Денатурация плазмы крови

Недавно для фракционирования белков плазмы крови начали применять также соли тяжелых металлов, в частности соли цинка [35]. Осаждение белков большими количествами солей тяжелых металлов приводит к необратимой их денатурации, прибавление же небольших количеств солей вызывает обратимое связывание катионов белками (по всей вероятности, сульфгидрильными группами белка) с образованием осадков, из которых можно выделить нативный белок [35]. [c.177]

Как известно, молекулы белка построены из большого числа аминокислот. Поэтому при изучении структуры белка методом ИК-спектроскопии нельзя просто воспользоваться теми данными, которые были получены при исследовании полипептидов. В работе [137] изучали зависимость конформации от состава аминокислот для тех синтетических полипептидов, которые моделируют составные части белков. Было показано [1895, 1896], что при денатурировании дезоксирибонуклеиновых кислот в их спектрах исчезают полосы при 1645 и 1680 см и вместо них появляются полосы при 1660 и 1690 см- . Первые две полосы соответствуют регулярным водородным связям между звеньями пурина и пиримидина, которые придают прочность двойной спирали. Исследования проводили с использованием растворов в тяжелой воде. В работе [136] обсуждается необходимость спектроскопического изучения биополимеров, находящихся в Н2О и ВгО, поскольку эти жидкости являются их естественными растворителями. Там же рассмотрены соответствующие методики исследования. Изучены конформацион-ные изменения, происходящие при денатурации белков плазмы крови [1314, 1315J. Исследованы колебания пролинового кольца в пoли-L-пpoлинe [257, 259], который является составной частью многих белков. Был сделан вывод, что полосу при 1440 см можно использовать только для определения содержания остатков иминокислот в молекуле полипептида. [c.344]

Групповое разделение белков. Высаливание — разделение белков на фракции по их растворимости. Принцип метода заключается в дегидратации белков (обычно с помощью сернокислого аммония) при pH, близком к Р1. Различные белки выпадают в осадок при разных концентрациях соли. Это грубый метод разделения на группы. Например, глобулины выпадают в осадок при полунасыщении, а альбумины — при полном насыщении (НН4)2804. Избирательная денатурация — это выпадение в осадок при нагревании раствора до 50 °С или при подкислении среды до pH 5,0. Если выделяемый белок устойчив к нагреванию и изменению pH, то часть ненужных белков можно удалить таким простым способом. Органические растворители при низких температурах используются для щадящего группового разделения белков. По методу Кона белки плазмы крови фракционируют спиртом при температуре 3—5 °С альбумины — спирт 40%, pH 4,8, при 1-5 °С р, у-глобулины — спирт 25%, pH 6,9, при 1-5 °С а-глобулины — спирт 18%, pH 5,2, при 1-5 °С фибриноген — спирт 8%, pH 7,2, при 1-3 °С а2-глобулин — спирт 40 , pH 5,8, при 1—3 °С. Диализ — освобождение белковых растворов от низкомолекулярных соединений (например, от сернокислого аммония (NH4)2S04). Белки не проходят через полупроницаемую мембрану, а низкомолекулярные вещества проходят, что и позволяет очистить раствор белков от низкомолекулярных примесей. Получаем группу (смесь) белков, обладающих близкими физико-химически-ми свойствами. [c.50]

Прежде чем вводить химическое соединение в реакцию, необходимо подобрать концентрации, добавление которых не вызывало бы денатурацию сывороточных белков и тем самым не имитировало бы образования специфического преципитата. При подборе таких концентраций используют свежую сыворотку или плазму крови здоровых людей или больных из контрольной группы (с аллергозами другой этиологии), двукратные водные разведения гаптена и те же объемы обоих ингредиентов системы, что и при постановке самой реакции. Однако в отличие от основного опыта при подборе концентраций каждый раствор гаптена добавляют к новой порции сыворотки или плазмы. После установления максимальной концентрации, не вызывающей денатурации белков, готовят из нее восемь двукратных рабочих разведений гаптена, которые проверяют с новой порцией сыворотки или плазмы уже по схеме постановки реакции. Большее число рабочих растворов использовать не рекомендуется, так как конечная концентрация гаптена в системе после всех добавлений его не должна превышать концентрации исходного раствора, т. е. раствора, не вызывающего денатурации белков. В табл. 43 приведены примеры подбора концентраций для ряда химических аллергенов. [c.230]

Впервые ферментативное расщепление гликопротеипа плазмы в целях изучения его строения было использовано, по-видимому, Римингтоном [7]. Из крови лошади осаждением сульфатом аммония автор получал фракции альбуминов и глобулинов, подвергал их денатурации этанолом и обрабатывал трипсином в течение 4 недель. Полученный им углеводный остаток содержал 2-амино-2-дезоксиглюкозу и маннозу. Аналогичные результаты были получены Хьюиттом [135] при обработке серогликоида пепсином (КФ 3.4.4.1) и трипсином (КФ 3.4.4.4). [c.92]

Медь вместе с железом участвует в кроветворении при дефиците меди в организме нарущается обмен железа между плазмой крови и эритроцитами, что может привести к разрушению эритроцитов. Недостаток меди в организме приводит к тяжелым отклонениям в обмене веществ медная анемия, нарушение координации движений и др. В больших концентрациях растворимые соли меди (например, сульфат) очень токсичны, поскольку при попадании значительных количеств данных соединений в организм ионы меди(П) образуют нерастворимые хелаты с белковыми молекулами, что приводит к их денатурации. [c.193]

Белки различаются по своей устойчивости к денатурации. Открыв ампулы с кровью, которые хранились в стерильных условиях при комнатной температуре в течение 45 лет, Кейлин и Ванг нашли, что гемоглобин изменился незначительно, а многие ферменты остались вполне активными [183]. С другой стороны, повседневный опыт ферментолога говорит о том, что многие очищенные ферменты даже на холоду устойчивы в растворенном состоянии всего лишь в течение нескольких дней или часов. Для изучения полной активности, которую способен проявить данный фермент, иногда необходимо разбавлять нестабильный фермент раствором инертного белка, например альбумина плазмы [96, 184]. [c.40]

Белки могут образовать с липидами растворимые и нерастворимые комплексы. К первому типу принадлежат липопротеины крови и других жидкостей организма животных. Плазма крови, несмотря на то, что она представляет собой прозрачную жидкость, содержит 0,5—0,7% нерастворимых липидов. Значительная часть этих липидов не может быть извлечена из плазмы обычно применяющимся для этой цели эфиром или другими неполярными растворителями. Машбёф рассматривает это как доказательство того, что указанная часть липидов находится в соединении с белками, образуя комплексы, которые он назвал синапсами [3]. Эти липопротеиновые комплексы осаждаются при обычном высаливании сернокислым аммонием [4]. Некоторое количество липидов можно обнаружить также во фракциях белков, полученных электрофоретическим путем [5]. Комплексы липопротеинов расщепляются при комнатной температуре этиловым спиртом и ацетоном, причем большая часть липидов, отцепившихся от комплекса после обработки спиртом, может быть извлечена эфиром. Для того чтобы избежать денатурации белков, рекомендуется производить расщепление комплекса липопротеинов спиртом и эфиром при низких температурах [6] или путем повторного замораживания и оттаивания этих комплексов в присутствии эфира 7]. [c.228]

Альбумины растворимы в воде, выпадают в осадок при пасы-щенпи раствора сульфатом аммония, легко подвергаются тепловой денатурации. Эти белки встречаются как у животных, так и в расте-]шях, например альбумин яйца, альбумин плазмы крови, лакталь-бумин молока, растительные альбумины. [c.24]

Мочевая система в связи с большой ролью в выведении ЛС из организма также часто подвержена их побочным действиям. В интерстиции и лимфатических пространствах почек концентрация многих ЛС превышает их содержание в плазме крови. Интенсивное кровообращение и участие почек в биотрансформации ЛС также создают условия для продолжительного контакта ЛС или его метаболитов с тканями почек. Нередко причиной поражения нефрона бывает нарушенный иммунный ответ (замедленный тип), что приводит к денатурации белковых структур нефрона, главным образом базальной мембраны. Ряд ЛС (аминогликозиды, цефалоспорины, цитостатики) — активные ингибиторы сложных ферментных систем в почках, способные привести к тяжёлым необратимым расстройствам их функций. В некоторых случаях имеет значение отложение ЛС и их метаболитов в структурах нефрона (чаще всего в базальной мембране), мезангии и интерстиции, вокруг сосудов. Отложения ЛС в лоханках могут привести к лекарственной нефропатии, например сульфаниламидной почке. Лекарственные нефропатии наиболее часто наблюдают при использовании препаратов ртути, золота, сульфаниламидов, антибиотиков, НПВС. Клинические проявления большинства лекарственных нефропатий аналогичны таковым при некоторых заболеваниях почек. Наиболее часто нефропатии классифицируют по их преимущественной локализации в клубочках, канальцево-интерстициальных структурах. [c.42]

Фибриноген крови относят по классификации к глобулинам. Его специфической особенностью является легкая денатурация нагреванием, причем он свертывается. Для этой денатурации достаточна температура в 52—56°, т. е. значительно более низкая, нежели для двух других белковых веществ крови. Под действием фермента тромбина, находящегося в фэрмениых элементах коови и тканях организма, фибриноген прн вы<оде из организма сравнительно быстро (в несколько минут) свертывается и переходит в фибрин. Эго явление мы наблюдаем при поранениях нормальная кровь при выходе из раны образует сгусток и закупоривает рану. Действие фермента активируется кальциевыми солями и при отсутствии их не происходит. Самый механизм действия изучен недостаточно и является спорным, происходит ли свертывание фибриногена и переход его в фибрин путем каталитической ферментативной реакции или коллоидно-химической, взаимным осаждением коллоидов. Изоэлектрическая точка фибрнна находится при рН=7,2. При саертывании фибриногена pH плазмы сдвигается в кислую сторону. Фибрин способен поглощать значительные количества как кислоты, так и щелочи. При этом он сильно набухает, но не растворяется. [c.193]

Фибриноген растворен в кровяной плазме в концентрации всего 0,2—0,4%. Явление свертывания очень сходно с денатурацией при этом фибриноген — корпускулярный белок — превращается в фибрин — фибриллярный белок. Электроно-граммы кровяного сгустка показывают, что он состоит из волокон, образующих редкую решетку, занимающую весь первоначальный объем крови и включающую всю жидкость. При перемешивании стеклянной палочкой объем сгустка можно уменьшить примерно до 1 /100 объема свернувшейся крови. Некоторые признаки указывают на то, что в фибрине макромолекулы соединены электровалентными связями, существующими между кислыми и основными группами. Как фибриногеп, так и фибрин дают рентгенограммы типа винтов а. [c.444]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология