Профлавин

Рис. 77. Синергистическая активация профлавином гидролиза этилового эфира М-бензоил-1-аргинина, катализируемого папаином [34], если концентрация активатора, М

В качестве примера сравним характеристики комплексообразования с активным центром а-химотрипсина двух красителей [61], а именно профлавина [c.30]

При трактовке природы спектральных сдвигов нужно соблюдать известную осторожность. Волькенштейн с сотр. [81] показали, что смещение красителя профлавина определяет не диэлектрическая проницаемость среды, а ее показатель преломления. Так, при переходе от воды (е = 81, по = 1,33) к диоксану (е = 2,4 по = 1,42) и к формамиду (е = 109,5 по = 1,44) происходит одинаковое смещение Я акс- [c.139]

Кинетика обесцвечивания профлавина под действием ультрафиолетового света. Условия опыта pH 6,9 25° С [c.9]

Оптическая плотность раствора профлавина при длине волны X = 444 нм. [c.9]

Рис. 2. Графическое дифференцирование кинетической кривой обесцвечивания профлавина под действием ультрафиолетового света

Рис. 3. Определение константы скорости первого порядка обесцвечивания профлавина

Кинетика обесцвечивания профлавина под действием ультразвука. Условия опыта [c.23]

Из рис. 9 следует, что глубина реакции обесцвечивания профлавина ограничена значением /)444 0,125 и не падает до нуля в конце озвучивания. Поэтому для расчета константы скорости [c.29]

Рис. 9. Кинетическая кривая обесцвечивания профлавина иод действием ультразвука

Рис. 10. Определение константы скорости первого порядка обесцвечивания профлавина иод действием ультразвука

В таблице 15 приведены данные по влиянию профлавина на кинетические параметры гидролиза этилового эфира N-бензоил-глицина, катализируемого папаином [13]. Исходя из предположения о двухстадийном механизме ферментативной реакции, предложить кинетическую схему реакции папаина в присутствии профлавина и вычислить возможные кинетические и равновесные параметры реакции. [c.95]

В таблице 18 приведены кинетические данные по изучению ингибирования профлавином гидролиза этилового эфира Ы-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином. Исходя [c.125]

Обработкой данных табл. 18 в координатах Лайнуивера-Берка можно показать, что профлавин является конкурентным ингибитором а-химотрипсина. Однако зависимость в координатах (Кт(кяж), [I]) в данном случае является нелинейной (рис. 68), в отличие от простого конкурентного типа ингибирования. Одной из возможных причин подобной зависимости может быть связывание с активным центром фермента двух молекул конкурентного ингибитора [c.141]

Таблица 9 Значения эффективных констаит скоростей первого порядка вытеснения профлавина из комплекса фермент-краситель при ацилировании фермента субстратом.

Условия опыта pH 5,4 28° С начальная концентрация фермента ЫО- М начальная концентрация профлавина [Р]о = 5-10- М [c.196]

Гидролиз этилового эфира К-ацетил-Ь-тирозина, катализируемый а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи в условиях [8 о2>[Е]о ло вытеснению профлавина из комплекса его с ферментом [7] (константа диссоциации комплекса фермент-профлавин в условиях эксперимента равна 4,4-10-5 М). Уменьшение оптической плотности раствора (А,=465 нм) во времени подчинялось кинетике первого порядка (табл. И). Из кинетических [c.197]

Значения констант скоростей вытеснения профлавина из комплекса его с а-химотрипсином под действием субстрата. Условия опыта pH 5,0 [c.197]

С (Е]о = 10- М начальная концентрация профлавина [Flo=5-10- M ионная сила 0,4М [c.197]

Кинетика вытеснения профлавина из комплекса фермент-профлавин под действием субстрата. Условия опыта pH 3,1 25° С ионная сила 0,4М (Е1о = 9,5-Ю- М начальная концентрация профлавина [Р] о = 4,75-10 М [c.198]

Константы равновесия в том и другом случае отличаются незначительно (в 2—4 раза). В то же время при переходе от профлавина к родамину 6Q процесс комплексообразования красителя с активным центром замедляется почти в 10 paat Структуры молекул этих лигандов различаются в основном лишь тем, что молекула родамина 6Q содержит дополнительное бензольное кольцо. Как показало изучение температурной зависимости кинетики комплексообразования, энергия активации этого процесса порядка 17 ккал/моль (71,4 кДж/моль). С другой, стороны, известна, что энергия активации процессов, контролируемых диффузией, не превышает, как правило, 5 ккал/моль (21 кДж/моль) [62, 63]. Поэтому следует заключить, что образование комплекса химотрипсина с более объемной молекулой родамина 6G возможно лишь в результате конформационных изменений в молекуле фермента. Такой механизм (1.8) комплексообразования органических молекул с белками, по-видимому, весьма распространен. [c.31]

Зависимость эффективной константы скорости вытеснения профлавина из комплекса фермент-профлавин от концентрации субстрата. [c.198]

Условия опыта pH 4,3 26,5° С 1,6% ацетонитрила (Е]о = 5-10 М начальная концентрация профлавина (Р]о=5-10- М [c.198]

Кинетику гидролиза этилового эфира N-фурил-акрилоил-L-тирозина, катализируемого а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи в условиях [8]о [Е]о по вытеснению профлавина из комплекса его с ферментом (константа диссоциации [c.198]

Значения эффективных констант скоростей вытеснения профлавина из комплекса фермент-профлавин при ацилировании фермента субстратом. Условия опыта pH 5,0 24,5° С [c.199]

При изучении взаимодействия профлавина с трипсином (схема 9.9) методом температурного скачка [14] было найдено одно время релаксации, зависящее от концентраций реагентов (табл. 15). Определить значения элементарных констант скоростей реакции [c.199]

Зависимость времени релаксации для связывания профлавина с трипсином от суммы равновесных концентраций реагентов. Условия опыта pH 7,7 17° С 0,02М СаС 0.07М трис-буфера [c.200]

Ер качестве конкретной системы можно исследовать комплекс а-химотрипсина с профлавином, который является ингибитором фермента. При уменьшении pH среды снижается связывание фер- [eнтa в комплекс за счет конкурентной реакции с протонами [c.197]

При рН-скачке иод действием имлульса света наблюдается уменьшение поглощения комплекса, которое протекает с константой скорости Константа = л-моль с , й 1=10 с К Концентрация а-химотрипсина и профлавина моль/л. Концентрация о-нитробензальдегнда 10 3 моль/л. Измерение поглощения комплекса проводят при 465 нм. Свободный профлавип имеет максимум поглощения 455 нм. [c.198]

В число примеров препаратов ненуклеозидной природы, ингибирующих синтез ДНК путем связывания с двойной спиралью, входят акридины (например, профлавин) и различные антибиотики (например, митоцнн С, адриамицин, дау-номицин). Способность акридинов связываться с ДНК и РНК вызвало их использование в биологии в качестве биологических красителей этих молекул. Связывание осуществляется путем интеркаляции плоская кольцевая система про-флавина, например, интеркалирует (протискивается) между парами оснований двойной спирали, образующих стопочную структуру. Можно ожидать, что такой бутерброд из ДНК и связанных с ней молекул красителя изменит свою геометрическую структуру (удлинит двойную спираль), что и наблюдается в действительности. [c.152]

Рис. 70. Зависимости (5.214) и (5.215) как функции времен релаксаций (а) 1/Т1 + 11x2 и (б) lxi- 1/та от суммы равновесных концентраций а-химотрипсина (ХТ)и красителя профлавина (ПФ) в реакции (5.207) образования комплекса [41]

В качестве примера рассмотрим механизм комплексообразования с активным центром а-химотрипсина красителя профлавина [411. Кинетическая кривая комплексообразования описывается суммой двух экспоненциальных членов. Из их цоказателей были найдены два времени релаксации и т . На рис. 70 представлена зависимость функции от суммы равновесных концентраций фермента и красителя. В соответствии с уравнением (5.214) по тангенсу угла наклона этой зависимости определяется константа скорости Отрезок, отсекаемый на оси ординат, дает сумму констант 21 + 23 + Соответственно из зависимости функции от равновесных концентраций фермента [c.210]

Обесцвечивание красителя профлавина (3,6-диаминоакридина) под действием ультразвука (частота 880 кгц, интенсивность 2 вт/см ) подчиняется кинетике первого порядка (табл. 1). Определить значение константы скорости реакции. [c.23]

В работе [13] изучалось активирующее влияние красителя профлавина на гидролиз этилового эфира Ы-бензоил-Ь-аргини-на, катализируемый папаином (табл. 14). Исходя из двухстадий- [c.94]

Влияние профлавина на кинетику гидролиза этилового эфира N-бeнзoил-L-apгининa, катализируемого папаином. Условия опыта pH 6,6 [c.95]

Влияние профлавина на гидролиз этилового эфира N-бензоилглицина, катализируемый папаином. Условия опыта pH 6,6 25° С [c.95]

В последнее время работами Хесса с сотрудниками [5—7] на примере а-химотрипсина был развит новый метод изучения кинетики начальных стадий ферментативных реакций, получивший название метода вытеснения профлавина . Метод основан на том факте, что краситель профлавин (3,6-диаминоакридин) при связывании с а-химотрипсином в водном растворе изменяет свой спектр поглощения в ультрафиолетовой области. Величина разностного спектра поглощения, имеющего максимальное значение при длине волны 465 нм, пропорциональна -концентрации комплекса фермент-профлавин. Введение в систему фермент-профлавин субстрата, конкурирующего с красителем за связывание на активном центре а-химотрипсина, приводит к двум последовательным процессам вытеснения профлавина. Первый, очень быстрый процесс, заключается в обратимом вытеснении красителя из комплекса его с ферментом за счет образования нековалентного фермент-субстратного комплекса. Второй процесс, времена прохождения которого лежат обычно в пределах разрешения установок типа остановленной струи , вызван химическим взаимодействием субстрата с ферментом (например, образованием ацилферментного промежуточного соединения), что приводит к дополнительному уменьшению концентрации комплекса фермент-профлавин. Изучение кинетики второго процесса при различных концентрациях субстрата в дополнение к изучению кинетики ферментативной реакции в стационарном режиме позволяет сделать заключения о стадийности изучаемой реакции, а также найти значения констант скоростей промежуточных стадий ферментативной реакции. [c.188]

Кинетику гидропиза этилового эфира Ы-ацетил-Ь-трипто-фана, катализируемого а-химотрипоином, изучали в начальный период реакции с помощью метода вытеснения профлавина [5]. Было найдено, что уменьшение оптической плотности раствора во времени, соответствующее уменьшению концентрации комплекса фермент-профлавин, описывается кинетикой первого порядка с эф- [c.195]

Гидролиз метилового эфира N-aцeтил-L-фeнилaлaнинa, катализируемый а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи, используя методику вытеснения профлавина из комплекса его с ферментом [6]. Было найдено, что уменьшение оптической плотности раствора при длине волны 465 нм (соответствующей максимуму поглощения комплекса фермент-профлавин) описывается кинетикой первого порядка (табл. 12). Из независимых экспериментов нашли, что константа диссоциации комплекса фермент-профлавин при условиях опыта равна 1 - Ю- М. Значение каталитической константы, найденное в стационарном режиме проведения реакции ферментативного гидролиза, равно 0,03 сек-. Найти значения индивидуальных констант 2, кз и /Сз (схема 9.7) при условии к2 >кз для изучаемой реакции. [c.197]

Кинетику гидролиза м-нитрофенилового эфира Ы-ацетил-Ь-тр птофана, катализируемого а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи по вытеснению профлавина из комплекса фермент-профлавин в начальный период реакции (в условиях 8 [Е]о). Уменьшение оптической плотности раствора при длине волны 480 нм (соответствующей уменьшению концентрации комплекса фермент-краситель) описывалось кинетикой первого порядка (табл. 13). Из независимых экспериментов было найдено, [c.198]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология