Двойные обратные координаты

Рис 314 График зависимости кажущихся констант скорости инактивации от концентрации ингибитора в двойных обратных координатах Объяснение в тексте [c.212]

График Скэтчарда является наилучшим из всех линейных преобразований уравнения насыщения, н в частности графика двойных обратных координат (рнс. 6-3). [c.252]

Кинетические параметры, входящие в уравнение (6-356), часто находят из экспериментальных данных, используя графики двойных обратных координат (рис. 6-i5). Обратите внимание на то, что урав нение (6-356) является линейным только в том случае, если либо концентрация субстрата А, либо концентрация субстрата В постоянна. Чтобы выполнить это условие, проводят серию экспериментов, в которых варьи- [c.19]

Интересной особенностью механизма типа пинг-понг является то, что семейство прямых в двойных обратных координатах, которое получают при варьировании концентрации одного субстрата и фиксированных [c.22]

Используя квазистационарное приближение для Е8 и квазиравновесное приближение для Е81, найдите начальную скорость реакции и о- Как связаны максимальная скорость реакции и константа Михаэлиса с соответствующими величинами для неингибируемой реакции На одном графике изобразите в двойных обратных координатах зависимость скорости от концентрации субстрата для ингибируемой и неингибируемой реакции. [c.238]

Дополнение 9-2. Преобразование уравнения Михаэлиса-Ментен график в двойных обратных координатах [c.236]

Как мы увидим дальше, графики в двойных обратных координатах с большой пользой применяются также при изучении ингибирования ферментативных реакций. [c.237]

Конкурентное ингибирование проще всего можно распознать экспериментальным путем, определив влияние концентрации ингибитора на зависимость начальной скорости реакции от концентрации Субстрата. Для выяснения вопроса о том, по какому типу-конкурентному или неконкурентному-происходит обратимое ингибирование фермента (дополнение 9-3), весьма удобно преобразовать уравнение Михаэлиса-Ментен в линейную форму. Чаще всего для этой цели используют метод двойных обратных величин. Из графиков, построенных в двойных обратных координатах, можно определить также значение константы диссоциации комплекса фермент-ингибитор. Для реакции диссоциации [c.246]

Неконкурентное ингибирование фермента можно отличить от конкурентного путем анализа кинетических данных, выраженных графически в двойных обратных координатах, как показано в дополнении 9-3. [c.248]

Рис. 51. Световые кривые окисленности переносчика в двойных обратных координатах

На рис. 50 представлены световые кривые заселенности окисленного состояния в зависимости от длительности темновой релаксации переносчика. По оси абсцисс на этом рисунке отложена величина ко/к, а по оси ординат — относительная величина изменения поглощения. Выбор указанного масштаба по оси абсцисс приводит к тому, что световые кривые всех переносчиков, полученных с помощью непрерывного освещения, совпадают друг с другом (кривая 1). Все световые кривые, соответствующие периодическому возбуждающему свету, лежат ниже этой кривой. На рис. 51 представлены те же кривые, но в двойных обратных координатах. [c.228]

Наиболее часто используют два вида преобразований двойные обратные координаты и координаты Скэтчарда (рис. 27). В двойных обратных координатах уравнение связывания преобразуют к виду 1/г = /(1/с) [c.80]

Рис. 10. Графическое определение константы связывания в двойных обратных координатах

При постоянной концентрации антител в системе варьируют начальную концентрацию антигена и в условиях равновесия определяют концентрацию свободного и связанного в комплекс антигена. График в двойных обратных координатах представляет собой [c.45]

На протяжении последних 40 лет большая часть зкспериментальных данных по ферментативной кинетике представлялась в виде линейных графиков, описанных в разд. 2.5. Чаще всего для этих целей использовался график двойных обратных координат, т. е. график зависимости 1/у от 1/ . Однако именно он вызывает наиболее сильные нарекания со стороны статистики и дает весьма ненадежные значения ЛГм и V. Несмотря на успехи, достигнутые в последние годы в разработке методов обработки экспериментальных данных, график двойных обратных координат по-прежнему очень популярен отчасти зто объясняется тем, что он широко используется некоторыми ведущими энзимологами, не до конца, по-видимому, представляющими, каковы недостатки этого графического метода. С другой стороны, его популярность можно объяснить и тем, что этот метод несколько проще других. [c.232]

Наконец, определим дисперсию обратной величины. Это особенно полезно знать при обработке данных по ферментативной кинетике, поскольку позволяет понять отрицательные стороны графика двойных обратных координат (разд. 10.5). Ошибка для 1/х равна [c.238]

Заключительные замечания об использовании графика двойных обратных координат [c.250]

Рис. 21. Зависимость начальной скорости пероксидазного окисления гидрохинона от его концентрации в двойных обратных координатах при различных концентрациях ин-долил-З-уксусной кислоты, мкМ 1-0,2-20,3-40,4-80 пероксидаза — 4,0 нМ перекись водорода — 0,64 мМ 0,1 М натрий-фосфатный буфер, pH 7,5.

Определение кинетических параметров Кт и V) для ферментов с 5-образной кинетикой затруднено, так как кривые не линеаризуются в двойных обратных координатах. В случае положительной коопера-тивности кривые загибаются кверху, а при отрицательной — книзу. Экстраполяция прямого участка кривой до пересечения с осью абсцисс позволяет определить концентрацию субстрата, при которой скорость реакции равна половине максимальной. Эту величину принято обозначать 5о,б. Для описания зависимости скорости реакции от концентрации субстрата в случае аллостерических ферментов применяют преобразованное уравнение Хилла [c.215]

Изучить зависимость скорости реакции от концентрации Q2. С этой целью в среду измерения активности добавляют в различных концентрациях Q2 (0 0,2 0,4 0,8 2 и 5 мкМ). Строят график зависимости скорости реакции от концентрации Q2 в прямых и двойных обратных координата.х. Находят значение Утах и Кт СУР для Q2. [c.426]

Построение графика двойных обратных координат 1/[3] 1/и (графика Лайиуивера — Бэрка рис. 6-3, Л) позволяет определить величнньр Кгл]Утях н 1/Ктах ОНИ равны наклону прямой н длине отрезка, отсекаемого ей на оси ординат, соответственно. Лучше использовать график [c.12]

РИС. 6-3. Линейные анаморфозы уравнения Михаэлиса — Ментен. А. График зависимости /и от 1/[8] (график двойных обратных координат, или график Лайиуивера — Бэрка). Отрезок, отсекаемый прямой на оси ординат, равен 1/Утч, а наклон — Б. График зависимости /[5] от V (график Эди — Хофсти). Наклон прямой равен —1/УСм, а отрезки, отсекаемые иа осях ординат и абсцисс, равны соответственив [c.13]

РИС 6-5 Графики двойных обратных координат, используемые для анализа кинетики двухсубстратных ферментативных реакций. А Серия зависимостей 1М ОТ 1/[А] при различйых фиксированных концентрациях второго субстрата (В). Б Вторичный график зависимости длины отрезка, отсекаемого на оси ординат прямыми в координатах v 1/[А] , от 1/[В] В Вторичный график зависимости наклона первичных зависимостей, представленных на рис А, от 1/[В]. Все зависимости рассчитаны с помощью уравнения (6-35а) при следующих значениях параметров М, УСмв =2Л ма, Aв= eqAЛ мs=/ мA/200, [А] = [В] = 1 М В качестве первичных графиков [c.20]

РИС. 6-6. График Эди — Хофсти А) и график двойных обратных координат (Б) для реакций, протекающих в присутствии коикуреитного ингибитора. Кажущаяся константа Км в соответствии с уравнением (6-44) растет с увеличением концентрации ингибитора, а величина Vmax остается неизменной. — в отсутствие ингибитора II — Я/-[1]=2К.. [c.28]

РИС 6-8. Графики двойных обратных координат для реакций, протекающих в присутствии иекоикуреитиого или частично коикуреитного ингибитора. / — в отсутствие ингибитора II —в присутствии иекоикуреитиого ингибитора (fl]/Ki-[I]//fi l) III — в присутствии частично конкурентного ингибитора ([I]//fi—0,5 = [c.30]

Согласно этому уравнению, по графику, построенному в двойных обратных координатах, можно более точно определить Vmax (рис 15) [c.73]

Использование графиков, построенных в двойных обратных координатах для анализа данных, полученньк при исследовании ингибирования ферментативных реакций, позволяет легко отличать конкурентные ингибиторы от неконкурентных. Проводятся две серии опытов по определению скорости реакции при одной и той же концентрации фермента. В одной серии концентрация субстрата тоже остается постоянной и соответствующими экспериментальными методами определяется влияние повышения концентрации ингибитора на начальную скорость реакции Го. В другой серии, наоборот, концентрация ингибитора поддерживается постоянной, но используются разные концентрации субстрата. На основе данных, полученных в опытах той и другой серии, строят графики в координатах 1/И [c.247]

Наиболее часто применяется график двойных обратных координат от который обычно называют графиком Лайнуи- [c.14]

Рис. 19. а—Зависимость константы Михаэлиса по кислороду от концентрации донора электронов ВНо (ферроцианнд) в двойных обратных координатах (условия, как в рис. 18) б — [c.64]

Транспортные процессы обычно рассматривают как подклассы реакций, катализируемых ферментами, поэтому здесь применимы принципы и методы изучения ферментативной кинетики. Например, график двойных обратных координат Лайнуивера — Бэрка, отражающий зависимость величины, обратной скорости транспорта, от величины, обратной концентрации растворенного вещества, часто представляют собой прямые линии, позволяющие вычислить значения Км (константы Михаэлиса) и Утах (максимальной скорости). Конкретный пример можно найти в работе Эймса [1]. Можно также построить кривые Эди—Хофсти, отражающие отношение скорости транспорта к скорости, деленной на концентрацию субстрата. Затруднения, возникающие при исследовании кинетики ферментов, встречаются и при изучении транспорта. [c.455]

Рис. 27. Определение параметров сродства лиганда к макромолекуле в двойных обратных координатах (а) и координатах Скэт-чарда (б) по экспериментальным данным (линия с кружочками), г, с — концентрации связанного и свободного лиганда (соответственно) К — константа связывания N — число участков связывания.

Рис. 2.6. График зависимости 1/и от 1/ (график Лайнуивера—Бэрка, или график двойных обратных координат).

До 1961 г. обсуждение относительных достоинств трех линейных графиков касалось в основном вопросов о том, насколько они удобны и как четко выявляют отклонения от уравнения Михаэлиса—Ментен. Пока обсуждение ограничивалось рассмотрением только этих вопросов, никаких серьезных доводов, позволяюпцих отдать предпочтение какому-либо линейному графику, фактически не существовало. Это положение убедительно подтверждается результатами обобщений, проведенных Диксоном и Уэббом (см. [78]), Совсем недавно Уилкинсон [149], с одной стороны, и Иоханес и Ламри [86], с другой, поставили вопросе статистическом разбросе данных для всех линейных анаморфоз уравнения Михаэлиса—Ментен . Полученные этими авторами результаты и соответствующие выводы детально рассмотрены в гл.10, однако некоторые важные моменты стоит отметить здесь. Для определения параметров, строго говоря, вообще нецелесообразно использовать графики (линейные или любые другие). Для этой цели следует применять ЭВМ (см. гл. 10), а один из линейных графиков можно представлять далее только для иллюстраций. Иногда высказывается точка зрения, что, поскольку неудовлетворительными являются все три графика, имеет смысл использовать наиболее привычный из них — график двойных обратных координат. Однако это предложение противоречит принципу, гласящему, что задача правосудия состоит не только в том, чтобы добиться справедливости, но и в том, чтобы показать, каким путем оно этого добилось. Если результаты эксперимента представить в двойных обратных координатах и здесь же показать линию, полученную путем независимых (не дающих, очевидно, разброса) вычислений, то эта расчетная линия из-за больших отклонений ряда точек в области малых концентраций субстрата покажется проведенной некорректно. Аналогичная ситуация возникает и при использовании двух других линейных графиков, однако в этих случаях данному вопросу не придают особого значения. [c.47]

Из-за отсутствия подходящих букв греческого алфавита для обозначения истинных значений V и Ки использованы символы f" и 5Гм- Кроме того, вместо в, е т w применены символы Ь, d т и, а исходные символы сохранены для использования их в разд. 10.3.) Это простое изменение тотчас выявляет отрицательные стороны графика двойных обратных координат и других линейных анаморфоз уравнения Михазлиса— Ментен, рассмотренных в разд. 2.5 сначала исследователь с удивдением обнаруживает, что совершенно правильные алгебраические преобразования приводят к неверным результатам, и только потом осознает, что неверными являются не алгебраические преобразования, а исходная точка зрения. [c.244]

В этой главе мы до сих пор имели дело с простыми ошибками, т. е. считали, что все скорости имеют одну и ту же дисперсию. Рассмотрим теперь альтернативную гипотезу допустим, что ошибки измерения v являются относительными. График двойных обратных координат по-прежнему является наименее удовлетворительным, однако различие между ним и другими линейными анаморфозами уменьшается соответствующие веса для величины 1/у пропорциональны теперь у и меняются при изменении у от 0,167Fдо 0,667F только в 16 раз, в то время как соответствующие веса для величины s/v пропорциональны v /s и в том же интервале значений у изменяются в 6,25 раза. Какой бы линейный график ни применялся в этом случае, соответствуюнще веса должны быть рассчитаны из наблюдаемых значений скорости. Уточнение результата на основе использования расчетных значений скорости [31] представляет собой на деле отход от простого и точного решения к трудоемкой аппроксимации. [c.251]

Рис. 8.16. Г рафик Лайнуивера — Бэрка в двойных обратных координатах (зависимость 1/г от 1/[8]), используемый для

Справочник химика 21

Химия и химическая технология