ДНК лизис и связывание

Марганец нельзя было удалить из хлоропластов ни двукратным отмыванием сахарозой, ни путем лизиса в воде, ни также путем обмена на радиоактивный марганец. Последнее обстоятельство было использовано для заключения о прочном связывании марганца хлоропластами. [c.95]

Система комплемента действует сама по себе и совместно с антителами, защищая организм позвоночного от инфекции. Ранние компоненты комплемента представляют собой проферменты крови, которые последовательно активируются в усилительном каскаде реакции ограниченного протеолиза. Этот процесс может протекать либо по классическому пути, который запускается связыванием антител IgG или IgM с антигеном, либо по альтернативному пути, который может запускаться непосредственно клеточными стенками внедрившихся микроорганизмов. Наиболее важный компонент комплемента - белок ИСЗ, активируемый в результате протеолитического расщепления и затем ковалентно связывающийся с близлежащими мембранами. Микроорганизмы, несущие на своей поверхности активированный СЗ (СЗЬ), легко поглощаются и уничтожаются фагоцитирующими клетками. Кроме того, СЗЬ помогает инициировать сборку поздних компонентов, которые образуют большой комплекс мембранной атаки, вызывающий лизис внедряющихся микроорганизмов. При активации комплемента освобождается также ряд небольших растворимых пептидных фрагментов, привлекающих и активирующих нейтрофилы и стимулирующих секрецию гистамина тучными клетками это приводит к воспалительной реакции в местах активации комплемента. Протеолитический каскад комплемента остается привязанным к мембранам внедрившихся микроорганизмов, активировавших этот каскад, главным образом благодаря тому, что некоторые из компонентов, включая СЗЬ, остаются активными менее 0,1 миллисекунды и поэтому не могут распространить атаку на близлежащие собственные клетки организма. [c.260]

Во многих случаях концентрация гормона, при которой он занимает (оккупирует) рецепторы, практически совпадает с той, при которой он вызывает биологический ответ (рис. 43.3, А). Это справедливо в отношении всех стероидных гормонов и ряда пептидных. Сам по себе данный факт удивителен, особенно если учесть количество этапов, разделяющих процесс связывания гормона и комплексный ответ на него, например индукцию фермента, лизис клетки или транспорт аминокислот. Но в некоторых случаях имеет место выраженная диссоциация этих двух процессов максимальный биологический ответ наступает в условиях, когда занято лишь несколько процентов от общего количества рецепторов (рис. 43.3,5, эффект 2). Рецепторы, не участвующие в индукции биологического ответа, называют резервными. [c.152]

Процесс лизиса чужеродных клеток состоит из нескольких этапов (рис. 9.2). Первый этап — специфическое связывание примированных D8 Т-клеток с поверхностным чужеродным антигеном (пептидами вирусных, трансплантационных, раковых антигенов). Взаимодействие антигенраспознающих рецепторов цитотоксических Т-клеток с соответствующим антигеном усиливается дополнительными неспецифическими молекулярными структурами клеточной поверхности, которые обеспечивают наиболее эффективную динамическую адгезию между клетками (см. ниже). Второй этап, получивший название летального удара , представляет собой основное событие, предопределяющее гибель клетки-мишени. Механическое разобщение эффектора и клетки-мишени на этом этапе не спасает последнюю от гибели. Для этого этапа характерно повышение проницаемости клеточной мембраны, нарушение баланса натрий-калиевого насоса. Механизм, лежащий в основе летального удара , не достаточно ясен. Одним из факторов, повреждающих мембрану клетки, выступает лимфотоксин (фактор р некроза опухолей). Третий этап, приводящий к лизису клетки-ми- [c.202]

Первый этап — специфическое связывание ЦТЛ с клеткой-мишенью. Механическое разобщение взаимодействующих клеток спасает клетку-мишень от лизиса. Второй этап — летальный удар — основное событие, предопределяющее гибель клетки-мишени. ЦТЛ должен находиться в состоянии активного метаболизма. При этом жизнеспособность клетки-мишени не является обязательным условием. Механическое разобщение между взаимодействующими клетками на этом этапе не спасет клетку-мишень от гибели. Третий этап — заключительный, приводящий к лизису клетки-мишени. ЦТЛ остается неповрежденным и способен к дальнейшему цитолитическому действию [c.203]

Интересным путем преодоления необратимости связывания клеток с аффинными матрицами является использование эритроцитов быка в качестве носителя (табл. 1), так как клетки могут быть выделены из розетки селективным лизисом эритроцитов. [c.248]

Антитела в организме выполняют две основные функции. Первая — это распознавание и специфическое связывание соответствующих антигенов, вторая — эффекторная, заключающаяся в индукции важнейших физиологических процессов, направленных на уничтожение антигена лизис чужеродных клеток через активацию системы комплемента, стимуляция специализированных иммунокомпетентных клеток, выделение фармакологически активных веществ и т. д. [c.17]

Тестируют адекватное связывание антител с эритроцитами путем лизиса в избытке комплемента. [c.246]

I Фагоциты способны уничтожать клетки большинства бактерий, осуществляя последовательно хемотаксис, связывание, поглощение и лизис. [c.316]

MOB лизиса. В связывании может участвовать ряд молекул. [c.324]

Существует четыре типа реакций гиперчувствительности. Тип I характеризуется связыванием IgE с F -рецепторами тучных клеток. При контакте с аллергеном происходит перекрестное связывание IgE оно вызывает дегрануляцию тучных клеток и высвобождение ими медиаторов аллергических реакций. При гиперчувствительности II типа вырабатываются антитела к антигену поверхности собственных клеток организма (клеток-мишеней) или к чужеродному антигену, например эритроцитов при переливании крови. Связывание таких антител на клетках-мишенях может вызывать цитотоксический эффект К-клеток или комплемент-опосредованный лизис клеток-мишеней. [c.418]

Молекулярно-генетические исследования Ig-генов начались в середине 1960-х гг. К этому моменту было известно, что и тяжелые (Н), и легкие (L) цепи антитела выполняют двойственную функцию (рис. 3.2). Они состоят из вариабельной аминокислотной последовательности, или V-домена (служит для связывания антигена), и константной, или С -домена (служит, например, для запуска лизиса клетки-мишени или фагоцитоза). Гены антител отличаются от всех остальных генов, локализованных и картированных генетиками в определенных местах хромосом (называемых локусами). Гены, кодирующие V-и С-домены, отделены друг от друга огромным участком последовательности ДНК. Например, V- и С-домены тяжелых цепей мыши находятся в хромосоме 12, около концевого участка длинного плеча хромосомы. Генетическое картирование и последующее изучение последовательности нуклеотидов ясно показали, что V-участок отстоит от С-участка по крайней мере на 300 ООО п. н. (300 тыс. п. н.) оснований Почему [c.105]

Основными являются классические реакции агглютинации, прецкпитации, лизиса, связывания комплемента, нейтрализации и различные их модификации. [c.88]

Если препараты, в частности СМС, ввиду специфики применения соприкасаются с кожными покровами человека, необходимо исследовать их раздражающее и аллергизирующее действие при нанесении на кожу животных. Представляется целесообразным рекомендовать более широко изучать возможное сенсибилизирующее действие препаратов. В Киевском НИИ общей и коммунальной гигиены эти опыты продолжаются до 3 месяцев. У животных определяют титр комплемента, завершенный фагоцитоз, реакцию связывания комплемента, лизис нейтрофилов, дегрануляцию базофилов и другие показатели. [c.138]

Сродство к связыванию с коллагеном предполагает внесение фибронектином вклада в процесс заживления раны и восстановления ткани с помощью перекрестного связывания с коллагеновым матриксом (Mosher, 1978), Способность фибронектина облегчать превращение плазминогена в плазмин указывает на возможность того, что фибронектин может также играть противоположную роль, усиливая лизис тромба (Iwanaga et al., 1978). [c.93]

В агар добавляют также большой избыток тех же эритроцитов. Агар разливают тонким слоем в чашки Петри и инкубируют последние 1 ч при 37° С. За этот срок ан-тителопродуцирующие клетки секретируют некоторое количество антител, которые присоединяются к окружающим клетку эритроцитам. Затем на чашки наслаивают раствор комплемента и снова инкубируют их прп 37° С. Комплемент диффундирует в агар и, связываясь эритроцитами, сенсибилизированными антителами, вызывает их лизис. При просмотре чашек невооруженным глазом будут видны круглые зоны просветления в агаре, число которых соответствует числу антителопродуцирующих клеток. Метод может быть применен для определения клеток, продуцирующих антитела против самых разнообразных антигенов. Антигены или гаптены при этом фиксируют на иоверхностп эритроцитов, засеваемых в агар. После связывания антител против соответствующего антигена эритроциты в присутствип комплемента лизируются (так называемый пассивный гемолиз). [c.260]

Мер каптоэтанол (2-МЭ) может вызывать диссоциацию lgM-пентамеров, р результате. чего они утрачивают агглютинирующую способность. Поэтому добавление данного реагента приводит к Т о му, что в реакции агглютинации участвуют лишь IgG, что позволяет сравнивать титры. IgM и IgG. Антитела, связывающие комплемент (источником которого служит свежая сыворотка), в его присутствии вызывают лизис эритроцитов-мишеней. У большинства видов животных лишь некоторые подклассы IgG способны связывать комплемент в то же время IgM обладают более высокой комплемент-свя- Зывающей активностью. Поэтому антисыворотки с высоким Содержанием IgM имеют более высокий гемолитический титр, чем сыворот. ки, в составе которых преобладают JgG. Гемолитические тесты, в делом, более. чувствительны, чем агглютинационные— раз умеется, лишь в том случае, если участвующие в реакции антитела связывают комплемент. Поскольку 2-МЭ обладает способностью ингибировать связывание комплемента IgM, он заметно снижает гемолитический титр антисывороток с высо ким содержанием антител этого класса. В результа те можно. определить концентрацию IgM в сыворотке (ом. рис. 7.2). [c.241]

Рис. 7.3. Определение минимальной гемолитической дозы антител путем титроваиия комплемента с помощью нагруженных гемолитическими антителами эритроцитов в трех различных концентрациях (серии двойных разведений) в последующих сдвоенных рядах А и В, С и О. Е и Р. Комплемент добавлен в разведении 1 3 в вертикальный ряд 1 и последовательно разведен (1 2) в первом ряду каждой пары. Второй ряд каждой пары представляет собой контроль (только БГР) на отсутствие спонтанного лизиса или агглютинации. Эритроциты, перегруженные антителами (ряды А и В), спонтанно лизируются во время инкубации. Эритроциты, несущие на поверхиости половину этого количества антител (ряды С и О), подвергаются опосредованному комплементом лизису вплоть до разведения комплемента 1 192, но с очевидной спонтанной (ауто) агглютинацией сенсибилизированных эритроцитов. Снижение концентрации антител на поверхности эритроцитов на следующей ступени разведения дает чувствительную гемолитическую систему без аутолизиса или аутоагглютинации. Это количество антител можно использовать в дальнейшем дл приготовления индикаторных лизируемых клеток в целях постановки реакции связывания коми

Лизис нагруженных белком А эритроцитов можно использовать при анализе у Xenopus клеток, образующих иммуноглобулины, по описанным в литературе методикам. Для такого анализа, так же как и для обратного локального гемолиза, необходимо определение оптимальных разведений (титрованием) кроличьих антител против иммуноглобулинов Xenopus. Например, нашу антисыворотку для использования в тесте с нагруженными белком А эритроцитами нужно разводить 1 80, а для обратного гемолиза 1 256. Вероятно, антисыворотка обеспечивает более прочное связывание антител низкой аффинности с клетками-мишенями. Ни одни из известных моноклональных антител против IgY не дают присущего кроличьим антисывороткам усиливающего эффекта. [c.503]

Учет полученных результатов. На рис. 11.7 показан результат тестирования четырех неизвестных сывороток. Контроль комплемента подтверждает, что разведение комплемента действительно содержит ЗЕКбо- Контроль клеток свидетельствует об отсутствии спонтанного лизиса сенсибилизированных эритроцитов. Полный лизис в лунках, содержащих контроли антигена и сывороток, свидетельствует о том, что для связывания комплемента необходимо образование комплекса антиген — антитело. Поэтому, если сыворотки содержат иммунные комплексы и инфицированы бактериями, результат реакции может быть искажен. Контроль с заведомо отрицательной сывороткой свидетельствует об отсутствии иммунных антител. Контроль заведомо положительной сыворотки показывает, что она содержит антитела в разведении 1 128. В 256-кратном разведении антитела обнаружить не удалось. Таким образом, титр контрольной положительной сыворотки равен 128. Титры тестируемых сывороток от А до D составляют соответственно 8, 256, 16 и 64. [c.324]

На рис. 7.2 представлены результаты изучения литического действия комплексов иммобилизованного гепарина на неста-билизированный фибрин [60]. Из этого рисунка видно, что и по характеру литического действия иммобилизованный гепарин мало отличается от гепарина в растворе наиболее активными реакции лизиса являются комплексы иммобилизованного гепарина с фибриногеном и тромбином. Замедление скорости лизиса по мере протекания реакции позволило авторам работы [58] предложить наиболее вероятный механизм этого явления, который заключается в связывании комплексами иммобилизованного гепарина растворимого фибрин-мономера (равновесная концентрация этого вещества составляет 6,3-10 моль/л) с по- следующим превращением связанного фибрин-мономера в неспособные вступать в дальнейшую полимеризацию с образованием фибрина соединения. При этом в результате обратимости перехода фибрин-мономера в нестабилизированный фибрин рав- [c.260]

Наружный слой клеточной стенки большинства грамотрицательных бактерий содержит липопо-лисахарид (Л ПС) с длинными 0-специфическими боковыми полисахаридными цепями, выступающими из мембраны наружу. Они эффективно активируют комплемент, но локализуют ковалентное связывание СЗ и фиксацию ЛМК на таком удалении от цитоплазматической мембраны бактериальной клетки, при котором опсонизация и лизис невозможны. В подобных случаях в качестве фактора приобретенного иммунитета могут функционировать только бактерицидные антитела. Они активируют комплемент в непосредственной близости к тем участкам бактериальной поверхности, где его опсонизирующий и литический эффекты могут реализоваться. [c.78]

Связыванию бактерий с мембраной фагоцита способствует ряд молекул. Произойдет ли поглощение микробной клетки фагоцитом и ее последующий лизис, зависит от характера этого взаимодействия. За исключением компонентов комплемента, антител и ман-нозосвязывающего лектина (МСЛ), которые присоединяются к бактериальной поверхности, все остальные молекулы на поверхности бактерий, участвующие в связывании, относятся к конститутивно экспрессируемым бактериальным компонентам. [c.322]

Все эффекторные клетки (К-клетки, тромбоциты, нейтрофилы, эозинофилы и клетки мононуклеарно-фаго-цитарного ряда) обладают рецепторами к Рс-фраг-менту, посредством которых они взаимодействуют с антителами, фиксированными в тканях на клетках-ми-шенях. Активация 03 может непосредственно приводить к комплемент-опосредованному лизису клеток-мишеней или способствовать связыванию фагоцитов с их мишенями - при участии СЗЬ, СЗЫ или С3с1, которые одновременно активируют фагоциты. [c.441]

Определение антител на основе реакции связывания комплемента. 1. Готовят последовательные двукратные разведения исследуемой сыворотки, разливают их по пробиркам (или вносят в лунки) и в каждую добавляют фиксированное количество антигена. Если сыворотка содержит антитела, образуются иммунные комплексы. 2. К смеси добавляют комплемент. Если комплексы присутствуют, они связывают комплемент и потребляют его. 3. На конечном этапе постановки реакции в смесь вносят индикаторные клетки (эритроциты) вместе с субагглютинирующим количеством ан-тизритроцитарных антител. Если в смеси осталось какое-то количество комплемента, клетки будут лизиро-ваны если же комплемент связан иммунными комплексами на зтапе (2), его не хватит для лизиса эритроцитов. Применяют такое количество комплемента, кото- [c.532]

Антигенепецифичные рецепторы Т-клеток (ТкР) распознают вирусные антигены, ассоциированные с главными антигенами гистосовместимости. Антител, связывающихся с такой ассоциацией, не образуется. Таким образом, Т-клетки и антитела никогда в норме не конкурируют за одни и те же сайты на поверхности клетки. Это можно продемонстрировать простым экспериментом. Если искусственно создать антитела к сайтам, узнаваемым Т-клетками, и добавить их к смеси инфицирован-ньгх клеток и Т-клеток, то лизиса клеток не происходит, и вирусная инфекция успешно развивается. Этот эксперимент иллюстрирует селективные преимущества иммунной системы позвоночных, в которой Т-клетки и антитела не конкурируют за связывание с одними и теми же сайтами на поверхности инфицированной клетки. [c.82]

Второй вопрос, почему мутации ограничиваются V(D)J-y4a-стком, чрезвычайно важен для обсуждения обратной связи между сомой и зародышевой линией, которая составляет главную тему этой книги. Мы подробно расскажем об этом в следующей главе. Здесь подчеркнем лишь некоторые общие принципы. Если мутации в вариабельной области антитела могут оказаться полезными, то мутации в константной области, скорее всего, вредны, так как они могут нарушить эффекторные функции антитела, запуск лизиса бактериальных клеток или стимулирование фагоцитоза (рис. 3.1). Разделение V- и С-участков позволило эволюции создать механизм, который обеспечивает мутации в V-участке, но сохраняет С-участок неизменным. Вот что происходит в В-лимфоците на определенных стадиях его жизни. Перестроенный V(D)J-reH может подвергаться очень высокому уровню соматических мутаций, и новое антитело оценивается по способности связывать антиген (см. следующую главу). Антитела с самой высокой аффинностью к чужеродному антигену выигрывают в отборочных соревнованиях за связывание антигена, сохраняются и становятся долго живущими клетками памяти. В-лимфоцит проиграет соревнование, если мутация уменьшает или уничтожает аффинность такие клетки погибают. В-лимфоциты, кодирующие антитела, которые связывают собственные антигены, также уничтожаются, и, следовательно, сохраняется аутотолерантность. [c.110]

Рецепторами называют специфические структуры клетки, связывание с которыми — обязательное условие для проявления эффекта внеклеточного биологически активного вещества. Рецепторы обладают высоким сродством и избирательностью к этим веществам, но могут связывать также их структурные аналоги. Вещества, имитирующие действие гормонов, называют агонистами или миметиками (от слова мимикрия — подражание). Вещества, которые, связываясь с рецептором, С ами не вызывают биологического эффекта, но препятствуют связыванию гормона, называют антагонистами или литиками (от слова лизис — растворе-дие, устранение). Связывание природных веществ, их агонистов или антагонистов с рецепторами происходит быстро и обратимо. После связывания и отщепления от рецептора вещество остается неизменным. [c.110]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология