Инактивация фермента в ходе реакции

Как видно из таблицы 40, во всех случаях, где фермент сохраняет свою каталитическую функцию (в атмосфере кислорода), имеет место значительный обмен между медью фермента и радиоактивной Сц2+ в растворе. Этот обмен (30%) всегда сопровождается потерей оксидазной активности (инактивация в ходе реакции) и не связан с изменением содержания меди в ферменте. В атмосфере азота (нефункционирующий энзим) обмен отсутствует аскорбиновая кислота сама по себе не способствует обмену. [c.159]

Инактивация фермента в ходе реакции [c.254]

При изучении кинетики ферментативных реакций, протекающих до высоких степеней превращения субстрата, необходимо принимать в расчет возможность инактивации фермента в ходе реак- [c.168]

Все известные медьсодержащие ферменты обладают в очищенном виде одним общим свойством. Они подвержены заметной инактивации в ходе катализируемой ими реакции. [c.156]

Причину инактивации фермента следует искать не в обратимой потере энзимом меди, а скорее всего в структурных изменениях белка фермента в ходе каталитического процесса. Наблюдения позволили предположить, что медь фермента, находясь в нем изначально в виде Си +, в процессе реакции восстанавливается до Си+. [c.159]

Действительно, фоточувствительность мембранной ацетилхолинэстеразы меняется в ходе облучения, на что указывает отклонение кинетики инактивации от кинетики реакции первого порядка, проявляющееся в искажении линейной зависимости логарифма остаточной активности от дозы. Одновременно меняются и каталитические параметры остаточного фермента. [c.269]

При проведении иммобилизации могут возникать затруднения, обусловленные некоторыми особенностями протекания реакции полимеризации. Так, например, полимеризация ингибируется присутствующим в растворе молекулярным кислородом, и во многих случаях для его удаления рабочий раствор предварительно насыщают инертным газом — азотом или аргоном. Кроме того, в ходе полимеризации выделяется значительное количество теплоты, что приводит к повыщению температуры внутри образующегося полимерного блока до 75°С. Такое сильное нагревание вызывает инактивацию ферментов, поэтому полимеризую-щийся раствор необходимо охлаждать так, чтобы его температура не превышала 20—25°С. [c.59]

Наконец, если в ходе ферментативной реакции фермент денатурирует по первому порядку с константой скорости инактивации и , причем субстрат не оказывает влияние на кинетику инактивации, то дифференциальное уравнение скорости ферментативной реакции можно записать в виде (при [S] [E]q) [c.258]

Рассмотренные типы ингибиторов—конкурентные и аллостерические — действуют обратимо. Удаление их из системы полностью восстанавливает каталитическую активность фермента. Наряду с этим найдены в живой природе и получены путем химического синтеза многочисленные соединения, которые при контакте с ферментом приводят к необратимой инактивации. Как правило, это проис.ходит в результате химической реакции такого ингибитора с каким-либо существенным для проявления каталитической активности участком фермента. Этот тип ингибирования рассматривается в 7.17. [c.219]

В некоторых процессах образовавшийся целевой продукт не является устойчивы.м, а инактивируется уже в ходе процесса. К таким продуктам можно отнести ферменты, некоторые антибиотики и ряд других. Имеются сообщения о наличии короткоживущих ингибирующих продуктов обмена, что подтверждает их инактивацию [44]. Инактивация зачастую является простой одномолекулярной химической реакцией распада, так что скорость ее Qp подчиняется уравнению первого порядка [93, 120] (табл. 15.2). [c.56]

При изучении кинетики ферментативных реакций, протекающих до высоких степеней превращения субстрата, необходимо учитывать возможную инактивацию фермента в ходе реакции. В ряде случаев было найдено, что связывание субстрата с ферментом ускоряет инактивацию последнего в некоторых случаях субстрат не оказывает влияние на инактивацию фермента. Однако чаще всего связывание субстрата предохраняет фермент от инактивации, т. е. ферментсубстрат-ный комплекс инактивируется медленнее, чем свободный фермент. [c.254]

Суспензию сефарозы с иммобилизованной дегидрогеназой промывают 10-кратным объемом раствора мочевины, смешивают с 4-кратным объемом раствора мочевины той же концентрации и инкубируют суспензию при перемешивании. За ходом инактивации следят, измеряя активность фермента на носителе. Через каждые 10 мин из инкуба-ционной смеси отбирают аликвоты препарата дегидрогеназы и без отмывания геля от мочевины вносят их в стандартную систему для определения активности. Реакцию начинают добавлением субстрата через 10 с после внесения суспензии сефарозы. Исследуют влияние концентрации мочевины на процесс инактивации фермента. Оптимальной концентрацией мочевины является такая, которая позволяет провести денатурацию 3 из 4 субъединиц дегидрогеназы и перевести эти субъединицы в раствор. Подбирая концентрацию мочевины, следует получить такую зависимость инактивации фермента от времени, на которой будет выраженное плато на уровне 25% от исходной активности. При определении белка и активности на разных стадиях денатурации можно показать, что в начале плато в связанном с матрицей состояний находится димер дегидрогеназы, сохраняющий 50% от исходной удельной активности. При сохранении в процессе инкубации активности такого димера происходит постепенное отщепление неактивной субъ- [c.302]

Определение константы скорости инактивации фермента ротено-ном. Выделяют препарат Кейлина—Хартри, Кювету рН-метра (объ-<емом 4,5 мл) заполняют средой измерения активности (п. 2) и добавляют НАДН до конечной концентрации в кювете, равной 1 мМ. В кювету погружают отмытый рН-электрод, через 2—3 мин вносят 50 мкл суспензии Кейлина—Хартри ( — 25 мг/мл) и регистрируют изменение pH в ходе НАДН-оксидазной реакции. По ходу реакции в кювету вносят ротенон (0,1 мкМ) и наблюдают ингибирование ферментативной активности, связанное с образованием каталитически неактивного комплекса фермент-ротенон. Внося ингибитор в различных концентрациях (0,025 0,05 0,075 0,1 0, 5 мкМ), определяют зависимость скорости инактивации от концентрации ротенона и рассчитывают величину константы второго порядка скорости инактивации фермента ингибитором. [c.441]

Активность адсорбированных целлобиозообразующих фер-штов в ходе реакции уменьщается. Инактивации глюкозообра-ющих ферментов не происходит. [c.173]

При изучении влияния как pH, так и температуры на скорость ферментативного превращения, необходимо следить, чтобы изменение, рИ или повышение температуры не выходило за допустимые пределы, индивидуальные для каждого фермента, так как это может привести к необратимой потере им каталитической активности (инактивации фермента). В этом случае в ходе ферментативногх) превращения может происходить падение скорости реакции, вызванное уменьшением полной концентрации сохранпвши.ч активность молекул, т.е. величины [E]f. Если кинетические измерения проводятся с целью получения кинетических параметров, следует ограничиваться измерениями начальной скорости превращения, т.е. проводить эксперименты в течение непродолжительного времени, за которое вкладом инактивации фермента можно пренебречь. Если же речь идет об использовании фермента как катализатора для получения некоторого продукта превращения или для удаления какого-либо нежелательного компонента из реакционной смеси, то следует подбирать оптимальную температуру, при которой положительный эффект, связанный с увеличением скорости реакции в результате повышения температуры, еще перевешивает эффект замедления от прстепенно нарастающей во времени потери фермента в результате инактивации. [c.215]

Механизм инактивации простагландинэндопероксидсинтетазы в ходе ферментативной реакции детально исследован. Инактивация простагландинэндопероксидсинтетазы промежуточным продуктом ее каталитического действия имеет, по-видимому, значительный физиологический смысл, так как позволяет поддерживать постоянный (и строго определенный) уровень концентрации этих физиологически активных соединений в живых системах (С. Д. Варфоломеев, А. Т. Мевх, 1983). При создании биокаталитических процессов получения простагландинов подобная инактивация одного из ферментов системы в ходе реакции является, пожалуй, основным осложняющим фактором. Выяснение механизма инактивации простагландинэндопероксидсинтетазы позволяет, однако, надеяться, что возможен выбор условий использования фермента, при которых достигается максимальный выход целевого соединения с минимальной потерей биокатализатора. Не следует исключать также путь регенерации инактивированного фермента. [c.58]

Нативный фермент имеет в составе нейтральные и аминосаха-ра в количестве до 20% общего веса [Shannon et al., 1966]. Молекулы сахаров могут присоединяться только к пяти аминокислотным остаткам из тех двадцати, которые входят в состав полипептидной цепи [Sharon, 1974[. Углеводные цепи предохраняют фермент от инактивации радикалами, образующимися в ходе реакций, и уве- [c.23]

А. С помощью опыта 1 проверяли, создан ли в условиях опыта избыток мембран-акцепторов (теней эритроцитов). Поскольку белок, переносящий ФХ, катализирует реакцию обмена, то можно легко определить теоретический предел для величины переноса при равновесии. Если, например, количество донорных и акцепторных мембран одинаково, то предел возможного переноса должен быть на уровне 50%. При удвоении количества мембран-акцепторов этот предел увеличится до 67% (отношение акцептор донор равно 2 1) при увеличении количества мембран-акцепторов втрое по сравнению с количеством мембран-доноров предел увеличится до 75% (отношение 3 1) и т. д. Когда увеличение фракции акцепторных мембран перестает вызывать изменения, можно считать, что мембраны эритроцитов присутствуют в избытке. Таким образом, 70%-ный предел не относится к положению равновесия при обмене. Опыт 2 позволяет исключить возможность инактивации фермента в ходе реакции, поскольку добавление свежего белка-переносчика не приводило к возрастанию обмена. Опыт 3 позволяет исключить возможность того, что меченый материал с самого начала содержал примеси (они не могли бы переноситься ФХ-пе-реносящим белком, специфичным только для ФХ) или как-то изменялся в процессе инкубации. [c.375]

В ходе проведения экспериментов было выявлено, что поперечное сечение инактивации мембраносвязанной эритроцитарной ацетилхолинэстеразы больше, чем у свободного фермента. Нарушение структурного состояния эритроцитарной мембраны с помош ью фосфолипаз приводит к уменьшению фоточувствительности ацетилхолинэстеразы. Такой же эффект вызывает и удаление из мембраны значительного количества холестерина, опре-деляюш его текучесть липидной фазы мембраны. Влияние мембранного окружения на УФ-чувствительность ацетилхолинэстеразы реализуется, по крайней мере, двумя путями посредством изменения конформационного состояния фермента за счет межмолекулярных взаимодействий и посредством повреждения белковой молекулы продуктами фотохимических превраш ений липидов. То есть состояние мембранного фермента зависит не только от эффективности протекания фотохимических процессов в самом белке, но и от фотохимических реакций в соседних компонентах, инициируюш их структурные перестройки мембраны. [c.131]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология