Мононуклеотиды Г. И. Мягкова

Нуклеиновые кислоты являются высокополимерными соединениями, в их состав входит очень большое число отдельных нуклеотидов (мононуклеотидов), и, таким образом, нуклеиновые кислоты представляют собой полинуклеотиды. При мягком щелочном гидролизе нуклеиновых кислот они распадаются на отдельные нуклеотиды, при этом наблюдается нейтрализация участвующей в реакции щелочи. Этот факт говорит [c.229]

Действительно, первым этапом исследования нуклеиновых кислот явилось изучение продуктов, образующихся ири их гидролизе. При мягком щелочном гидролизе под действием 1 N едкого натра нри 37 , 0,1 /V едкого натра при 100° или под действием 2%-ного водного раствора аммиака полимерная молекулы РНК распадается на мононуклеотиды, содержащие гетероциклическое ядро, моносахарид и остаток фосфорной кислоты, которые и могут быть выделены при жесткой деструкции самого мононуклеотида. Изучение частичного гидролиза мононуклеотидов позволило выяснить ту последовательность, в которой связаны между собою эти три структурные единицы. При нагревании мононуклеотида с разбавленным аммиаком нри 145 от него отщепляется остаток фосфорной кислоты и образуется нуклеозид, при гидролизе которого в кислой среде получается гетероциклическое основание и моносахарид. С другой стороны, при гидролизе мононуклеотида в кис- [c.175]

Ионообменные смолы очень удобны для разделения сложных смесей мононуклеотидов и низших олигонуклеотидов. На НСОО -форме этих ионитов при элюировании муравьиной кислотой или раствором формиата аммония удается осуществить очень четкое препаративное разделение компонентов смеси. Кроме крутизны градиента, которую легко регулировать, для хорошего разделения требуется выполнение еще ряда условий. Во-первых, отношение высоты колонки к диаметру должно быть примерно равно 10. Во-вторых, важно, чтобы скорость потока элюента не превышала 0,6 мл-см -мин . Еще одно очевидное требование — исключение из подаваемого в колонку раствора нежелательных анионов (трихлоруксусной кислоты, или —после экстракции хлорной кислотой — иона IO4 ) с тем, чтобы не снизилась емкость колонки, а следовательно, и ее эффективность. Если элюирование ведут муравьиной кислотой, то удалять ее после хроматографического разделения следует выпариванием в мягких условиях (например, в роторном испарителе). Экспериментатору следует помнить о том, что в процессе выпаривания происходит концентрирование в образце муравьиной кислоты, поэтому выпаривание необходимо вести при пониженной температуре. Формиат аммония можно удалить возгонкой при слегка повышенной температуре (до40°С) под вакуумом (масляный насос). Нуклеотиды можно адсорбировать из соединенных фракций на активном угле, масса которого в 5—10 раз должна превышать массу нуклеотида. После [c.327]

Нуклеиновые кислоты являются многоосновными кислотами, которые при мягком гидролизе щелочами распадаются на мононуклеотиды. Мононуклеотиды при нагревании до 145 °С с водным аммиаком теряют остаток фос- [c.171]

Анализ продуктов расщепления позволяет сделать предварительные выводы о принципе строения нуклеиновых кислот. При гидролизе в мягких условиях ферментами из панкреатической железы образуются мононуклеотиды, каждый из которых представляет собой молекулу продукта расщепления нуклеиновой кислоты. Мононуклеотид можно затем расщепить действием разбавленной соляной кислоты на пуриновое или пиримидиновое основание и соединение сахара с фосфорной кислотой. Фермент, выделяемый железами кишечного тракта,— нуклеотидаза вызывает распад мононуклеотида на фосфорную кислоту и соединение сахара с пуриновым или пиримидиновым основанием. Из этих данных видно, что связь между фосфорной кислотой и основанием осуществляется через молекулу сахара, а через молекулу фосфорной кислоты происходит соединение мононуклеотидов в макромолекулу. Принцип строения нуклеиновых кислот можно выразить следующей схемой, где буквой О обозначено пуриновое или пиримидиновое основание, буквой [c.95]

Нуклеиновые кислоты являются многоосновными кислотами, расщепляющимися на более простые компоненты при действии специфических ферментов, кислот, щелочей и других химических реагентов. Например, при мягком гидролизе щелочами или водным раствором аммиака рибонуклеиновые кислоты распадаются на мононуклеотиды, которые, в свою очередь, отщепляют остаток фосфорной кислоты при нагревании до 145° С с водным аммиаком. Образующиеся при этом нуклеозиды в условиях кислотного гидролиза распадаются на простейшие компоненты — пуриновые и пиримидиновые основания и сахара. [c.326]

Далее ступенчато, звено за звеном, шел химич. синтез отдельных олигомеров строго детерминированной структуры. Все активные фзпнкциональные группы в мононуклеотидах защищали реагентами, к-рые по окончании синтеза отщепляли в мягких условиях. Только реагирующие группы, а именно ОН-группа в фосфате одного из нуклеотидов (мономерами служили 5 -нук-леотиды, т. е. нуклеозид-5 -фосфаты) и ОН-группа в положении 3 у дезоксирибозы следующего нуклеотида, оставались свободными. Далее следовало действие конденсирующего агента, способного активировать эти гидроксилы, т. е. отнять от них молекулу воды, соединив нуклеотиды фосфоэфирной связью. Синтезы велись в безводном пиридине в качестве растворителя, конденсирующим агентом служил. мезитиленсульфо-хлорид [c.198]

Нуклеотидами "называются фосфорные эфиры нуклеозидов, в которых, сахар связан с фосфатной группой через атом кислорода. Их можно получить при химическом или ферментативном гидролизе нуклеиновых кислот, если проводить гидролиз в мягких условиях. В случае рибонуклеотидоВ гидролизат может содержать смесь 2 -, 3 - и 5 -мононуклеотидов (т. е. рибо-яуклеозид-2 -, рибонуклеозид-3 - или рибонуклеозид-5 -фосфатов цифра со-штрихом указывает положение, в котором произошла этерификация сахара) в случае дезоксирибонуклеотидов в гидро лизате могут присутствовать только [c.126]

Два типа полинуклеотидов — ДНК и РНК — резко различаются по стабильности фосфодиэфирных связей. В то время как РНК при относительно мягкой щелочной обработке гидролизуется до мононуклеотидов, ДНК в этих условиях довольно устойчива то же относится к действию соединений тяжелых металлов (см. стр. 368). При кислотном гидролизе происходит деградация полимеров обоих типов, однако характер продуктов и механизм расщепления фосфодиэфирных связей для ДНК и РНК в этом случае различен. Больщинство реакций, приводящих к расщеплению фосфодиэфирных связей в РНК, протекает по механизму трансфосфорилирова-ния с участием гидроксильной группы при С-2 остатка рибозы, в то время как для ДНК характерен распад фосфодиэфирных связей по механизму р-элиминации с предварительным отщеплением оснований (см. стр. 571) или с окислением остатка дезоксирибозы (см. стр. 390). [c.553]

Первый нуклеотид, инозиновая кислота (по-гречески — мышечная ткань), был выделен Либихом [2] в 1847 г. из мясного экстракта отчасти как результат полелп1ки, поднятой Берцелиусом по поводу наличия креатина в сыром и вареном мясе). С тех пор было выделено большое число мононуклеотидов, как правило, 5 -фосфаты, хотя в яде тигровых змей и родственных видов был найден также аденозин-З -фосфат 13]. Эти соединения выделяют прямой экстракцией тканей или организмов 14—9], в которых они обычно присутствуют в небольших количествах в качестве промежуточных соеди-нени1 обмена. Однако основным источником мононуклеотидов являются их полимерные производные, нуклеиновые кислоты. При щелочном гидролизе в мягких условиях [10, 11] рибонуклеиновой кислоты образуется смесь 2 - и З -фосфатов нуклеозидов, которую можно легко разделить с помощью ионообменной хроматографии 112], Для выделения аналогичных 5 -эфиров требуется применение ферментативного гидролиза, как правило, с использованием фосфо-диэстеразы змеиного яда 113, 14]. Подобная ферментативная обработка дезоксирибонуклеиновой кислоты после предварительной обработки дезоксирибонуклеазой приводит к дезоксинуклеозид-5 -фосфатаы [15—17]. Очищенная диэстераза змеиного яда значи- [c.123]

Полезное усовершенствование методов определения концевых групп заключается, по-видимому, в метилировании концевой моно-этерифицированной фосфатной группы в олигонуклеотидах под действием дициклогексилкарбодиимида и метанола. Последующий гидролиз при использовании соответствующих гидролитических методов дает метиловый эфир концевого нуклеотида или концевого олигонуклеотида. Чувствительность, вероятно, можно было бы значительно увеличить применением С -метанола [385]. Этот метод пока не удалось применить к полирибонуклеотидам (или к дезоксинуклеиновым кислотам). Концевую фосфатную группу в олигодезоксинуклеотидах удобнее пометить при помощи обработки олигомера этилхлорформиатом и три-й-бутиламином в водном растворе. В таких мягких условиях реакция, по-видимому, ограничивается тем, что образуются ангидриды с участием лишь концевых фосфатных групп. Последующая обработка диэстеразой дает мононуклеотиды и концевой ангидрид — нуклеотидэтилкарбонат. Можно также использовать неочищенный змеиный яд, поскольку концевой ангидрид устойчив к гидролизу, тогда как мононуклеотиды распадаются далее до нуклеозидов [18]. Предварительное исследование показало, что этот метод также применим к полирибонуклеотидам, содержащим концевую 5 -фосфатную группу. [c.426]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология