Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Электрод чувствительный к антителам рис

Рис. 153. Схема электрода, чувствительного к антителам [7]. Рис. 153. <a href="/info/525704">Схема электрода</a>, чувствительного к антителам [7].

    Принцип работы одного из типов анализатора заключается в следующем. Определяемые и меченные ферментом (каталазой или глюкозооксидазой) антигены конкурируют за центры связывания антител, иммобилизованных на мембране, окружающей кислородный электрод Кларка. После проведения иммунохимической реакции отмывают несвязавшиеся на мембране компоненты исследуемой смеси и вводят растворы субстратов фермента. Измеряемый ток на электроде пропорционален концентрации кислорода, поглощаемого (или выделяемого) в ферментативной реакции, осуществляемой связанным с антителами ферментным конъюгатом. Процедура регистрации иммобилизованных антител Позволяет использовать устройство многократно. Время анализа белковых антигенов (альбумин, инсулин) составляет 15 мин при чувствительности 5— [c.111]

    Моделью для многих приборов на основе описанных в этой главе реакций может служить рассматриваемое ниже устройство, в котором используется оптическое волокно диаметром 3,3 мм [12] (см. также тл. 30). В этом приборе, измеряющем концентрацию пероксида водорода в буферном растворе, пероксидазу иммобилизуют в прозрачном полиакриламидном геле и вводят люминол как в гель, так и в раствор. С помощью фотоумножителя, помещенного на другом конце волокна длиной 61 см, можно детектировать концентрации до 10 М. Указывается, что в отличие от других ферментных электродов нет необходимости в том, чтобы продукт ферментативной реакции диффундировал к поверхности электрода. Таким образом, время отклика прибора очень мало-около 4 с. При этом, однако, возникает проблема, связанная с тем, что сигнал лимитируется массопереносом. Использование световода простой формы позволяет сделать конструкцию приборов удобной и работоспособной [4]. Так что эта идея заслуживает внимания. При реализации такого подхода основные проблемы, вероятно, связаны с иммобилизацией фермента. В случае иммуносенсоров, конечно, возникают трудности, обуславливаемые крайне низкой скоростью установления равновесия при связывании лиганда с антителом. Тем не менее благодаря высокой чувствительности детектирования света и независимости от процессов на электроде дальнейшие исследования в этой области представляются перспективными. [c.500]

    Электроды такого типа использовали в аналитических целях, однако возможности создания селективных и чувствительных электродов почти не изучены. Область применения ХМЭ довольно широка, от определения очень низких концентраций катионов [159а], до обнаружения таких биологических веществ, как антигены и антитела [1596]. [c.191]


    Недавно описана методика быстрого определения ЬСО с помощью двухсайтового иммуноферментного анализа и иммобилизованных на электроде антител [26]. Активность глюкозооксидазы, связанной с вторыми антителами, определяли электрохимиче Ски с помощью медиатора переноса электронов (диметиламинометид-ферроцена), не прибегая к стадии отдельной инкубации. Средняя чувствительность ЬСО была равна 9 м.ед./л. [c.215]

    Ферментативную активность измеряли амперометрическим определением скорости окисления NADH на платиновом электроде. Возможности методики были продемонстрированы на примере модельной системы лидокаин-антитела к лидокаину, калибровочная кривая которой получена вплоть до ианограммовых количеств антител. Абсолютная чувствительность анализа зависит от начального количества конъюгата антиген-фермент. Показано, что возможное загрязнение платинового электрода, обусловленное адсорбцией белков, и перекрестные реакции антител практически не влияют на результат анализа. [c.217]

    При смешивании липосом с антителами и комплементом высвобождается заключенная в липосомы пероксидаза хрена, активность которой измеряют при помощи кислородного электрода. Свободный теофиллин, содержащийся в образцах, мешает связыванию антител с липосомами и, таким образом, снижает литическую активность системы комплемента. В результате уменьшается скорость расходования кислорода. Это позволяег построить калибровочную кривую для надежного определения свободного лекарственного препарата в интервале 4—40 нМ. (рис. 9-2). Важно, что высокая чувствительность достигается, при использовании дешевой электродной системы детектирования. Столь же обнадеживающие результаты были получены при анализе тироксина и IgG в сыворотке спектрофотометрическим методом на основе комплемента (Braman et al., 1984), Использованные липосомы были покрыты специфическими антигенами и содержали щелочную фосфатазу. Авторы показали, что результаты определения тироксина и IgG этим методом довольно-хорошо коррелируют с результатами радиоиммунологического-анализа. По-видимому, фермент, активность которого демаскируется комплементом, остается в данном случае внутри липосом, но они становятся проницаемыми для субстрата. [c.125]

    Различные комбинации мембран на основе антител и ферментных электродов могут привести к созданию новых автоматизированных сенсоров, чувствительных к антигенам. Такие биосенсоры, возможно сопряженные с сенсорами ферментов печени, позволяют обеспечить быстрое и надежное наблюдение за кровеснабжением. На рис. 1.6 показан иммуносенсор на основе измерения потребления кислорода в присутствии глюкозооксидазы и глюкозы. Таким образом определяют содержание антител поверхностного антигена вируса гепатита В. Описаны и другие электроферментные методы для иммунологических исследований, и это направление, видимо, будет интенсивно развиваться (гл. 14). [c.18]

    В описанном Хайнеманом и др. [8] методе гомогенного иммуноанализа антиген эстриол метят ацетатом ртути и проводят его конкурентное связывание с антителом. Отделения свободного эстриола от связанного не требуется, поскольку в используемом диапазоне потенциалов эстриол неэлектроактивен. Более того, связанный с антителом меченый антиген восстанавливается при более отрицательном потенциале, чем свободный. Меченный ртутью эстриол восстанавливается при — 300 мВ (отн. н. к. э.) чтобы избежать мешающего влияния кислорода, пробы необходимо тщательно дегазировать. В противном случае при низких концентрациях антигена чувствительность определения снизится. В следующей работе группы Хайнемана [16] с эстриолом как модельной системой электроактивность эстриола изменяли нитрованием. При нитровании эстриола в положения 2 и 4 он становится электроактивным и характеризуется волнами восстановления при — 422 и — 481 мВ относительно хлоридсеребряного электрода сравнения. Это соединение авторы и использовали в гомогенном иммуно- [c.60]

    В работе [17] изучали аналогичную систему с электродом из титановой проволоки, на котором иммобилизовали хорионовый гонадотропин человека (ЬСО) или антитело к нему. В этом случае также обнаружены небольшие (< 5 мВ) изменения потенциала при добавлении соответствующего антитела либо антигена. Таким образом, при прямом измерении разности потенциалов между рабочим электродом и электродом сравнения чувствительность анализа намного ниже, чем в случае амперометрического иммуноанализа с ферментными метками. К аналогичному выводу пришли также авторы [2], исследуя эффективность различных иммуноаналитических методов определения сывороточного альбумина человека. Эти авторы использовали сходные мембраны, содержащие и не содержащие антитела к сывороточному альбумину, и нашли, что обе мембраны, как и ожидалось, обладают одинаковой избирательностью. Использование же амперометрического иммуноферментного анализа обеспечило значительно более высокую чувствительность, что имеет первостепенное значение в иммуноанализе. [c.61]


    Антигены и антитела. До сих пор не описано каких-либо серийных биосенсорных систем для определения антигенов и антител. В разработанных недавно ферментных иммуносенсорах измеряют активность ферментов-маркеров, связанных с определенным количеством антигена. Содержащий маркер антиген и немеченый определяемый антиген конкурируют между собой за связывание с определенными сайтами антител на мембране, покрывающей электрод. Неизвестная концентрация немеченого антигена обратно пропорциональна измеряемой электродом активности фермента-маркера. Однако в настоящее время чувствительность этого метода низка по [c.274]

    Представляет интерес сенсор [40], основанный на принципе конкуренции глюкозы и меченного флуоресцеином полидекстрана за связывание с белком конканавалином А, иммобилизованным на внутренней поверхности полой диализной трубки (гл. 32). Конструкция этого аффинного сенсора включает оптическое волокно, вставленное в диализную трубку, что позволяет непосредственно определять несвязанный меченый декстран. Преимуществом данного сенсора по сравнению с глюкозооксидазными сенсорами является то, что его сигнал определяется конкурентным равновесием между глюкозой и формирующим сигнал лигандом. Поэтому кинетика ферментативных реакций и загрязнение электрода не влияет на величину сигнала. Оптимальной избирательности и чувствительности такого сенсора можно достичь подбором соответствующих связывающего белка и конкурентного лиганда например, можно было бы использовать специфические антитела. При использовании сенсора in vivo его недостатками являются все еще ограниченная стабильность и относительно большое время отклика. [c.326]

    Опубликовано несколько сообщений об иммунохимических электродах с толстыми полимерными мембранами. Так. Аизава и другие [37] описали иммуноэлектрод, чувствительный к антителам против возбудителей сифилиса мембрана этого электрода состояла из ПВХ, холестерина, кардиолипина и фосфатидилхолина. Можно было предполагать, что не содержащая ионофоров и поэтому неспособная индуцировать ионный поток через границу раздела полимерная мембрана обеспечит идеальную поляризацию границы раздела, в то время как электропроводность системы в целом будет достаточно высокой для измерений. [c.416]


Смотреть страницы где упоминается термин Электрод чувствительный к антителам рис: [c.62]    [c.318]    [c.19]    [c.19]    [c.207]    [c.145]   
Новые методы имуноанализа (1991) -- [ c.0 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Антитела



© 2025 chem21.info Реклама на сайте