Пептиды вируса гриппа

ЦИИ трансляции не проходит далее сквозь мембрану, а остается вставленным в мембрану как трансмембранный белок. Можно привести еще ряд аналогичных примеров интегральных мембранных белков, синтезируемых с отщепляемой N-концевой сигнальной последовательностью (гемагглютинин вируса гриппа, тяжелая цепь антигенов гистосовместимости А и В, гликофорин А красных кровяных клеток, цитохром Р-448 и т. д.). Получается, что в синтезе как секреторных, так и интегральных мембранных белков используется один и тот же механизм сигнального пептид-мембранного узнавания, вхождения растущего пептида в мембрану и затем отщепления N-концевого сигнального фрагмента, но терминация трансляции может приводить либо к прохождению конечного продукта сквозь мембрану в случае водорастворимых секреторных белков, либо к его солюбилизации в мембране в случае более гидрофобных белков, предназначенных для внутримембранной локализации. Белки, оставшиеся в мембране. эндоплазматического ретикулума, далее могут подвергаться посттрансляционному транспорту через секреторные пузырьки в мембранные структуры других типов, включая клеточную плазматическую мембрану. [c.281]

Метод пептидного картирования был также использован для сравнения белков NP и М у 16 штаммов вируса гриппа типа А человека и трех штаммов вируса гриппа типа А низших позвоночных. Применяя разделенные пептиды как таксономический критерий, все нуклеопротеиды можно сгруппировать в одну из двух основных моделей, хотя некоторое дополнительное различие пептидов суш ествовало в каждой группе NP. Не было обнаружено корреляции между группами NP и подтипами НА. Эти данные можно интерпретировать в пользу того, что произошла пересортировка среди различных штаммов вируса гриппа [28]. [c.116]

Сайты потенциального гликозилирования присутствуют в остатках 25, 59, 165, 232, 303 и 332 НА1 и в остатках 145, 171, 184 и 216 НА2. В противоположность этому гемагглютинины вирусов гриппа А — А/Мет/102/72 и A/Jap/305/57 — имеют только один углевод, прикрепленный к НА2, и 6 и 4 соответственно — в НА1. Дополнительно к сигнальному пептиду видны гидрофобные обла- [c.276]

Последние достижения в развитии новейших технологических приемов значительно расширили наши возможности в определении генетического строения и молекулярной структуры вирусов, а также выявлении сходства штаммов и идентификации различий между вариантами вирусов. Наиболее важные из этих методов — клонирование и определение последовательности нуклеиновых кислот, картирование РНК и пептидов, а также антигенный анализ белков с помощью моноклональных антител. Задача последней обзорной главы данной книги — обсуждение эпидемиологии вируса гриппа в свете применения этих новых методов. Особое внимание уделено оценке последних достижений и изучению вопросов эпидемиологии, которые могут быть успешно решены при использовании молекулярных методов. [c.313]

По существу для характеристики штаммов, циркулирующих среди животных, могут быть использованы те же методы, которые применяются нри изучении вирусов гриппа человека. Особо следует отметить олигонуклеотидное картирование РНК [14], изучение последовательностей РНК и клонированных генов [1, 18], картирование пептидов, изучение белков и РНК в геле [23, 49], а также серологические методы [52, 55], которые успешно применяли для дифференцировки вирусов гриппа животных. Однако-эти вирусы изучены в меньшей степени, чем штаммы, выделенные от людей. Это относится не только к сведениям о структуре вирусов, но также к эпидемиологическим особенностям животных штаммов, патогенезу и иммунному ответу инфицированных животных. Будущие исследования, несомненно, будут направлены на выяснение некоторых из этих вопросов. Представляется воз- [c.318]

