Электрофорез обнаружение изменений

Наличие изоферментов может быть обусловлено также генетическими вариациями в гетерозиготах. Так, если генетически детерминированный вариант определенного белка несет на один положительный или отрицательный заряд больше (или меньше), чем стандартный фермент, то при электрофорезе соответствующей белковой фракции у гете-розигот будет обнаружен новый изофермент. Следует отметить, что электрофоретический метод, часто используемый для выявления изоферментов, не позволяет обнаружить генетические варианты, в которых замещения аминокислот не приводят к изменению заряда молекулы. [c.68]

В качестве прямых методов обнаружения пептидов в элюатах применяют колориметрию и спектрофотометрию. При работе с летучими буферами аликвотную часть можно упарить, а затем анализировать методами бумажной и тонкослойной хроматографии или электрофореза. Этот прием требует много времени, но зато дает полезную информацию о составе полученных фракций. В принципе анализ можно вести, наблюдая изменение какого-либо физического параметра, например коэффициента преломления. Действительно, дифференциальные рефрактометры находят применение для разделения некоторых классов веществ, однако для обнаружения пептидов эти приборы обладают недостаточной чувствительностью. [c.390]

Полимераза дезоксирибонуклеиновой кислоты Е. oli имеет молекулярный вес 109 000 и состоит, вероятно, только из одной полипептидной цепи [59]. Это заключение основано на следующих фактах а) наблюдается отсутствие изменения молекулярного веса после разворачивания полипептидной цепи в растворе 6М гуанидингидрохлорида с 0,ЗМ -меркаптоэтанолом б) обнаружен только один N-концевой остаток метионина в) в присутствии денатурирующих агентов обнаружена только одна зона при электрофорезе в полиакриламидном геле. Насколько нам известно, еще не найден какой-либо другой фермент или белок, имеющий одну-единственную полипептидную цепь с молекулярным весом выше 100 000. Однако молекулы ферментов, состоящие из нескольких полипептидных цепей более высокого молекулярного веса, все же существуют (например, -галактозидаза Е. oli и миозин [60]). [c.396]

Здесь для сравнения приведены две другие аномальные формы гемоглобина, С и О.) Можно видеть, что гемоглобин 5 отличается от гемоглобина А лишь тем, что в одной из цепей один из остатков глутаминовой кислоты замещен в нем на валин. Благодаря этому замещению возникает различие в один заряд на одну половину молекулы. Почему это различие приводит к столь большому различию растворимостей, наблюдаемому в эксперименте, пока не ясно. В гемоглобине С тот же остаток глутаминовой кислоты замещен положительно заряженным остатком лизина. Таким образом, в трипсиновом гидролизате НЬС имеется пептид, обладающий противоположным зарядом по сравнению с соответствующим пептидом в гидролизате НЬА. Гены, определяющие гемоглобины А, 5 и С, аллельны между собой. Что касается гемоглобина О, то генетики установили, что он неаллелен с остальными тремя. Интересно, что в НЬО замещен аминокислотный остаток, соседний с тем, который замещается в гемоглобинах 5 и С. С помощью электрофореза, чувствительного в первую очередь к различиям в зарядах, был обнаружен также ряд других аномальных гемоглобинов. Детально описать ЭТИ различия можно будет лишь после того, как будет установлена последовательность аминокислот в каждом из исследуемых гемоглобинов. Замещение одной аминокислоты на другую может и не привести к изменению функции гемоглобина, т. е. иметь лишь генетическое, а не физиологическое значение. По-видимому, в случае НЬО дело обстоит именно так. [c.224]

Полиакриламидный гель наименее химически активен. Его> слабое сродство к красителям позволяет осуществлять быстрое обнаружение биополимеров, главным образом белков, нуклеиновых кислот и продуктов их деградации, с помощью окрашивания. Прозрачный полиакриламидный гель обладает хорошими механическими свойствами, допускающими изменение концентрации полиакриламида в самых широких пределах. Электроос-мотические эффекты в этом геле очень малы. Условия аналитических и препаративных разделений на полиакриламидном геле путем зонного электрофореза в гомогенных и дискретных системах буферных растворов [48, 77], а также изотахофореза и изо-электрического фракционирования хорошо изучены. [c.299]

Хотя взаимодействия химически синтезированных полиадениловой н полиуридиловой кислот не наблюдали, частичное взаимодействие иолицитидиловой с полигуаниловой кислотой (обе со средней длиной примерно 10 нуклеотидов) было показано с помощью противоточного распределения, а также электрофореза на бумаге гомополимеров и их смеси (22J. Это взаимодействие (сопровождаемое небольшим уменьшением ультрафиолетового поглощения), ио-видимому, сходно с тем, которое наблюдается у высокомолекулярных ферментативно синтезированных полимеров 164]. Кроме того, обнаруженное затем ограниченное вращение вокруг межнуклеотидных связей в олигонуклеотидах также свидетельствует о том, что водородные связи между остатками гуанина и цитозина более прочные, чем между аденином и урацилом. Эти синтетические полимеры содержали как 2 — 5 -, так и 3 — 5 -связи, и трудно было ожидать их полного взаимодействия даже в случае исиользования препаратов с более длиииыми цепями, так как изменение межплоскостного взаимодействия могло бы значительно понизить эффективность образования водородных связей . Последующие работы [c.533]

Уим и Рейб [254] прибегли к тонкослойному электрофорезу вторыми. Они провели разделение на слое агарового геля толщиной 2 мм, нанесенном на стеклянную подложку. Уим [255], Боур [256, 257] и Ремси [258] рассмотрели преимущества тонкослойного электрофореза по сравнению с обычными методами и пришли к следующим выводам 1) в тонкослойном электрофорезе допустима более эффективная система охлаждения, что позволяет уменьшить температурные эффекты 2) чувствительность обнаружения некоторых соединений в тонкослойном электрофорезе выше, чем в колоночном 3) отпадает необходимость по окончании электрофореза делать срезы геля. В работах Ковальчука [259—268] рассматриваются различные факторы (pH, температура, концентрация), которые могут меняться в процессе электрофореза и тем самым влиять на ход процесса, и обсуждаются способы уменьшения этих изменений. [c.164]

Постоянную скорость элюирования задают с помощью перистальтического насоса. Элюат, собираемый на фракционном коллекторе, анализируют в потоке или выборочно по фракциям на содержание белка, для чего обычно регистрируют изменение оптической плотности при 280 нм. Другие методы детектирования используют при отсутствии в белке хромофоров (остатков триптофана и тирозина), при работе иа микроуровне или при слишком высоком поглощении при 280 нм, например благодаря присутствию кофактора. В этих случаях можно определять оптическую плотность при 220 им, интенсивность флуоресценции или радиоактивность (при работе с мечеными белками) [14, 161] наконец, при анализе белковых фракций можно использовать химическую модификацию (разд. 1.4.5.1). Например, определенные объемы (аликвотные части) отдельных фракций можно подвергнуть щелочному гидролизу и последующему анализу по реакции с нингидрином. Для обнаружения белков можно использовать реакцию Лоури или реакцию связывания кра-снтеля. Последний метод вполне можно рекомендовать как наиболее простой и чувствительный, причем этому определению не мешает присутствие химических реагентов. Кроме того, состав фракций можно определять с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.23]

Были выявлены пять клонов, в которых степень устойчивости к колхицину варьировала от 3 до 180 раз. Плазматические мембраны метили метаболически радиоактивным глюкозамином полностью или только их поверхность с помощью галактозоксидазы — В Н4. Выделяли их из лекарственно чувствительных клеток и сравнивали белковый состав с помощью электрофореза в ДНС-полиакриламидном геле. Гликопротеид с высокой молекулярной массой (165—170 кД) был обнаружен в мембранах лекарственно устойчивых клеток, но отсутствовал в мембранах чувствительных к препаратам клеток. Количество этого белка, именуемого р-гликопротеидом, коррелирует со степенью лекарственной устойчивости в некоторых, но не всех клонах. р-Гликопротеид может составлять не более чем 4 % общего белка плазматической мембраны и действует, как предполагается, путем изменения текучести окружающего его липидного домена [c.103]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология