Молярная концентрация фермента

Особенность кинетического анализа данного случая заключается в том, что при сравнимых по величине значениях молярных концентраций фермента и ингибитора необходимо использовать соответствующие уравнения материального баланса [c.241]

Здесь звездочками обозначены соединения, содержащие С. Обычно в опытах используют очень низкие молярные концентрации ферментов, [c.96]

Уравнение (V. 16) показывает линейную зависимость/Ст от У , причем при экстраполяции прямой на ось ординат (т. е. на V = 0) на ней отсекается отрезок, равный К (см. рис. 7). Если при этом известна молярная концентрация фермента [Е]о, то по тангенсу угла наклона (а) прямой, равному 1/ +1 [Е]о можно определить к+1 и, следовательно, к-1, а затем и к+2, т. е. фактически все константы скорости, характеризующие ферментативную реакцию. [c.51]

Очевидно, что если известна молярная концентрация фермента и максимальная скорость измерена в соответствующих единицах (М-мин" ), то без труда может быть рассчитана константа скорости распада фермент-субстратного комплекса [c.56]

Вопрос существенно осложняется, когда невозможно получить и исследовать индивидуальные ферменты, что пока является наиболее обычным случаем в энзимологии. Известное упрощение достигается, если фермент содержит в каталитическом центре в стехиометрическом количестве какой-либо кофермент (обязательный кофактор ферментативной реакции), который может быть определен аналитическими методами. Таким способом может быть измерена молярная концентрация фермента (соответственно, каталитических центров) в изучаемом неиндивидуальном ферментном препарате. [c.57]

Выше было приведено уравнение для вычисления бимолекулярной константы скорости необратимой реакции фермента с ингибитором. В соответствии с этим уравнением бимолекулярная константа скорости реакции может быть вычислена, если известны начальные молярные концентрации фермента и ингибитора и убыль концентрации одного из реагирующих компонентов (обозначим ее Х ) во времени. При этом концентрации фермента и ингибитора могут не слишком различаться, хотя в то же время данное уравне- [c.122]

Как уже указывалось, наиболее просто по значению максимальной скорости ферментативной реакции может быть определена константа скорости превращения фермент-субстратного комплекса й+а в случае, если известна молярная концентрация фермента. По зависимости к+ч от температуры при помощи приведенных выше уравнений могут быть рассчитаны Е, АЯ , А5 и. [c.133]

Внутриклеточная концентрация ферментов. Чтобы оценить в первом приближении фактическую концентрацию ферментов в бактериальной клетке, предположим, что она содержит 1000 разных ферментов, растворенных в цитозоле. Мы можем сильно упростить задачу, предположив далее, что молекулярная масса каждого из них составляет 100000, и что все 1000 ферментов присутствуют в одинаковой концентрации. Рассчитайте среднюю молярную концентрацию ферментов в такой гипотетической клетке, исходя из следующих условий в бактериальной клетке (которая представляет собой цилиндр диаметром 1 мкм и высотой 2 мкм) цитозоль (удельный вес 1,20) содержит 20% (по весу) растворимого белка и весь этот растворимый белок полностью состоит из различных ферментов. [c.269]

Если обозначить общую молярную концентрацию фермента через е, сахарозы — х ш [c.104]

При равновесии молярная концентрация фермента станет равной [(/ ) — ( 5)], а молярная концентрация субстрата (5 — РЗ). Но так как концентрация субстрата значительно больше концентрации промежуточного комплекса, то можно принять (5— 5) =5. Тогда [(/ —/ 5) + (5)] = / 5. Следовательно, константа равновесия [c.22]

Фиг. 4. Гипотетический ход ферментативной реакции во времени. Обозначения те же, что в уравнении (6). Начальные молярные концентрации фермента и субстрата приняты равными. Объяснение см, в тексте.

Что означает введенное Михаэлисом предположение о квазистационарности Оно означает, что при смешении растворов фермента и субстрата равновесное количество комплекса х образуется за время, малое по сравнению со временем наблюдения. Поэтому концентрация комплекса х будет медленно изменяться, следуя за изменением величин в ъ р. Только, если мы попытаемся измерять скорость реакции в самые первые короткие мгновения после смешения компонентов, условие квазистационарности может не соблюдаться и необходимо обратиться к первоначальной задаче во всей ее сложности. Второе естественное упрощение вытекает из того, что молярная концентрация фермента е обычно очень мала по сравнению с молярной концентрацией субстрата е<5, а концентрация активного комплекса х и того меньше х< 5. Поэтому можно упростить уравнение сохранения =54- , пренебрегая х. При этих условиях кинетическая задача решается [c.156]

Метод титрования активных центров, основанный на измерении начального всплеска, отличается от метода определения скорости ферментативной реакции тем, что он относительно нечувствителен к изменениям констант скорости. Для того чтобы получить воспроизводимые значения скорости ферментативной реакции, необходимо поддерживать строго определенные значения pH, температуры, концентраций компонентов буфера и т. д. В то же время при относительно больших изменениях константы к 2 вызываемых, например, химической модификацией фермента, величина начального всплеска остается неизменной, если только к 2 не уменьшается настолько, что ее уже не удается измерить. Таким образом, химическая модификация либо совсем не влияет на значение молярной концентрации фермента, получаемое описанным методом, либо вызывает снижение его до нуля. По этой причине метод титрования фермента был назван испытанием но принципу все или ничего [99]. [c.221]