Хотя подход с использованием синтетических пептидов обладает значительными потенциальными возможностями, остается неразрешенным ряд реальных или теоретических препятствий. Слабая антигенная активность большинства синтетических пептидов вынуждает для усиления иммунного ответа использовать в экспериментальных исследованиях на животных адъювант Фрейнда. В связи с тем что на людях адъювант Фрейнда использовать нельзя, для клинического применения синтетических пептидов необходимо обнаружение или разработка эффективных адъювантов, пригодных для человека. Не исключено, что одного пептида будет недостаточно для индукции резистентности, так как большие поверхностные антигены обычно содержат несколько различных иммунологических доменов, вызывающих защитный гуморальный и (или) клеточный ответ [15, 197]. Иногда идентификация небольших защищающих пептидов может оказаться невозможной, как, например, пептидов гемагглютинина вируса гриппа А, которые стимулировали бы образование антител, эффективно нейтрализующих инфекционность вируса [58, 70, 119]. Можно также предсказать трудности в стимуляции иммунного ответа к эпитопам, которые сформированы в результате сближения разных участков линейной белковой молекулы. Наконец, ожидаемому анти-тельному ответу у значительной части населения может препятствовать полиморфизм антигенов гистосовместимости класса II, контролирующих ответ на синтетические антигены [168]. Однако, поскольку уже достигнута защита на одной экспериментальной модели, можно надеяться на получение иммуногенных препаратов, активных в отношении других вирусов. [c.154]

О связывании пептидов с белками МНС (HLA.) класса II можно судить по результатам рентгеноструктурного исследования Л. Штерна и соавт. [338] пространственного строения комшекса внеклеточной части белка HLA-DR1 с пептидом вируса гриппа НА 306-318 триде-капептидным фрагментом гемагглютинина, мембрашого гликопротеина этого вируса. Дифракционная картина получена сг одного кристалла при -170°, используя синхронное излучение с = i,910 А. Трехмерная структура комплекса HLA-DR1/HA идентифицирована с разрешением 2,75 А. Ее ленточная диаграмма представлена на рис. 1.15. Тридека-пептид НА сорбирован в связывающем центре HL -DR1 в вытянутой, закрученной с большим шагом форме. Она представляет наилучшие возможности для взаимодействий, с одной стороны, с окружающими пептид аминокислотными остатками, а с другой - с поверхностными остатками Т-клеточного рецептора. Таким образок, пептид открыт для межклеточных взаимодействий. Схема реализуемых в комплексе HLA-DR1/HA 12 водородных связей показана на рис. 116. Связи осуществляются только между атомами основной цепи пептида НА и атомами консервативных аминокислотных остатков а-спиральных и (3-струк-турных областей HLA-DR1. Следовательно, систем водородных связей не зависит от конкретной последовательности пептида, т.е. является универсальной для пептидных комплексов HLA-DR1 класса II. Этот факт свидетельствует также о близких ориентациях пептидов в комплексах одновременно относительно связывающих центров белков HLA-DR1 и T R, принадлежащих двум клеткам. [c.79]

Высокое содержание углеводов в группоспецифических веществах крови (около 80% от общего веса) побудило некоторых авторов (нанример, [8, 56]) классифицировать эти соединения вместе с гиалуронат-белковым комплексом, хондроитинсульфат-белковым комплексом и т. д. как мукополисахариды. В определении автора они принадлежат к гликопротеинам, хотя, может быть, предпочтительнее называть их гликополипептидами. Они относятся к этой группе, так как их углеводная часть не содержит повторяющегося звена и так как в них, по-видимому, относительно короткие углеводные цепи присоединены через определенные промежутки в виде разветвлений к обычной пептидной основе [57]. Ковалентная связь между углеводом и пептидом в этих веществах согласуется с их гликопротеиновой природой. Более того, N-aцeтиллaктoзaмин, часто обнаруживаемый как фрагмент гликопротеинов (см. [58]), был выделен из очищенного группоспецифического вещества А [59—61]. Наконец, установлена тесная взаимосвязь между группоспецифическими веществами крови и большой группой несомненных гликопротеинов — ингибиторов гемагглютинина вируса гриппа. Подобно ингибиторам гемагглютинина (см. гл. 1), вещества групп крови особенно [c.34]

В таком сжатом и выборочном обзоре можно только упомянуть о несомненно важном вкладе секвенирования (вначале белков, позднее РНК и ДНК) в процесс познания генома вируса гриппа и его продуктов, особенно НА. Эта основополагаюш ая информация позволила провести не только интрацистронное картирование мутантов НА при помощи анализа триптических пептидов [72], но и первоначальную идентификацию антигенных сайтов [72, 78, 113, 134] в связи с селективным использованием моноклональных антител (см. главы 2, 4 и 5). [c.20]

Гемагглютинин вируса гриппа В также секвенировали с кДНК-копии 4-го сегмента РНК [131]. Ген из 1882 нуклеотидов кодирует 584 аминокислоты. В НА вируса гриппа В также обнаружены основные структурные детали, общие с вирусами А, включая гидрофобный сигнальный пептид, гидрофобные N- и С-концы НА2 и сайт кливеджа НА1/НА2. Что касается длины молекулы, то 24% аминокислот в НА1 и 39% аминокислот в НА2 консервативны у вирусов А и В, что свидетельствует о тесной эволюционной взаимосвязи этих вирусов. Наибольшая область консервативных последовательностей расположена на N-конце НА2, который, как уже упоминалось, играет существенную роль для активации инфекционности кливеджем. [c.47]

Открытие явления сплайсирования берет свое начало из идентификации в инфицированных вирусом гриппа типа А клетках второго неструктурного белка, NS2, с м.м. 11000, для которого профиль триптического пептида отличался от такового для других 8 продуктов вирусного гена. Это означает, что один из 8 сегментов вРНК (генома) должен кодировать два белка [56]. Восьмой сегмент (наименьший сегмент вРНК), как было установлено, кодирует не только белок NS1, но и белок NS2. Это было показано в экспериментах с рекомбинантными вирусами, в которых белки NS1 и NS2 были пересортированы вместе [35, 53]. Две различные [c.84]

Многие пептиды антигенны при связывании с белками-носителями, но, как известно на сегодня, эти синтетические пептиды не индуцируют достаточной защиты против впруса гриппа при разрешении in vivo. Потенциальные возможности таких вакцин явно существуют, так как клеточно-опосредованные эксперименты указывают на существование перекрестно реагирующих детерминант между подтипами вируса гриппа типа А. [c.157]

М. Krystal и соавт. [39] секвенировали клонированные кДНК-копии гена НА B/Lee/40. Полная последовательность НА была получена при помощи двух клонов, один из которых простирался от синтетического олигонуклеотида, использованного в качестве праймера при синтезе кДНК, до 1336 основных пар. Второй клон начинался с нуклеотида 483 и простирался до 5 -конца вирионной РНК, что облегчило определение полной последовательпости. Общая длина составляет 1882 нуклеотида. Первый АУГ начинается в нуклеотиде 34, и в случае трансляции последовательности с этого инициирующего кодона предсказан белок из 584 аминокислот. N-терминальная последовательность начинается аминокислотой 16 [102]. Последовательность с 3-й по 15-ю аминокислоту неполярна и предположительно является сигнальным пептидом, как и у вирусов гриппа А [1, 22]. [c.276]

При сравнении последовательностей вирусов гриппа B/Lee/4Q и A/PR/8/34 [109] обнаружено наличие 24°/о и 39% консервативности аминокислот в НА1 и НА2 соответственно. При сравнении последовательностей вирусов A/PR/8/34 и A/Ai hi/2/68 [100] консервативность была представлена 35% и 53% таким образом, по-следовательность НА вируса гриппа В, несмотря на имеюгциеся отличия, все-таки имеет определенные гомологии с последовательностями НА известных вирусов гриппа А. Тринадцать цистеиновых остатков у B/Lee/40 и A/PR/8/34 могут быть выстроены в одну линию только лишние цистеиновые остатки находятся в сигнальном пептиде и очень близки к С-терминалу НА2 вируса A/PR/8/34. Ни один из них не включен в глобулярную структуру НА, Таким образом, вполне вероятно, что основная трехмерная структура НА вируса гриппа В будет подобна таковой для вируса гриппа A/Ai hi/2 8 [107]. [c.277]

После окончания кодирующих участков М1 нуклеотидная гомология между сегментами 7 вирусов гриппа А и В снижается до только 1 из 4 ожидаемых совпадений и не наблюдается никакой отчетливой аминокислотной гомологии между М2-носледо-вательностями. Карбоксильный терминал белка М1 вируса гриппа В имеет последовательность из 9 аминокислот после кодона АУГ и может быть аналогичен потенциальному пептиду, кодируемому третьей мРНК сегмента 7 вируса гриппа А, который имеет только 9 аминокислот, включая инициирующий метиониновый остаток, идентичный таковому на карбоксильном терминале белка М1. [c.280]

Таблица 18.1. Избирательное введение трития в некоторые пептиды химотриптического гидролизата легкой цепи гемагглютинина вируса гриппа

Несомненно, что наиболее точно установленные к настоящему времени различия в вирулентности, зависящие от вируса, связаны с расщеплением НА. H-D. Klenk и соавт. [27], а также S. Lazarowitz и Р. hoppin [28] первыми показали, что частицы вируса, продуцируемые в клетках, в которых не имеется протеаз хозяина, способных расщеплять вирусный НА на субъединицы НА1 и НА2, могут прикрепляться к рецепторам клетки-хозяина, но неспособны инициировать инфекцию. Впоследствии на различных клеточных системах и интактных животных было показано, что для многоцикловой репликации различных вирусов гриппа необходимо, чтобы клетки хозяина могли осуществлять процесс расщепления [8]. Затем было обнаружено, что это свойство необязательно связано с серотипом НА некоторые Н7-содержащие вирусы являются патогенными и реплицируются с расщепленным НА, тогда как НА других авирулентных вирусов того же серотипа не расщепляется [18]. Более того, обнаружили корреляцию этих различий с последовательностью карбоксильных окончаний различных видов НА1. В вирусах человека, содержащих Н2 и НЗ, а также в авирулентных Н7-содержащих птичьих вирусах только аргинин глициновый пептид чувствителен к протеолитическому расщеплению, в то время как связующий пептид в карбоксильных окончаниях НА1 вирулентных штаммов с Н7 имеет большую длину и содержит основные пептиды. В результате возникло предположение, что эти структурные различия в участках расщепления непосредственно связаны с расщепляемостью различных гемагглютининов в тех или иных клеточных системах хозяина [8]. [c.299]

Дальнейшее приближение к вакцинам против практически важных заболеваний получено на примере вируса гриппа [223]. Синтетический пептид, соответствующий последовательности 91-108 гемагглютинина этого вируса, присоединен к столбнячному токсоиду и полученный конъюгат введен животным в полном адъюванте Фрейнда. Продуцируемые в ответ антитела показали заметную кросс-реактивность к интактному вирусу штамма А/Тех/77 и ингибировали гемагглютинацию эритроцитов вирусом. Эти, а также некоторые другие результаты указывают на эффективность конъюгата в стимуляции противогриппозного иммунного ответа. Аналогично построенная вакцина получена на основе синтетических пептидных фрагментов субъединицы В холерного токсина и столбнячного ток- [c.146]

И те же Th-клетки могут обеспечить помощь В-клеткам, помопХь в индукции цитотоксических Т-клеток и помощь в развили реакции гиперчувствительности замедленного типа. Кроме того, необходимо определить круг растворимых факторов, которые может производить один клон. Недавно описаны клоны Th-клеток, специфичных для пептидов, входящих в состав гемагглю тинина вируса гриппа, и для пептидов HSV. Можно надеяться что ответы на поставленные вопросы будут скоро получены [26]. [c.14]

Быстрый прогресс в определении последовательностей РНК или ДНК различных вирусных генов упростил отбор пептидов с потенциальной антигенной активностью. В течение последних нескольких лет идентифицированы главные антигенные детерминанты защитных белков ряда важных патогенных вирусов Это достигнуто с помощью комбинации различных методов, а) определения трехмерных структур антигена (гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа А) б) сравнения аминокислотных последовательностей вирусных антигенов, подвергающихся естественным антигенным изменениям [гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа и УР1 вируса ящура (РМОУ)] в) анализа последовательностей компонентов вирусных мутантов, отобранных по способности противостоять дей- [c.152]

После первоначального успешного получения иммуногенных пептидов РМОУ возникли надежды, что с пептидами других вирусов успех будет столь же быстрым. Однако этого не случилось результаты опытов оказались разнородными были успешные, были и неудачные. Например, пептиды многих гидрофильных участков гемагглютинина вируса гриппа, включая главные антигенные детерминанты, стимулировали образование антител, которые связывались с гемагглютинином, но эти антитела не нейтрализовали вирусную инфекционность и не обеспечивали статистически значимой защиты от заражения в опытах на хомячках [58 Мэрфи, неопубликованные данные]. Аналогичные исследования на мышах выявили только частичную защиту [5]. Однако пептид HBsAg, содержащий групповые и подгрупповые детерминанты, несмотря на низкий уровень антител, индуцируемых им у шимпанзе, полностью защитил одно животное из трех от заражения вирусом гепатита В и придал частичную устойчивость другому [54]. Кроме того, пептиды, состоящие из 16 и 23 аминокислот и соответствующие З -концевым участкам генома Н8У-1, вызвали значительную устойчивость у мышей к заражению их летальной дозой Н8У-2 [32]. [c.153]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология