Белки растворы, изменения молекулярного веса

Хотя измерения вязкости белковых растворов не дают непосредственно знаний размера и формы макромолекулы, этот метод является одним из простейших приемов изучения молекулярных параметров. По результатам измерения вязкости растворов эллипсоидальных и стержневых молекул оказывается возможным вычислить отношение длины молекул к их толщине, а для фибриллярных белков определить и их абсолютные размеры. С другой стороны, вязкость разбавленных растворов белка является функцией их молекулярного веса. Правда, определить молекулярный вес по одним лишь данным о вязкости нельзя. Однако можно установить прямое соответствие между молекулярным весом, определенным другими методами, и вязкостью. Наконец, измерения вязкости особенно наглядно показывают изменения в молекулярной структуре, происходящие при денатурации белковых молекул, их агрегации или разъединении на субъединицы. [c.134]

Осмотический метод. Применение осмотического метода наталкивается на ту трудность, что белки, будучи амфотерными ионами, существуют в кислом растворе в виде катионов, а в щелочном растворе —в виде анионов. В кислом растворе присутствуют также неорганические анионы (например, С1 ), а в щелочном растворе — катионы (например, Na+). Эти ионы с небольшим молекулярным весом могут диффундировать через мембраны, не проницаемые для макроионов белка, увеличивая осмотическое давление по ту сторону мембраны, где находится белок (эффект Доннана), Вследствие этого осмотическое давление изменяется с изменением pH, так как число кислотных или основных групп белка тоже зависит от pH например, для 1,2%-ного раствора гемоглобина имеем [c.428]

Технический натуральный каучук при комнатной температуре подвергается относительно медленному окислению благодаря наличию в его составе естественных противостарителей. Прп экстрагировании каучука ацетоном нз каучука удаляются смолы, в том числе и естественные противостарители поэтому экстрагированный каучук, а также чистый каучук, лишенный примесей белков и смол, окисляются довольно легко, В начальной стадии окисления натуральный каучук становится липким, после присоединения 0,5—1,0% кислорода весь каучук размягчается. При дальнейшем окислении, когда каучук поглотит 12—25% кислорода, он становится твердым и хрупким и на его поверхности образуются трещины. Характерно, что поглощение небольших количеств кислорода вызывает резкие изменения свойств каучука понижается предел прочности при растяжении, средний молекулярный вес, вязкость его растворов, повышается пластичность и растворимость. При присоединении 0,5% кислорода предел прочности ири растяжении пленки каучука, приготовленной из латекса, понижается на 50%. [c.62]

Смит [243] детально изучили образование поперечных связей в двух белках — альбумине и кератине и привели данные о взаимодействии с этими белками 21 сшивающего агента, которые реагируют с аминогруппами белков. Растворимый белок альбумин обрабатывали сшивающим агентом в водном растворе, а осуществление сшивания определяли непосредственно в этом растворе, измеряя изменения молекулярного веса методом светорассеяния. В шерсти же, которая имеет дисульфидные поперечные связи естественного происхождения, образование новых сшивок можно было определять после первоначального разрушения дисульфидных мостиков. [c.427]

Как мы уже видели, облучение белков вызывает изменения их молекулярного веса. Фибриноген [58,70] при облучении образует небольшие фрагменты и большие агрегаты. Растворы сывороточного альбумина быка [61—63] образуют большие агрегаты без образования мелких фрагментов, что установлено седиментационным анализом в ультрацентрифуге. Облучение 0,07%-ного водного раствора рентгеновскими лучами дозой 75 000 р при 25° вызывает преципитацию белка. Однако при 0 преципитации не происходит [62]. Выпадение белка можно замедлить или устранить повышением концентрации белка или добавлением солей. Это явление сходно с тепловой денатурацией. [c.227]

В заключение необходимо отметить, что при интерпретации кривых титрования белков возникает ряд трудностей, зависящих от целого ряда обстоятельств. Так, белки содержат очень большое число ионогенных групп, связывающих и отдающих протоны. Кривые титрования показывают, что на 1 г белка требуется около 1 ммоля кислоты и 1 ммоля основания. При молекулярном весе белка порядка 100 000 на одну белковую молекулу приходится, следовательно, около 100 кислых и 100 основных, групп. Однако точно установить число тех или иных основных групп затруднительно, поскольку на кривой титрования имеется некоторое перекрывание в области pH между 8 и 12. Следовательно, pH 8,5 принимается в качестве конечной точки нейтрализации а-аминогрупп и имидазольных групп до некоторой степени произвольно. На характере кривой титрования сказывается и взаимодействие белков с другими ионами, кроме водородных. В частности, белки образуют прочные связи с такими двухвалентными ионами, как ионы кальция, магния, фосфата и карбоната, а также одновалентными ионами хлора. Как уже говорилось, такое взаимодействие приводит к сдвигу изоионной точки и изменению электрохимических свойств белка-за счет нейтрализации ионогенных групп, что приводит к искажению-кривой титрования. Сдвиг изоионной точки особенно велик тогда, когда в растворе находятся ионы фосфатов, которые наиболее прочно связываются основными группами. [c.163]

В последнее время внимание исследователей привлекают вопросы, связанные с кинетикой и механизмом органических реакций в присутствии поверхностноактивных веществ (ПАВ) [1]. Эти соединения, называемые также амфифильными, или детергентами, обычно содержат длинную углеводородную цепь — гидрофобную часть и полярную или ионную группу — гидрофильную часть. В разбавленных растворах они образуют агрегаты с высоким молекулярным весом, или мицеллы. Взаимодействие между субстратом реакции и специфически ориентированными гидрофобной и гидрофильной частями молекул в мицеллах является основной причиной поразительного ускорения или ингибирования поверхностноактивными веществами многих органических реакций. Во многих случаях в мицеллярном катализе обнаруживается отчетливая субстратная специфичность, а кинетика подчиняется уравнению Михаэлиса — Ментен (с насыщением по концентрации субстрата), и в этом отношении мицеллярный катализ во многом аналогичен ферментативному. Кинетическая аналогия мицеллярных катализаторов с ферментами и известное структурное сходство мицелл и белковых глобул явились существенным стимулом исследований в этой области. Мицеллы детергентов, значительно более простые в структурном отношении, чем белки, позволяют подойти к объяснению кинетических свойств ферментативных и мицеллярных систем. Изучая изменения физических свойств системы при образовании мицелл, можно оценить роль гидрофобных взаимодействий и, таким образом, моделировать гидрофобные взаимодействия в белках и липидах. [c.222]

Между белками и пептидами трудно провести четкую границу. Согласно одному из возможных способов классификации, белками называют только те соединения, молекулярный вес которых превышает 10 000. Классификация может также основываться на различиях в физических свойствах при учете, в частности, гидратации и конформационных отношений. Встречаюш,иеся в природе пептиды имеют сравнительно короткие подвижные цепи, и хотя они гидратируются в водных растворах, этот процесс обратим в то же время в белках содержатся очень длинные цепи, которые могут быть свернуты и изогнуты самыми различными способами. Молекулы воды при этом заполняют промежутки между цепями. При нагревании или под действием органических растворителей, солей и т. д. молекулы белка претерпевают более или менее необратимые изменения, называемые денатурацией при этом изменяются как конформационные отношения в цепях, так и степень гидратации. Результатом обычно оказывается понижение растворимости и потеря способности к кристаллизации. [c.71]

Физико-химические свойства белков в значительной степени определяются их высоким молекулярным весом, амфо-терностью аминокислот и лабильностью вторичной и третичной структур белка. Водородные связи, 1юддерживающие вторичную структуру белка, очень непрочны и легко разрушаются уже при нагревании раствора белка до 60—70° или при действии 8 М раствора мочевины. В результате наблюдается, так называемое, плавление вторичной структуры белка, ведущее к изменению таких физико-химических свойств раствора белка, как светорассеяние, вязкость и оптическое вращение. Белок с разрушенной вторичной структурой становится гидрофобным и имеет тенденцию выпадать в осадок. [c.54]

Молекулярный вес низкомолекулярных веществ можно определить по понижению температуры замерзания их растворов (методом криоскопии), по повышению его точки кипения или изменению плотности пара. Однако эти методы оказались непригодными для определения молекулярного веса белков, так как при нагревании большинство белков свертывается и выпадает в осадок. Определение молекулярного веса белков по понижению температуры замерзания их растворов хотя и воз.можно, но не дает достаточно точных результатов. Из сказанного ясно, что для определения молекулярного веса белков необходимо использовать другие методы. Первые определения молекулярного веса белков были основаны на химическом анализе л<елеза или серы. Классическим примером такого способа может служить определенно молекулярного веса гемоглобина по содержанию в нем железа. Первоначально полученная этим методом величина 16 500, представляющая минимальный молекулярный вес гемоглобина, долгое время рассматривалась как истинный молекулярный вес. Позднее другим путем было установлено, что истинный молекулярный вес гемоглобина в растворе составляет 66 ООО, из чего можно заключить, что каждая молекула гемоглобина в действительности состоит из четырех более мелких единиц, или, как сейчас называют, субъединиц. Молекулярный вес субъединиц и был определен по содержанию в них железа. [c.13]

Хорошо известно, что облучение ультрафиолетовым светом вызывает разнообразные химические и физические изменения белков. Так, например, в результате облучения изменяется вязкость растворов белков и их оптическое вращение, спектр поглощения белков в УФ-области, pH растворов и их поверхностное натяжение, электропроводность и молекулярный вес белков. К числу некоторых химических изменений, которые можно непосредственно наблюдать, относятся окисление и восстановление, образование аммиака, уменьшение количества сульфгидрильных групп, расщепление дисульфидных связей и разрыв водородных связей [253]. Особый интерес вызывает влияние ультрафиолетового облучения на вязкость растворов белков, па сшивание их и на образование потенциальных реакционноспособных центров, на которых может инициироваться привитая сополимеризация. [c.437]

Изучение интенсивности света, рассеянного растворами полимера или белка, дает важное средство для определения молекулярного веса и формы больших молекул. Часть света рассеивается даже совершенно чистой жидкостью, так как она неоднородна по молекулярной шкале, т. е. число молекул в очень малом элементе объема не является постоянной величиной из-за флюктуаций, которые происходят вследствие теплового движения молекул. Рассеяние света раствором больше из-за локальных различий в показателях преломления, обусловленных флюктуациями концентраций. Величина флюктуаций связана с осмотической работой, необходимой для того, чтобы вызвать изменение концентрации. Это позволило Эйнштейну установить соотношение между интенсивностью света, рассеянного раствором, осмотическим давлением раствора и изменением показателя преломления, вызванным растворенным веществом. [c.608]

Измерение светорассеяния не вносит никаких изменении в изучаемую систему и может быть выполнено очень быстро. Поэтому этот метод очень удобен для исследования хода реакций (таких, например, как димеризация белков или денатурация коллагена), сопровождающихся сильным изменением молекулярного веса. При подготовке к измерению светорассеяния наиболее трудоемким и важным этапом является очистка растворов, так как при определении молекулярного веса даже небольшие загрязнения высокомолекулярными веществами или пылью могут сильно исказить результат. В особенности это относится к методу Цимма, в котором применяется экстраполяция к нулевому углу. С целью очистки растворы подвергают ультрафильтрованию или центрифугированию. Концентрации определяют обычно после очистки раствора и измерения светорассеяния. Со светорассеянием приходится иметь дело как с побочным эффектом во многих оптических исследованиях, в частности при спек-трофотометрировании растворов макромолекул особенно сильно рассеяние в ультрафиолетовой области. С хорошим приближением можно считать, что уменьшение интенсивности падающего света при прохождении его через вещество обусловлено [c.161]

Еще на ранней стадии исследования белков было обнаружено, что при некоторых видах их химической модификации, не приводящих к изменениям молекулярного веса, происходит значительное увеличение вязкости растворов белков. Это явление объясняется тем, что полипептидная цепь немодифицирован-ного белка заснирализована и свернута, в результате чего она принимает глобулярную форму. Пример способа сворачивания приведен на рис. 40.5, на котором схематически представлена третичная структура миоглобина, имеющего протяженные спиральные участки, чередующиеся с неспиральной, нерегулярной вторичной структурой именно на этих участках происходит сворачивание и изгибание. Как было предсказано, а затем подтверждено рентгеноструктурным анализом, пролин вследствие своей циклической структуры образует пептидные связи с углами, исключающими спиральную структуру. Этот эффект схематически показан на рис. 40.1 (пролин помещен в правом верхнем углу). [c.380]

Основное преимущество модели диссохщи ующего белка состоит в том, что ее гораздо легче проверить экспериментально,, чем модели, рассмотренные ранее связывание лиганда в этом случае должно сопровождаться большим изменением молекулярного-веса белка и степень кооперативности должна зависеть от концентрации последнего. Эти особенности связывания лиганда характерны только для модели диссоциирующего белка, и их легко выявить экспериментально. Фриден и Колмэн [57] показали, например, что обратимая ассоциахщя позволяет полностью объяснить связывание различных нуклеотидов глутаматдегидрогеназой. Процессы диссоциации—ассоциации белковой молекулы могут давать определенный вклад в кооперативность и в случае гемоглобина, который способен диссоциировать на димеры в растворах с высокой концентрацией соли. Однако одной только диссоциацией объяснить, кооперативное связывание кислорода не удается, поскольку оно наблюдается во многих случаях, когда диссоциация отсутствует. При работе с любым белком необходимо всегда проверять, зависит ли наблюдаемая кооперативность от концентрации белка. В тех случаях, когда обнаружив ается изменение степени кооперативности белка, в качестве возможной причины следует рассматривать диссоциацию. [c.195]

Седиментационный метод с применением ультрацентри-фуги описан ранее (стр. 28—29) при рассмотрении методов определения размера коллоидных частиц. Определение молекулярного веса этим методом сводится а) либо к исследованию распределения концентрации раствора после установления седиментационного равновесия, для чего скорость вращения центрифуги устанавливают такую, чтобы развиваемая ею центробежная сила превышала силу тяжести примерно в 10 —10 раз б) либо к исследованию скорости седиментации, для чего центробежная сила должна превышать силу тяжести в 10 —10 раз. Изменение концентрации в установившемся равновесии определяют фотографически или по изменению показателя преломления. Расчет М производят по особым уравнениям, на которых мы не останавливаемся. Заметим лишь, что этот метод является наиболее всесторонним, так как, помимо УИ, дает возможность определять также и степень полидисперсности исследуемого вещества и судить о форме макромолекул. Метод нашел широкое применение при исследовании белков, полистирола, целлюлозы и других веществ. [c.163]

Реакции разрыва и сшивания и обусловленные ими изменения размеров и формы молекул отражаются на физических свойствах растворов облученных белков. При агрегации фибриногена [58, 70] и сывороточного альбумина быка [62, 63] обычно цроисходит увеличение вязкости растворов. Вязкость растворов овальбумина возрастает, если облучение проводится при изо-электрической точке или при низких pH, но уменьшается при высоких pH [75]. Мы видели, что уменьшение вязкости может сопутствовать увеличению молекулярного веса при образовании разветвленных структур поэтому результаты, полученные при высоких pH, не обязательно отражают деградацию. [c.228]

Основными характеристиками белка служат аминокислотный состав и молекулярный вес. Надежное и достаточно точное определение молекулярного веса макромолекул — довольно сложная задача. Методы определения молекулярного веса, обычно используемые для небольших молеку,л, в частности эбулиоскоиический (повышение точки кипения) и криоскопиче-ский (понижепие точки замерзания), так ке как и метод, оспованный на изменении давления пара растворителя над раствором, малопригодны или даже вовсе не пригодны для макромолекул из-за очень большой величины этих последних, а также из-за их неустойчивости. Нанример, для того чтобы точка замерзания водного раствора белка с молекулярным весом 10 ООО [c.59]

Два важных вопроса были выяснены при изучении равновесия мономер — тетрамер. Первый касается каталитической активности субъединиц. Фриден тш,ательно изучил условия образования тетрамера в зависимости от концентрации белка и убедился, что в очень разбавленных растворах, в которых глутаматдегидрогеназа проявляет ферментативную активность, фермент существует исключительно в форме субъединиц с молекулярным весом 300 ООО. Отсюда прямо следует вывод о том, что ферментативной активностью обладают именно эти субъединицы с молекулярным весом 300 ООО. Более мелкие субъединицы с молекулярным весом 40 ООО лишены ферментативной активности. Второй вопрос касается характера действия восстановленного НАДФ или, например, гуаниловой кислоты — соединений, препятствующих ассоциации крупных субъединиц. Как по1 азали исследования, выполненные также в лаборатории Фридена, эти вещества соединяются с субъединицами и, по-видимому, вызывают в них какие-то конформационные изменения, препятствующие ассоциации. [c.117]

Согласно опыту, накопленному рядом исследователей, на колонках с фосфатом кальция при ступенчатом элюировании получают лучшие результаты, чем при плавном изменении концентрации элюирующего раствора (градиентное элюирование). Причина состоит в том, что в системах этого рода большую роль играет вытеснение одного белка другим. В самом деле, вместо элюирования с успехом можно применить метод вытеснения. На фосфате кальция можно хроматографировать белки с молекулярным весом в пределах от 10 ООО до нескольких миллионов. Соединения, имеющие низкий молекулярный вес на фосфате кальция, не адсорбируются. [c.224]

Действительно, было обнаружено, что при действии Вас. зиЬаНз на яичный альбумин форма кристаллов, электрофоретические свойства и молекулярный вес этого белка значительно изменяются [26]. Было установлено, что при этом от яичного альбумина отщепляется небольшое количество азотистых веществ, в результате чего получается новый, родственный исходному белок, так называемый плакальбумин. Аналогичные изменения в свойствах альбумина наблюдаются и при старении его раствора [27]. [c.16]

В некоторых случаях денатурация сопровождается образованием больших белковых агрегатов, в других же, наоборот, образуются мелкие молекулы. Осмометрические определения, проведенные Бёрком [153], показали, что денатурация гемоглобина, казеина и эдестина концентрированнымк растворами мочевины ведет к дезагрегации молекул этих белков. Молекулярный вес образующихся продуктов равен соответственно 34 300, 33 600 и 49 500, тогда как молекулярный вес нативного гемоглобина составляет 68 000, а нативного эдестина — 212 000. Сывороточный альбумин, сывороточный глобулин и яичный альбумин обнаруживают один и тот же молекулярный вес в водных растворах и в концентрированных растворах мочевины. С другой стороны, при денатурации яичного альбумина кислотами, щелочами или нагреванием образуются агрегаты, содержащие от 5 до 20 молекул [154]. При небольших сдвигах pH или изменении концентрации солей в растворе, а также при действии ультразвука молекула гемоцианина делится пополам или на восемь частей [155, 156]. Подобным же образом расщепляются пополам при образовании мономолекулярных пленок на поверхности солевых растворов молекулы лактоглобулина с молекулярным весом 35 ООО и молекулы инсулина [157]. Дезагрегация молекул инсулина может быть предотвращена солями меди [158]. [c.150]

Существуют два метода контроля концентрации раствора на разных расстояниях от оси вращения. В одном из них используют изменения показателя преломления в зависимости от изменения концентрации. В другом методе концентрацию определяют по оптической плотности растворов. Если изучаются растворы белков, то оптическую плотность,определяют в ультрафиолетовой области кюветы изготовляют из кварца. Чтобы предотвратить возникновение в кюветах конвекционных токов, центрифугу снабжают специальным холодильным устройством. Помимо аналитических целей (определение молекулярных весов), ультрацентрифуги применяют в препаративной работе для фракционирования веществ с различным молекулярным весом. [c.47]

Метод исследования, основанный на измеренип повышения температуры кипения раствора, называется эбулиоскопи-ческим методом. Так же как и криоскопический метод, он применяется для определения молекулярных весов растворенных веществ. Эбулиосконическим методом можно пользоваться только в том случае, когда растворенное вещество нелетуче и когда растворенное вещество и растворитель не разлагаются при температуре кипения раствора. Что касается органических веществ биологического происхождения, то многие из них при температуре кипения претерпевают существенные изменения так, например, белки при нагревании свертываются. Указанные обстоятельства ограничивают область применения эбулиоскопического метода. [c.23]

Молекулярный вес белковых тел чрезвычайно лабилен он легко изменяется при изменении состояния белка например, изменение величины pH, концентрации соли или белка в растворе приводит к диссоциации или аггре-гацни (ассоциации) частиц белковых вен1,еств (обычук в простых кратных отношениях). [c.311]

К ВМС относятся многие вещества, имеющие важное народнохозяйственное и биологическое значение. Сюда входят почти все синтетические волокна, пластмассы, каучуки, а также почти все материалы животного и растительного происхождения. Синтетические полимеры получаются методами полимеризации и поликонденсации. Характерной особенностью ВМС является наличие длинных цепных молекул, образованных из многих звеньев одинакового или различного химического строения с молекулярным весом от нескольких тысяч до миллионов. Молекулы могут иметь линейную форму (полиэтилен, целлюлоза), разветвленную (крахмал) или спиральную форму (белки, нуклеиновые кислоты). Вдоль цепи атомы связаны ковалентными связями, а между цепями возникают межмолекулярные силы взаимодействия типа Вандерваальсовых сил, которые действуют в обычных жидкостях. Цепи могут быть связаны поперечными химическими связями (вулканизованный каучук) и тогда полимеры имеют строение пространственной сетки. Свойства полимера зависят от длины цепи, природы атомов, входящих в состав молекулы, распределения атомов в цепи, взаимодействия молекулы с окружающей средой, с соседними молекулами полимера или с молекулами жидкости в растворе. Звенья молекулярной цепи ВМС обладают способностью к ограниченному взаимному вращению вокруг валентных связей, это приводит к гибкости цепи и возможности изменения ее конфигурации. Одну из основных групп ВМС составляют каучукоподобные вещества или эластомеры, способные к большим обратимым (высокоэластическим) деформациям. Все они содержат длинные цепные молекулы, отличающиеся высокой гибкостью. Если [c.284]

Как показывает само название, основным признаком высокомолекулярных соединений является их высокий молекулярный вес, т. е. большой размер их молекул. Увеличение молекулы (количественное изменение), начиная с некоторого молекулярного веса, характерного для каждого полимера, приводит к образованию веществ, из которых можно получить материалы, обладающие новыми качествами, не присущими материалам, полученным из веществ низкого молекулярного веса. Так, из низкомолекулярных веществ нельзя получить высокопрочные нити и пленки, высокоэластичные материалы, высоковязкие растворы, студни, в то время как высокомолекулярные вещества служат основным сырьем для получения такого рода материалов. Величина моле1кулярного веса, начиная с которой мы переходим к новому классу веществ, зависит от природы вещества, но во всяком случае она должна быть порядка 10 000—15 000 и выше. Молекулярные веса природных высокомолекулярных соединений (натуральный каучук, целлюлоза, белки) примерно равны 500 000—700 ООО. [c.9]

По изменению вязкости растворов и седиментационных характеристик растворенных макромолекул при ультрацентрифугировании, а также пользуясь другими физическими методами определения молекулярных весов белка в растворе, можно наблюдать за протеканием реакций образования и расш епления поперечных связей на разных стадиях таких процессов. [c.398]

Высокомолекулярные соединения в поверхностных слоях ведут себя по-разному в зависимости от ряда факторов и, в частности, от числа полярных групп в молекуле. Молекулы белка, содержащие большое число полярных групп могут развертываться на поверхности воды, образуя слой в одну пептидную цепочку если слой белка сжат, то обнаруживаются признаки ориентации — боковые цепи белка направлены при этом почти вертикально (Е. Мишук и Ф. Эйрих). Ферментный белок—трипсин, растекаясь по поверхности раствора сульфата аммония, образует димерные молекулы. Изучение поведения монослоев позволило вычислить площади, занимаемые в слое молекулами белков и молекулярные веса белков. Значительное влияние поверхностный слой оказывает и на -кинетику реакций. Если реакция катализируется ионами водорода или гидроксила и активный комплекс содержи г ионы Н+ или ОН-, то изменение pH отражается на скорости. Было показано, что pH поверхностного слоя может заметно отличаться от pH внутри раствора и поэтому вещества в поверхностном слое вступают в каталитический процесс быстрее. Другим важным фактором, изменяющим скорость реакции в поверхностных слоях, является определенная геометрическая [c.209]

Большая часть литературы по этому вопросу посвящена нативным белкам. Эти соединения характеризуются наличием вторичной и третичной структуры, которая, за немногими исключениями, достаточно устойчива и компактна. Многие гликонротеины, сходные с простыми белками и содержащие относительно мало углеводов (такие, как овальбумин и у-гло-булин), с точки зрения исследования физико-химическими методами могут рассматриваться как белки. Исследование многих более распространенных гликонротеинов, в которых гетерополисахаридный компонент составляет большую, часто превалирующую часть молекулы, представляет некоторые трудности. Тем не менее для гликонротеинов этого типа без каких-либо предположений о форме молекулы и изменений в теоретической обработке был определен молекулярный вес, хотя на практике в растворах таких гликонротеинов, даже нри большом разбавлении, сохраняется значительное межмолекулярное взаимодействие, что делает экстраполяцию менее надежной. Серьезные трудности могут возникать также и при обычном определении нолидиснерсности таких гликопротеинов по молекулярным весам. Более того, необходимо также но возможности охарактеризовать распределение по молекулярным весам или коэффициентам седиментации. При использовании в качестве одного из первичных параметров величины характеристиче- [c.55]

Описанная методика пригодна только для монодисперсных веществ или полидисперсных при отсутствии заметных отклонений от идеальности растворов. Таким образом, она применима прежде всего для относительно компактных небольших белков и гликопротеинов, растворы которых часто близки к идеальным нри концентрациях ниже 0,5%. При наличии полидисперсности описанные методы дают М , а при несколько измененной обработке данных — Мг и (менее точно) более высокие степени усреднения [118, 155—157], что позволяет оценить степень полидисперспости. В тех случаях, когда образец является полидисперсным и одновременно дает существенно неидеальные растворы, методы седиментационного равновесия пе позволяют получать данные, пригодные для надежных оценок молекулярного веса. Эти вопросы обсуждаются в работе [158]. Для случаев сравнительно небольшого отклонения от идеальности описан метод обработки [159], позволяющий получить хорошее приближение Мц, при условии, что можно независимым путем установить среднее значение второго вириального коэффициента. [c.66]

Как и следовало ожидать, для диссоциирующих ферментов молекулярный вес активно работающей формы зависел от количества взятого на анализ белка. Так, при низких концентрациях фермента (<12 мкг/мл) фосфофруктокиназа (ФФК) из мышц кролика представлена в основном мономером при высоких кон-, центрациях фермента активно работающей формой фермента становится тетрамер [33]. При всех условиях (в отсутствие субстратов, при относительно низких концентрациях фермента и др.) работающая форма ФФК исходно присутствует в растворе и находится в равновесии с другими формами фермента. В присутствии субстрата ее доля увеличивается, и она становится преобладающей в системе [34, 40]. В этом отношении ФФК напоминает НАД-киназу из печени кр олика, препараты которой при анализе в отсутствие субстратов обнаруживают незначительное количество активной формы. Доля последней увеличивается при УЦ в пол- ной системе. Однако сходство это относительное и полной аналогии между поведением обоих ферментов провести нельзя уже потому, что олигомерное состояние активной формы ФФК может меняться при изменении концентрации исследуемого образца, тогда как гомогенные препараты НАД-киназы, как уже неоднократно подчеркивалось, утратили способность к такого рода переходам. Кроме того, мы ничего не знаем о существовании каталитически неактивных форм ФФК. [c.158]