Здесь [E]f —это суммарная концентрация фермента, т. е. концентрация свободного фермента Е и фермент-субстратного комплекса ES.. Уравнение (6-6) справедливо только при насыщении субстратом, т. е. в условиях, когда концентрация субстрата достаточно высока, чтобы, практически весь фермент перевести в промежуточное соединение ES. Рассматриваемый процесс не является реакцией первого порядка, так как исчезающий комплекс ES вновь образуется из свободного фермента. Однако константа скорости k может быть сопоставлена с KOH TaHTaMif скорости первого порядка, которые мы рассматривали в предыдущее разделе, и является мерой скорости работы фермента. Если концентрация [E]f выражена в молях активных центров на 1 л (т. е. через фактическую молярную концентрацию фермента, умноженную на число активных центров в молекуле фермента), то константу k называют числом-оборотов или молекулярной активностью [6]. [c.8]

При помощи этого метода, измеряя стационарную скорость реакции в зависимости от концентрации субстрата в двух сериях опытов — в отсутствие фактора, изменяющего и в его присутствии (также в нескольких концентрациях) — и выражая результаты линейными уравнениями Лайнуивера и Брэка, можно найти графически точку пересечения прямых и таким образом определить Лз- Если известна молярная концентрация фермента, то может [c.53]

Трудности вычисления связаны, конечно, не с измерением V, а с измерением молярной концентрации фермента. В тех сравнительно редких пока случаях, когда удается получить индивидуальный фермент и надежно измерить его молекулярный вес, определение концентрации фермента не представляет трудностей, а вместе с этим упрощается и нахождение константы k+ч. При этом, однако, необходимо иметь в виду, что фермент может содержать в молекуле не один, а несколько каталитических центров, или представлять собой ассоциат из нескольких субъединиц, из которых каждая содержит один каталитический центр. В этом случае молекулярный вес фермента или ассоциата дает возможность выразить молярную концентрацию [Е], однако рассчитанная на основе этих данных А+2 должна быть поделена на число каталитических центров в молекуле или ассоциате, поскольку индивидуальная ферментативная реакция, характеризуемая константой +2, происходит на одном каталитическом центре (согласно определению, данному в гл. И, эта константа — синоним понятия активности каталити-ческогоцентра). [c.57]

При исследовании взаимодействия фосфорорганических ингибиторов с холинэстеразами было установлено, что каждая молекула ингибитора реагирует с одним активным центром фермента, т. е. что реакция ингибирования фермента является бимолекулярной (см. ниже, стр. 205). Используя кинетические закономерности для бимолекулярных реакций при эквимолекулярных концентрациях реагирующих веществ (см. стр. 124), можно экспериментально определить молярную концентрацию фермента [99]. Так, при исследовании кинетики ингибирования холинэстеразы сыворотки крови лошади (частично очищенный препарат) о-этил-п-нитрофенилэтил-фосфонатом — армином (см. формулу I) были получены кинетические кривые, часть которых приведена на рис. 29. Для концентрации фермента, соответствующей скорости гидролиза ацетилхолина [c.166]

К-рые по экспериментальным данным позволяют определять V и К . Еще более сложный вид имеют ур-ния кинетикн двухсубстратных ферментативных реакций, в особенности обратимых реакций, в к-рых фермент-субстратные комплексы претерпевают многостадийные иревращения. Однако в значительном числе случаев, исследуя завпсимость начальной скорости реакции от концентрации субстрата, оказывается возможным вычислить основные кинетич. константы — максимальную скорость реакции (К) и константу Михаэлиса (К ). В случав простых механизмов (см. выше), если известна молярная концентрация фермента, по величине V может быть рассчитана константа скоростп распада фермент-субстратного комплекса, поскольку /с-)-2=7/[Е] ). Нетрудно видеть, что эта величина представляет собой молекулярную активность фермента. Величина константы Михаэлиса даже для простейших ферментативных реакцпй более сложна для интерпретации, поскольку определяется соотношением трех констант скорости. В случае, когда к+ <к х, К хк Цк 1 = К , следовательно, представляет константу диссоциации комплекса Е8 на Е и 8, к-рая в ферментативной кинетике наз. константой субстрата и обозначается К . Константа субстрата служит мерой сродства фермента к субстрату (сродство обратно пропорционально величине А д) и, следовательно, является важной мерой каталнтич. эффекта Ф. Кон- [c.208]

Преобразуя это уравнение, можно показать, что зависимость t от lg(a — х)/ Ь — х) представляет собой прямую линию с тангенсом угла наклона, равным 2,303//е(а — Ь). Следовательно, в таких случаях для расчета константы скорости реакции второго порядка необходимо знать молярную концентрацию фермента. [c.101]