Ротенон

Ротенон — 1 мМ раствор в перегнанном этаноле. [c.439]

Сукцинат калия — 1 М раствор, pH 7,4. Для митохондрий скелетной мышцы при использовании сукцината в среду инкубации добавляют ротенон в концентрации 2,5-10 М. [c.464]

Рассчитывают активности внутреннего (чувствительного к ротенону) и внешнего путей окисления НАДН в митохондриях. Полученные данные анализируют. [c.438]

ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ РОТЕНОНОМ [c.441]

Измерение активности ротенон-нечувствительной НАДН [c.412]

Ротенон — 1 мг/мл (готовят в перегнанном этаноле). [c.436]

Ротенон — 5- Ю-" М раствор (в этиловом спирте). [c.437]

Определение константы скорости активации фермента, блокированного ротеноном. В стеклянную пробирку, стоящую на льду, вносят [c.441]

Примечания. 1. При работе с ротеноном необходимо тщательно отмывать рН-электрод 50%-ным этиловым спиртом, а затем водой. [c.442]

Получают митохондрии печени крысы согласно описанию на с. 406. В кювету с постоянным перемещиванием, содержащую 3 мл среды инкубации, помещают К+ Чувствительный электрод и, установив перо самописца на середину шкалы, калибруют чувствительность прибора внесением 4—6 добавок раствора КС1 с точно известной концентрацией (по 20—30 мкМ). В другой пробе в среду инкубации вносят суспензию митохондрий (3—5 мг белка на 1 мл пробы), 5 мкМ ротенон и регистрируют в течение 1—2 мин концентрацию К+ во внешней среде. В пробу добавляют валиномицин (около 0,1 нмоль на 1 мг белка), измеряют концентрацию ионов К+ во внешней среде и рассчитывают скорость его диффузии в стационарном состоянии. Внесением 2,4-динитрофенола (100 мкМ) индуцируют выход ионов К+ во внешнюю среду. Содержание эндогенного К+ в митохондриях определяют добавлением к суспензии митохондрий в среде инкубации раствора детергента (тритон-Х-100) до конечной концентрации 0,1%- Изменения концентрации К+ в среде рассчитывают по калибровочной кривой. [c.444]

М ротенона, и содержимое хорошо размешивают. В кювету добавляют 0,2 мл суспензии митохондрий (2 мг белка) и после перемешивания измеряют оптическую плотность при 520 нм через 1, 2 и 3 мин после добавления митохондрий. [c.446]

Ротенон (деррис, туба, кубе, бар-баско) [c.339]

Ротенон — З-Ю-" М раствор в этиловом спирте. При использовании сукцината в качестве субстрата окисления все пробы [c.451]

Физические свойства нефтяных масел, такие как способность растворять воскообразный налет на поверхности листьев и телах насекомых, создают возможность для использования масел в качестве базовых компонентов более активных инсектофунгисидов [159]. Присадками могут служить многие вещества — от жирных кислот и мыл, облегчающих расныливание масла, до физиологически весьма активных соединений, таких как пиретрум, никотин, ротенон, ДДТ, тиоцианаты, метоксихлор, хлордан, линдан и т. д. [c.568]

В кювету рН-метра со средой, содержащей 10 мМ сукцинат и 5 мкМ ротенон, в которую погружены электроды, добавляют порцию митохондрий (3—4 мг белка) и регистрируют стационарную концентрацию ионов Н+. Через 1 мин (когда вызванные добавлением митохондрий изменения pH среды прекратятся) в кювету добавляют 20 мкМ Са + и регистрируют закисление среды до нового стационарного значения pH. После этого в кювету добавляют 1—2 раза 50— 100 мкМ НС1 или КОН для калибровки шкалы. Проводят серию ана- [c.454]

В первой серии экспериментов подбирают концентрацию разобщителя (ДНФ), вызывающую максимальную стимуляцию дыхания. Для этого промытые и подсушенные электроды полярографа погружают в кювету с 2 мл среды (см. выше), содержащую дополнительно 5 мМ сукцинат и 5 мкМ ротенон. Включают самописец и после установления постоянного по величине тока начинают реакцию добавлением мито- [c.465]

До 20-х годов нашего века для борьбы с вредными насекомыми применялись иренмуществегшо неорганические вещества — арсенатр , фториды, силнкофторнды, соединения серы н селена. Из органических соединений, обладающих инсектицидными свойствами, были известны только вещества растительного происхождения, напрнмер препараты табака (никотин) и дерриса (ротенон), а также экстракты пиретрума (пиретрин), которые будут рассмотрены в другом месте этой книги. [c.520]

Важнейшее ядовитое вещество корней дерриса, широко применяемых в качестве инсектицида, ротенон, согласно Ля Форжу и Бутенандту, имеет строение (I) наряду [c.964]

Кюветы спектрофотометра заполняют средой, содержащей фосфатный буфер (pH 7,4), 1 мМ K N, 1 мкМ ротенон, 1,5 мМ НАДН, 10—20 мкМ цитохром с. Устанавливают длину волны 550 нм (точно ). Для этого кювету помещают в кюветное отделение, устанавливают длину волны по шкале прибора на отметке 550 нм и добавляют к среде нейтрализованный (pH 7,4) раствор аскорбиновой кислоты (конечная концентрация — 5—10 мМ). Цитохром с немедленно восстанавливается, и раствор меняет цвет от красновато-оранжевого до ярко-розового. Устанавливают шкалу длин волн на 550 нм по максимальному поглощению раствора восстановленного цитохрома с, при дальнейшей работе установку длин волн не меняют. Реакцию начинают внесением препаратов в кювету, содержащую окисленный цитохром с, и регистрируют увеличение поглощения при 550 нм. Рассчитывают удельную активность препаратов в микроэлектронэквивалентах за 1 мин в расчете на 1 мг белка. Коэффициент миллимолярной экстинкции для цитохрома с Активность фермента, характерного для внешней мембраны, определяют по разнице скоростей реакций в присутствии и в отсутствие ротенона. [c.412]

В митохондриях некоторых тканей (печени, почки и др.) была обнаружена еще одна НАДН-оксидазная система, которая локализована в наружной мембране и, по-видимому, легко доступна для цитоплазматического НАДН. Этот так называемый внешний, нефосфорилирую-щий путь окисления НАДН включает в себя специфический флавопротеид — НАДН цитохром os-оксидоредуктазу и цитохром O5. Цитохром 5 является слегка аутоксидабельным гемопротеидом, а физиологическим акцептором электронов с цитохрома O5, по-видимому, служит цитохром с. В экспериментальных условиях активность этого пути окисления НАДН может быть измерена только после добавления цитохро-ма с, значительная часть которого вымывается из межмембранного пространства в процессе выделения митохондрий. В отличие от НАДН-оксидазной активности дыхательной цепи митохондрий внешний путь окисления НАДН нечувствителен к ротенону. [c.437]

В полярографическую кювету, содержащую 2 мл среды инкубации,, погружают электроды, вносят 50 мкл суспензии обработанных антимицином митохондрий, добавляют 5 мМ малат и 5 мМ глутамат и через 1—2 мин вносят 50 мкл густой (50—70 мг/мл) суспензии препарата Кейлина—Хартри. Внесение субмитохондриальных фрагментов практически не вызывает стимуляции поглощения кислорода. Реакцию инициируют добавлением 4 мкМ Qa (осуществляющего перенос элект ронов между митохондриями и субмитохондриальными фрагментами неспособными окислять малат). По ходу реакции добавляют 100 мкМ динитрофенол и регистрируют увеличение скорости поглощения кисло рода. В том случае, если стимуляция разобщителем не наблюдается рекомендуется вдвое понизить количество вносимого препарата Кей лина—Хартри и (или) уменьшить концентрацию вносимого Q i. Нов торяют измерение с другими гомологами убихинона Qi (3 мкМ) и Qe (3 мкМ). Убеждаются в полной чувствительности наблюдаемой убихинон-редуктазной активности (измеренной с различными гомологами убихинона) к ротенону. С этой целью в кювету по ходу реакции вносят 5 мкМ ротенон и наблюдают полное ингибирование реакции. [c.440]

Примечание. Следует тщательно отмывать электрод полярографа и кюветы 50%-ным спиртом, а затем много раз водой от ротенона, сильно сорбирующегося на оргстекле. [c.440]

НАДН убихинон-оксидоредуктазный комплекс дыхательной цепи митохондрий (комплекс I — см. с. 415) катализирует реакцию окисления НАДН эндогенным убихиноном. Активность НАДН убихинон-оксидоредуктазы специфически ингибируется такими веществами, как амитал, пиерицидин, реин и ротенон. Последний ингибитор наиболее широко применяется при изучении переноса электронов в дыхательной цепи и молекулярной организации комплекса I. Ротенон обладает сильно выраженными гидрофобными свойствами и способен помимо НАДН убихинон-оксидоредуктазы взаимодействовать с гидрофобными участками многих белков, в частности бычьего сывороточного альбумина, и фосфолипидными мембранами. [c.441]

Определение константы скорости инактивации фермента ротено-ном. Выделяют препарат Кейлина—Хартри, Кювету рН-метра (объ-<емом 4,5 мл) заполняют средой измерения активности (п. 2) и добавляют НАДН до конечной концентрации в кювете, равной 1 мМ. В кювету погружают отмытый рН-электрод, через 2—3 мин вносят 50 мкл суспензии Кейлина—Хартри ( — 25 мг/мл) и регистрируют изменение pH в ходе НАДН-оксидазной реакции. По ходу реакции в кювету вносят ротенон (0,1 мкМ) и наблюдают ингибирование ферментативной активности, связанное с образованием каталитически неактивного комплекса фермент-ротенон. Внося ингибитор в различных концентрациях (0,025 0,05 0,075 0,1 0, 5 мкМ), определяют зависимость скорости инактивации от концентрации ротенона и рассчитывают величину константы второго порядка скорости инактивации фермента ингибитором. [c.441]

Проба содержит смесь растворов 2,5 мл 0,006 М трис-НС1 (pH 7,2), 0,03 мл 5-10- М ротенона, 0,03 мл 0,01 М ЭДТА, 0,03 мл антимицина А (среда инкубации № 2) и 0,3 мл 0,6 М сукцината аммония. В течение 2 мин после добавления митохондрий регистрируют оптическую плотность, затем добавляют 2 мМ (NH4)2HP04 и регистрируют падение оптической плотности еще 3 мин. Аналогичным образом ставят пробу с 0,6 М раствором малата аммония. [c.448]

Среда инкубации для опыта 1 0,15 М сахароза, 75 мМ КС1, 10 мМ сукцинат, 3 мкМ ротенон, 10 мМ трис-НС1 и 0,5 мМ КН2РО4. Готовят несколько сред с различными значениями pH в диапазоне от 6,8 до 8,2 (6—7 точек). [c.458]

Среда инкубации для опыта 2 0,15 М сахароза, 75 мМ КС1, 10 мМ сукцинат, 3 мкМ ротенон, 10 мМ трис-НС1 и КН2РО4 в концентрациях от 5-10 S до 5-10 М (5—6 точек). Готовят две серии среды с двумя значениями pH, например 7,1 и 7,8. [c.458]

В первой части работы изучают влияние разобщителя на сукцинатоксидазную активность митохондрий. В кювету полярографа с 2 мл среды с 5 мкМ ротеноном после погружения в нее электродов и включения самописца добавляют 40—60 мкл суспензии митохондрий (4— 5 мг белка). Через 1—2 мин в кювету добавляют 5 мМ сукцинат и регистрируют дыхание митохондрий с постоянной скоростью на протяжении 1—2 мин. Добавляют 5 мкМ ДНФ и регистрируют дыхание до полного исчерпания кислорода в среде. В следующих пробах последовательно увеличивают концентрацию ДНФ до тех пор, пока дальнейшее увеличение ее не будет вызывать увеличения скорости дыхания. В прочносопряженных митохондриях насыщение сукцинатоксидазной активности обычно достигается в присутствии 50—100 мкМ ДНФ. Строят графическую зависимость скорости окисления сукцината в митохондриях от концентрации ДНФ (5—6 экспериментальных точек). [c.470]

Соед., подавляющие Д. (дыхат. яды), выключают энерго обеспечение организма и потому являются быстродействую щими ядами. Классич. дыхат. яды (цианиды, изоцианиды сульфиды, азиды, СО и NO) угнетают концевой фермент дыхат. цепи митохондрий цитохром-с-оксидазу). Эти же соед. угнетают транспорт Oj по организму, связываясь с гемоглобином. Др. важный класс дыхат. ядов - гидрофобные орг. в-ва, часто хиноидной природы, выступающие как антагонисты убихинона (замещенного 1,4-бензохинона), играющего ключевую роль во мн. стадиях переноса электронов по дыхат. цепи. Сильнейшие яды этого класса-токсич. антибиотики (ротенон, пирицидин, антимицин, миксотиа-зол), 2-гептил-4-гидроксихинолин-К-оксид их используют в исследованиях тканевого Д. Способность к умеренному подавлению убихинон-зависимых р-ций в дыхат. цепи свойственна мн. лек. ср-вам (напр., барбитуратам), фунгицидам и пестицидам. [c.125]

Химический энциклопедический словарь (1983) -- [ c.511 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.398 , c.399 , c.423 ]

Общая органическая химия Т.11 (1986) -- [ c.441 ]

Гетероциклические соединения Т.7 (1965) -- [ c.115 , c.117 , c.118 , c.120 , c.122 , c.124 , c.125 , c.128 , c.130 , c.131 , c.132 , c.142 , c.144 ]

Гетероциклические соединения, Том 7 (1961) -- [ c.115 , c.117 , c.118 , c.120 , c.122 , c.124 , c.125 , c.128 , c.130 , c.131 , c.132 , c.142 , c.144 ]

Микробиология Издание 4 (2003) -- [ c.363 ]

Пестициды химия, технология и применение (1987) -- [ c.532 ]

Большой энциклопедический словарь Химия изд.2 (1998) -- [ c.511 ]

Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами том 2 (1967) -- [ c.277 ]

Жидкостная колоночная хроматография том 3 (1978) -- [ c.3 , c.135 ]

Общая органическая химия Том 2 (1982) -- [ c.215 ]

Основания глобального анализа (1983) -- [ c.0 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.448 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.523 , c.548 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.242 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.351 , c.391 ]

Биохимия фенольных соединений (1968) -- [ c.82 ]

общая органическая химия Том 2 (1982) -- [ c.215 ]

Основные начала органической химии Том 2 1957 (1957) -- [ c.589 ]

Основные начала органической химии Том 2 1958 (1958) -- [ c.589 ]

Химия инсектисидов и фунгисидов (1948) -- [ c.10 , c.66 , c.99 , c.100 , c.101 , c.107 , c.108 , c.109 , c.110 , c.148 , c.262 ]

Химия органических лекарственных препаратов (1949) -- [ c.519 ]

Основы химической защиты растений (1960) -- [ c.132 ]

Химия красителей (1970) -- [ c.385 ]

Методы анализа пестицидов (1967) -- [ c.103 , c.339 ]

Пестициды и регуляторы роста растений (1995) -- [ c.417 ]

Справочник по пестицидам (1985) -- [ c.350 ]

Химические средства защиты растений (1980) -- [ c.190 ]

Химия и технология пестицидов (1974) -- [ c.626 ]

Пестициды (1987) -- [ c.532 ]

Химические средства защиты растений (1980) -- [ c.190 ]

Агрохимикаты в окружающей среде (1979) -- [ c.211 ]

Новые фосфорорганические инсектициды (1965) -- [ c.20 , c.21 ]

Жизнь зеленого растения (1983) -- [ c.465 ]

Транспорт электронов в биологических системах (1984) -- [ c.10 ]

Микробиология Изд.2 (1985) -- [ c.325 ]

Биоэнергетика Введение в хемиосмотическую теорию (1985) -- [ c.109 , c.117 ]

Структура и функции мембран (1988) -- [ c.20 , c.119 ]

Биохимия мембран Биоэнергетика Мембранные преобразователи энергии (1989) -- [ c.80 , c.81 , c.95 , c.102 , c.186 , c.187 , c.191 , c.203 , c.240 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.80 , c.81 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология