Трипсин, определение воды

Каковы данные по состоянию воды в гидратной оболочке белка Основной вклад в энергию гидратации дают водородные связи между водой и полярными группами молекулы белка. Для образования гидратной оболочки глобулярных белков имеет значение пространственная доступность протон-донорных и протон-акцепторных центров для взаимодействия с молекулами воды. Оказалось, что гетероатомы нерегулярно расположены на поверхности глобулы, которая не может служить матрицей для кристаллизации воды. Так как число и размеры гидрофобных участков на поверхности также невелики, то шуба из уплотненных молекул воды вокруг глобулы не образуется, количество гидратационной воды, определенное различными методами, составляет 0,3-0,4 г НгО/г сухого белка, а обш ее содержание воды в кристаллах глобулярных белков не превышает, как правило, 0,45-0,60 г НгО/г сухого белка. Следовательно, количество свободной воды в белке невелико. Она, в частности, может заполнять внутренние полости , свободные от белкового веш ества, содержание воды в этих полостях также невелико (в лизоциме — 2, трипсине —12 молекул). Она может обмениваться с поверхностными водными слоями вследствие флуктуационных открытий внутренних полостей. [c.235]

Преждевременное превращение таких проферментов, как трипсиноген, в активные протеиназы в поджелудочной железе может иметь губительные последствия. Чтобы предотвратить такую преждевременную активацию, поджелудочная железа должна вырабатывать также специфические ингибиторы. Панкреатический ингибитор трипсина представляет собой небольшой белок с мол. весом 6500, специфически связывающийся в активном центре трипсина (Л[г=10 М в щелочной среде) . Определение кристаллической структуры самого трипсина и его ингибитора показало, что эти две молекулы плотно прилегают друг к другуб. Ингибитор связывается таким образом, как будто он является пептидным субстратом один край молекулы ингибитора образует антипараллельную р-структуру с пептидной цепью фермента. Лизин-15, образующий часть этой р-структуры, входит в специфический связывающий центр для основной аминокислоты субстрата. Таким образом, ингибитор протеиназы представляет собой модифицированный субстрат, который фактически может подвергаться атаке в активном центре. Однако подгонка двух молекул является настолько тесной, что молекула воды не может участвовать в завершающей стадии каталитического акта, и комплекс остается нереакционноспособным. (В тонкой кишке количество ингиби- [c.113]

Первым ферментом, выделенным в чистом кристаллическом виде, была уреаза (Ж. Б. Сумнер, 1926 г.). Она была получена из одной разновидности фасоли экстрагированием водой и осаждением экстракта ацетоном. Затем были выделены в кристаллическом виде высаливанием из водных растворов сернокислым аммонием или сернокислым магнием при определенном pH пепсин и трипсин (И. X. Норсроп и М. Куниц, 1929 г.), а также и другие ферменты, в том числе желтый окислительный фермент, папаин, карбоксипептидаза, тирозиназа, каталаза и несколько дегидраз. [c.793]

Для определения триптического действия панкреатина можно, конечно, вместо молока пользоваться каким-нибудь другим белковым препаратом, в особенности если нужно получить более точные результаты. В таком случае можно применять методы, описанные при трипсине (см. ниже), или итти следующим испытанным путем. Приготовляют раствор казеина, содержание казеина в котором точно определяют весовым путем. Для этого растворяют 100 г казеина (по Н а m m а г s t е п у) в 80 мл 1 н. раствора едкого натра, доведенных водой до 2 литров, если нужно при нагревании, или 100 г казеината натрия (нутрозы) и 0 мл 1 н. раствора едкого натра разбавляют водой т 2 л при нагревании. Для исключения возможного влияния протеолитических ферментов, содержащихся в казеине, раствор его быстро нагревают до 85—90° и дают ему остыть. Для каждого определения употребляют 100 мл этого раствора. Если содержание в нем белка и было установлено заранее при предварительных опытах, то все же лучше каждый раз наряду с определением панкреатина проводить слепой опыт. Для определения в два стакана вносят по 100 мл раствора казеина, нагревают до 38— 40° и прибавляют в один из них 0,1 г мелко растертого и замешанного с 5—10 мл воды панкреатина. В обоих стаканах объем доводят водой до 250 мл, после чего оставляют стоять полчаса при 40° при частом помешивании. Затем содержимое обоих стаканов выливают в два заранее приготовленных стакана, содержащих по 150 мл Ю / -го раствора сульфата натрия, после чего в каждый стакан при непрерывном помешивании приливают тонкой струей 3—4 мл разбавленной серной кислоты (1 4). [c.525]

Получают 3. обработкой дрожжей протеолитич. ферментом трипсином (по Пиллемеру) с последующей очисткой нерастворимого остатка 3. извлечением его водой и спиртом или фенол-водной экстракцией дрожжей. 3. используют для выделения пропердина из сыворотки или плазмы по методу Пиллемера и его модификациям, в основе к-рых лежит реакция образования пропердин-зимозанового комплекса и для определения титра пропердина в крови. [c.55]

Кристаллизацию можно также вызвать увеличением концентрации белка в растворе. Растворы многих стабильных веществ можно, как известно, концентрировать выпариванием на водяной бане или под уменьшенным давлением однако ни тот, ни другой метод нельзя применить к белкам. Совершенно очевидно, что нагревание на водяной бане вызовет денатурацию белка. Впрочем, некоторые белки, например трипсин [1] или рибону-клеаза [11], устойчивы при определенном pH и определенной ионной силе к кратковременному нагреванию. Для концентрирования белковых растворов нельзя также использовать перегонку под пониженным давлением, так как в этих условиях происходит вспенивание. Небольшие объемы белковых растворов можно легко сконцентрировать в эксикаторе под слегка пониженным давлением над большими количествами связывающих воду веществ. Если нужно уменьшить большой объем белкового раствора, концентрирование проводят в целлофановом мешке, обдуваемом электрическим вентилятором (испарение через проницаемую мембрану). Раствор концентрируется по мере испарения воды с поверхности мешка [12]. Увеличения концентрации белка в растворе можно также достичь при помощи положительного или отрицательного давления во время диализа [13]. [c.12]

В результате 10 определений было найдено 8,09 + 0,04% воды в протеине — трипсине [6]. Содержание воды в неидентифициро-ванном протеине по данным Мак-Кинни и Холла [32] составляло 11,1+0,00% значение, найденное методом перегонки с хлороформом, было равно 10,95 + 0,15%, а методом высушиванЖ в сушильном шкафу — 10,9 + 0,00%. Было установлено, что образец цианамида содержал 0,02 + 0,00% воды, а меламин — 0,05 + + 0,00% [8]. В нафтилизоцианате и дифенилнитрозамине было обнаружено при первоначальном анализе 0,007 + 0,001% и соответственно 0,086 + 0,003 % воды, а после добавления 0,82 и 1,51% воды [8] — 0,83 + 0,01% и соответственно 1,62 + 0,02%. При анализе нитрометана были получены следующие значения 0,94 + 0,02% воды при прямом титровании и 2,05 + 0,03% после добавления воды общая концентрация воды во втором случае, согласно вычислению, была равна 2,03% [8]. [c.131]

В многочисленных работах описываются методы открытия загрязнений фекалиями. Присутствие мочевой кислоты в яйцах указывает на их загрязнение куриным пометом. Определение основано на экстрагировании мочевой кислоты хинолином [83] Для открытия загрязнения мочой грызунов товаров, упакованных в мешки, можно использовать простую капельную пробу, заменяющую флуорометрическое определение [41]. Эта проба состоит в нанесении капли спиртового раствора п-диметиламиво-бензальдегида и ща)велевой кислоты на загрязненный материал. Для открытия загрязнений фекалиями в пище предложено использовать присутствие фекальных энзимов— трипсина и щелочной фосфатазы [71]. В качестве доказательства загрязнений пищевых продуктов и воды фекалиями можно также применить определение сероводорода сероводород отгоняют в атмосфере инертного газа и. [c.178]

Высокомолекулярные соединения в поверхностных слоях ведут себя по-разному в зависимости от ряда факторов и, в частности, от числа полярных групп в молекуле. Молекулы белка, содержащие большое число полярных групп могут развертываться на поверхности воды, образуя слой в одну пептидную цепочку если слой белка сжат, то обнаруживаются признаки ориентации — боковые цепи белка направлены при этом почти вертикально (Е. Мишук и Ф. Эйрих). Ферментный белок—трипсин, растекаясь по поверхности раствора сульфата аммония, образует димерные молекулы. Изучение поведения монослоев позволило вычислить площади, занимаемые в слое молекулами белков и молекулярные веса белков. Значительное влияние поверхностный слой оказывает и на -кинетику реакций. Если реакция катализируется ионами водорода или гидроксила и активный комплекс содержи г ионы Н+ или ОН-, то изменение pH отражается на скорости. Было показано, что pH поверхностного слоя может заметно отличаться от pH внутри раствора и поэтому вещества в поверхностном слое вступают в каталитический процесс быстрее. Другим важным фактором, изменяющим скорость реакции в поверхностных слоях, является определенная геометрическая [c.209]

Исследование влияния полярности растворителя на р/Са группы, связанной с ферментом, не позволяет с определенностью ответить на вопрос, какая кислота ионизируется — нейтральная или несущая положительный заряд. Частично погруженная вглубь белковой глобулы кислотная группа экранирована от растворителя, и более существенным может оказаться электростатическое взаимодействие с другим группами белка. Например, р/Са ацилфермента, образованного бензоиларгинином и трипсином, почти не изменяется в смеси диоксан/вода в диапазоне концентрации диоксана от О до 50% и лишь слегка возра стает, когда концентрация достигает 88% [33]. Казалось бы, это должно соответствовать кислоте, несущей положительный заряд (например, ионизирующемуся имидазолу), поскольку в этих условиях р/Са уксусной кислоты увеличивается приблизительно на 6 единиц, однако результаты исследований методами ЯМР- и ИК-спектроскопии указывают на то, что ионизируется карбоксильная группа Asp-102 [17, 18]. [c.188]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология