного вещества ( флуоресцентного актинометра ), с известным абсолютным квантовым выходом флуоресценции (например, сульфата хинина, для которого ф/ 0,55 [110]), можно легко найти неизвестный абсолютный квантовый выход (разд. 7-5В-1). Недавно это предложение было обстоятельно изучено группой известных экспертов [111]. [c.221]

Проделав ту же операцию для линий стандартного углеводорода, находим числа ai.og,..., характеризующие интенсивности линий стандартного вещества /ар /о,-- - также по отношению к интенсивности соответствующих мест того же спектра флуоресценции. [c.40]

Умножив интенсивность люминесценции А в стандартном растворе на коэффициент Ка, получают интенсивность люминесценции А в смеси. Аналогичным образом получают интенсивность люминесценции В в смеси. Иногда вместо разложения спектра флуоресценции смеси на составляющие целесообразно измерять флуо ресценцию смеси двух веществ в таких условиях, когда спектры флуоресценции компонентов хорошо разделяются. [c.83]

Вынимают пробирку с раствором, промывают и заполняют стандартным раствором с наименьшей концентрацией определяемого вещества. Открывая заслонку 11, измеряют интенсивность флуоресценции этого раствора. [c.216]

Заполняют пробирку растворителем и измеряют интенсивность флуоресценции фона (Лол). Это показание вычитают из показаний, измеренных для стандартных растворов, и строят градуировочный график в координатах Д/ - с , где д/=/ -/хол Сет - концентрация определяемого вещества в стандартных растворах. [c.216]

Интенсивность света, испускаемого флуоресцирующим раствором, при определенных условиях находится в простой зависимости от концентрации растворенного вещества и, следовательно, может быть использована для анализа. Трудно, однако, измерить абсолютную интенсивность флуоресценции, и обычно измерения проводят по отношению к разведениям правильно выбранного стандартного образца. Общая схема флуоресцентной спектроскопии состоит в возбуждении флуоресценции излучением при длине волны максимума поглощения и в измерении или сравнении интенсивности флуоресцирующего света с флуоресценцией определенного стандартного раствора. Флуоресцирующий свет должен быть тщательно отделен от рассеянного света, падающего на вещество. [c.52]

Подавая сигнал с собирающего электрода 11- или 13-каскад-ного фотоумножителя на чувствительный гальванометр (2000 мм/мкА), как показано на рис. 71,5, можно довольно просто регистрировать флуоресценцию. Темновой ток фотоумножителя Е.М.1. 9558(3, работающего при наиряжении 1800 В, вызывает отклонение на гальванометре около 10 мм (эта величина варьирует для разных фотоумножителей). Если гальванометр правильно зашунтирован и благодаря достаточно большой постоянной времени заметно снижаются флуктуации темнового тока, то можно уверенно регистрировать итенсиврюсти света, соответствующие приблизительно 75 темнового тока. Такая схема проста, надежна и довольно чувствительна. При условии, что используемый для возбуждения источник имеет постоянную интенсивность, эта схема вполне пригодна для ряда измерений, включающих измерение интенсивности при нескольких длинах волн (например, определение неорганических компонентов после химического разделения, см. гл. V). Как и во всех флуоресцентных измерениях, желательно сравнивать интенсивность флуоресценции неизвестного образца с интенсивностью флуоресценции стандартного вещества, например бисульфата хинина (см. раздел П1,Л, 4). В этом случае автоматически компенсируются медленные флуктуации интенсивности возбуждающего света или напряжения питания фотоумножителя. Рекомендуется использовать шунт гальванометра с точными положениями переключателя, соответствующими чувствительностям, папример, 1,0 0,3 0,1 0,03 0,01. Максимальное отклонение шкалы 500 мм при наименьшей чувствительности будет соответствовать сигналу фотоумножителя в 25 мкА. Для измерения больших интенсивностей света напряжение на фотоумножителе должно быть [c.205]

При измерении квантовых выходов флуоресценции относительно стандартного вещества необходимо избегать ошибок за счет эффектов внутреннего фильтра, немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тушения кислородом и фоторазложения. Ошибку, обусловленную первым фактором, легко устранить, используя достаточно разбавленные растворы. Если возбуждающий свет не монохроматичен, то, поскольку сравниваемые вещества не всегда имеют одинаковую разницу в поглощении двух [c.69]

При измерении квантовых выходов флуоресценции относительно стандартного вещества возможны ошибки за счет эффектов внутреннего фильтра (реабсорбция), немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тушения кислородом и фоторазложения. Ошибку, обусловленную первым фактором, легко устранить, используя достаточно разбавленные растворы. Для предотвращения немонохроматичности следует проверять чистоту возбуждающего света. Во избежание ошибки при измерении оптической плотности следует по возможности измерять оптическую плотность раствора пучком света того же спектрального состава, что и при возбуждении флуоресценции. Необходимо проводить дополнительные измерения для учета флуоресценции растворителя, стенок кюветы. Для этого при исследовании растворов необходимо измерить в тех же условиях спектр флуоресценции растворителя. Спектр, полученный при измерении флуоресценции растворителя, вычитается из спектра, полученного при измерении раствора, до его исправления. [c.160]

В большинстве случаев пробы афлатоксипов определяли на одной пластинке со стандартами, разделенными в одном направлении (рис. 8.24). Однако в этом случае разность наклонов калибровочных графиков, соответствующих двумерному и одномерному разделению, достигала 15%, что обусловлено воздействием второго элюента при двумерном разделении на квантовый выход флуоресценции определяемого вещества. Чтобы предотвратить воздействие второго элюента, Белжаарс [15 предложил так называемый антидиагональный метод, основанный на элюировании определяемых и стандартных растворов идентичными растворителями на одних и тех же пластинках. Как показано на рис. 8.24, одну пробу и два стандарта наносят в левом углу пластинки не по диагонали. Для идентификации на участки сорбента, где проводят одномерное разделение, дополнительно наносят два стандарта. С помощью подобранного элюента примеси перемещают в верхнюю часть пластинки (рис. 8.24). Для количественной оценки участки позади и впереди фронта афлатоксипов при облучении УФ-светом следует отметить точками, которые помогают определить соответствующие участки сорбента на стадии сканирования фотометром. Количественные результаты представлены па рис. 8.25. [c.208]

Спектрофотометр для хроматограмм в тонком слое сконструировал Цейс совместно с Шталем и Джорком. Детальное описание прибора читатель сможет найти в работах [60, 61 ]. Конструкцией прибора предусмотрено поглощение постоянно излучаелюй энергии либо фактического излучения от вещества. Так, оценка разделенных пятен или зон на тонкослойных пластинках южeт быть сделана измерением проходящего нли отраженного света, а в случае флуоресцирующих веществ— измерением флуоресценции, причем чем больше количество вещества в пятне, тем меньше степень отражения. С целью уменьшения помех со стороны внешних факторов на той же самой пластинке во время хроматографического опыта наряду с образцом испытывается стандартное вещество. По показаниям степени отражения строят соответствующие калибровочные кривые. [c.275]

Отношение интенсивностей флуоресценции, измеренных прибором F2IF1), равно отношению абсолютных скоростей испускания флуоресценции двух растворов (Q2/Q1) только в том случае, если геометрическое расположение образца и оптических деталей одинаково для обоих измерений. Изменение показателя преломления (а) раствора приводит к изменению углов, под которыми лучи покидают границу плоскость кюветы — воздух [184]. Так, если два сравниваемых, вещества растворены в разных растворителях, то наблюдаемые интенсивности флуоресценции нужно умножить на п . При использовании бисульфата хинина в водной 0,1 н. серной кислоте в качестве стандартного вещества отношение п2(растворнтель)/п (вода) соответствует поправке 27% для бензола и 5,5% для этанола, [c.247]

Б. Проводят испытание, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя кизельгур Р1 в качестве адсорбента, а для импрегнирования пластинки смесь 10 объемов 2-феноксиэтанола, 5 объемов макрогола 400 Р и 85 объемов ацетона Р. После того как растворитель достигнет вершины пластинки, вынимают пластинку из хроматографической камеры и тотчас используют. В качестве подвижной фазы используют смесь 2 объемов диэтиламина Р и 100 объемов петролейного эфира Р1, насыщенного 2-феноксиэтанолом Р. Наносят отдельно на пластинку по 2 мкл каждого из двух растворов в хлороформе Р, содержащих (А) 2,0 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 2,0 мг стандартного образца хлорпромазина гидрохлорида СО в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (365 нм), наблюдая флуоресценцию, появляющуюся через 2 мин. Опрыскивают пластинку раствором серной кислоты в этаноле ИР и оценивают хромато грамму в дневном свете. Основное пятно, полученное с раствором А, соответствует по положению, внешнему виду и интенсивности пятну, полученному с раствором Б. [c.78]

Б. Проводят испытания в защищенном от света месте, как описано в разделе Тонкослойная хроматография (т. 1, с. 92), используя в качестве адсорбента кизельгур Р1 и импрегнируя пластинку в смеси 15 объемов формамида Р, 5 объемов 2-феноксиэтанола Р и 180 объемов ацетона Р путем погружения ее на 5 мм ниже поверхности жидкости. Когда фронт растворителя достигнет вершины пластинки, вынимают пластинку из хроматографической камеры и выдерживают ее при комнатной температуре до полного удаления растворителей. Тотчас используют импрегнированную пластинку, проводя хроматографирование в том же направлении, что и импрегнирование. В качестве подвижной фазы используют смесь 2 объемов диэтиламина Р и 100 объемов петролейного эфира Р1, насыщенного 2-феноксиэтанолом Р. Наносят отдельно на пластинку по 2 мкл каждого из двух растворов в хлороформе Р, содержащих (А) 2,0 мг испытуемого вещества в 1 мл и (Б) 2,0 мг стандартного образца гидрохлорида флуфеназина СО в 1 мл. Вынимают пластинку из хроматографической камеры, дают ей высохнуть на воздухе и оценивают хроматограмму в ультрафиолетовом свете (365 нм), наблюдая флуоресценцию, появляющуюся через 2 мин. Опрыскивают пластинку раствором серной кислоты в этаноле ИР и оценивают хроматограмму в дневном свете. Основное пятно, полученное с раствором А, соответствует по положению, внешнему виду и интенсивности пятну, полученному с раствором Б. [c.142]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология