Инактивация зависимость

Рис. 117. Определение температуры конформационного перехода активного центра а-трипсина по температурной зависимости эффективной константы скорости ультразвуковой инактивации фермента

Под действием киназы фосфорилазы Ь, активность которой регулируется цАМФ-зависимой протеинкиназой, обе субъединицы молекулы неактивной формы фосфорилазы Ь подвергаются ковалентному фосфорилированию и превращаются в активную фосфорилазу а. Дефосфорилирование последней под действием специфической фосфатазы фосфорилазы а приводит к инактивации фермента и возврату в исходное состояние. [c.292]

Рис. 116. Определение температуры конформационного перехода активного центра а-химотрипсина по температурной зависимости эффективной константы скорости инактивации фермента под действием ультразвука

При рассмотрении температурной зависимости жизненной кривой можно установить три температурные точки температурный минимум, оптимум и максимум. В границах температуры от минимума до оптимума интенсивность жизненного процесса растет, и здесь в основном наблюдается приблизительно такая же зависимость, как и в обычном химическом процессе. Температурный оптимум у животных колеблется в пределах 308...315 К (у растений он даже выше). Дальнейшее повышение температуры приводит к быстрому снижению процесса, и по достижении максимальной температуры наступает гибель, что связано с денатурацией белка и инактивацией ферментов. [c.130]

Рис. 19. Зависимость константы скорости инактивации лизоцима под действием ультразвука от температуры. Условия концентрация лизоцима 8,7-10- М pH 7,0 частота ультразвука 880 кГц интенсивность 2 Вт/см2 [54]

Ферментативные реакции характеризуются также наличием колоколообразной зависимости скорости реакции от температуры в достаточно широком температурном интервале (что приводит к температурному оптимуму реакции). Эта особенность влияния температуры на кинетику ферментативных реакций объясняется наложением двух эффектов — возрастанием скорости реакции при увеличении температуры и ускорением тепловой денатурации белковой молекулы, приводящей к инактивации фермента при высоких температурах. Ясно, что при достаточно корректной постановке эксперимента оба эти явления можно изучать раздельно (см., например, 9 этой главы). [c.266]

Температурная зависимость константы скорости инактивации а-химотрипсина под действием ультразвука. Условия опыта pH 8,1 [c.256]

Температурная зависимость константы скорости инактивации а-трипсина под действием ультразвука. Условия опыта pH 4,2 ионная сила 0.01М (буферный раствор) 1Е]о = 2-10- М интенсивность ультразвука 2 Вт/см [c.257]

В таблице 11 приведена температурная зависимость эффективной константы скорости инактивации а-химотрипсина под действием ультразвука [1]. Найти температуру конформационного перехода (Тс) и рассчитать значения энтальпии и энтропии кон- [c.257]

В таблице 12 приведена температурная зависимость эффективной константы скорости инактивации а-трипсина под действием ультразвука. Найти температуру конформационного перехода и рассчитать значения энтальпии и энтропии конформационного перехода активного центра фермента. [c.258]

И.2), исследуя температурную зависимость константы равновесия процесса. Однако существуют подходы, позволяющие изучать термодинамику равновесных процессов с помощью кинетических методов. Один из них основан на изучении влияния температуры на кинетику инактивации ферментов под действием ультразвука [1]. Рассмотрим кинетическую схему (11.5) инактивации двух молекул фермента, отличающихся конформацией активного центра и находящихся друг с другом в ра1внове1оии. Естественно полагать, что вследствие различной конформации активных центров молекул фермента Е и Е кинетика их инактивации также будет [c.250]

Рис. 22. Зависимость константы скорости инактивации лизоцима под действием ультразвука от pH. Концентрация фермента 8,7Х Х10- М [64]

Для установления роли данных ионогенных групп лизоцима в катализе и (или) в поддержании каталитически активной конформации активного центра в работе [64] была изучена рН-зави-симость инактивации лизоцима нод действием ультразвука. Как видно из рис. 22, группа с рК 5,0, контролирующая каталитическую активност лизоцима, не проявляется в рН-зависимости константы скорости инактивации фермента под действием ультразвука. Следовательно, протонирование этой группы не приводит к какому-либо существенному конформационному изменению в активном центре лизоцима, хотя и делает фермент каталитически неактивным. С другой стороны, ионогенные группы фермента с рК<2 и рК в области 9—11 контролируют конформационную [c.199]

Рис 314 График зависимости кажущихся констант скорости инактивации от концентрации ингибитора в двойных обратных координатах Объяснение в тексте [c.212]

Для определения константы скорости инактивации Са—АТФазы НБД-хлоридом проводят модификацию 5Н-групп в той же среде, которая используется для определения кинетических характеристик 5Н-групп (с. 360). Реакцию начинают добавлением НБД-хлорида. По ходу реакции каждые 0,5—5 мин в зависимости от условий реакции отбирают аликвоты объемом 20—50 мкл и вносят их в 1 мл среды для определения активности Са—АТФазы (с. 359). Пробы инкубируют 1— [c.363]

Повторное применение Л. с. может привести либо к увеличению эффективности препарата в результате его кумуляции или сенсибилизации организма (повышения чувствительности), либо к снижению, связанному с привыканием (толерантностью). Последнее обусловлено уменьшением всасывания, увеличением скорости инактивации и повышением интенсивности выведения, а также снижением чувствительности к ним рецепторов. К нек-рым Л.С. привыкание развивается очень быстро (тахифилаксия) может возникнуть также лек. зависимость, проявляющаяся в непреодолимом влечении к препарату. [c.585]

В зависимости от количества активного изониазида, выделившегося с мочой за 24 ч (среднее результатов двух определений) по отношению к принятой дозе, все больные бьши разделены на три группы по степени инактивации. К сильным инактиваторам препарата были отнесены больные, выделившие с мочой от О до 10 % активного изониазида, к средним — от 11 до 15 %, к слабым — свыше 16 %. [c.359]

Помимо приведенных выше реакций, цАМФ-зависимая регуляция уровня гликогена в тканях осуществляется за счет фосфорилирования гликогенсинтазы, приводящей к ее инактивации [c.156]

Рассмотрим, как с помощью изучения температурной зависимости эффективной константы скорости инактивации можно рассчитать термодинамические параметры АЯ и AS, характеризующие обратимые ко нформационныеизменеиия активных центров ферментов. Общая скорость инактивации фермента, как следует из схемы [c.251]

В таблице б приведена зависимость константы скорости необратимой инактивации аденозинтрифосфатазы от температуры [6]. Вычислить значения стандартных энталыпии и энтропии активации процесса. [c.254]

В таблице 13 приведены температурные зависимости инактивации р- и у-трипсина под действием ультразвука. Найти значения температуры конформационяых переходов активных центров обоих ферментов и вычислить значения энтальпии и энтропии конформацнонных переходов. [c.258]

В зависимости от степени ковденсации (плотности упаковки) и коррелирующей с ней активности X. в интерфазе (часть клеточного цикла между двумя последоват. делениями) различают гетерохроматин и эухроматин. Гетерохроматин бывает конститутивный (структурный) и факультативный. Если для факультативного гетерохроматина ковденсирован-ное (плотно пакованное) состояние - явление временное, наступающее как следствие инактивации X., напр., в ходе развития или дифференцировки, то конститутивный гетерохроматин ковденсирован всегда. Ф-ции его неясны. [c.314]

Сопоставление температурной зависимости констат1ты скорости инактивации /г г, лизоцима (в интервале температур 19—80° С, [c.160]

Суспензию сефарозы с иммобилизованной дегидрогеназой промывают 10-кратным объемом раствора мочевины, смешивают с 4-кратным объемом раствора мочевины той же концентрации и инкубируют суспензию при перемешивании. За ходом инактивации следят, измеряя активность фермента на носителе. Через каждые 10 мин из инкуба-ционной смеси отбирают аликвоты препарата дегидрогеназы и без отмывания геля от мочевины вносят их в стандартную систему для определения активности. Реакцию начинают добавлением субстрата через 10 с после внесения суспензии сефарозы. Исследуют влияние концентрации мочевины на процесс инактивации фермента. Оптимальной концентрацией мочевины является такая, которая позволяет провести денатурацию 3 из 4 субъединиц дегидрогеназы и перевести эти субъединицы в раствор. Подбирая концентрацию мочевины, следует получить такую зависимость инактивации фермента от времени, на которой будет выраженное плато на уровне 25% от исходной активности. При определении белка и активности на разных стадиях денатурации можно показать, что в начале плато в связанном с матрицей состояний находится димер дегидрогеназы, сохраняющий 50% от исходной удельной активности. При сохранении в процессе инкубации активности такого димера происходит постепенное отщепление неактивной субъ- [c.302]

После определения активности стооят график, отражающий зависимость скорости гидролиза АТФ от времени модификации препарата СР НБД-хлоридом, в полулогарифмиче№нх координатах. Если полученные экспериментальные точки лежат на одной прямой, реакцию инактивации можно считать реакцией псевдопервого порядка. Константу скорости инактивации рассчитывают так же, как константы скорости модификации 5Н-групп (с. 361). [c.363]

Определение константы скорости инактивации фермента ротено-ном. Выделяют препарат Кейлина—Хартри, Кювету рН-метра (объ-<емом 4,5 мл) заполняют средой измерения активности (п. 2) и добавляют НАДН до конечной концентрации в кювете, равной 1 мМ. В кювету погружают отмытый рН-электрод, через 2—3 мин вносят 50 мкл суспензии Кейлина—Хартри ( — 25 мг/мл) и регистрируют изменение pH в ходе НАДН-оксидазной реакции. По ходу реакции в кювету вносят ротенон (0,1 мкМ) и наблюдают ингибирование ферментативной активности, связанное с образованием каталитически неактивного комплекса фермент-ротенон. Внося ингибитор в различных концентрациях (0,025 0,05 0,075 0,1 0, 5 мкМ), определяют зависимость скорости инактивации от концентрации ротенона и рассчитывают величину константы второго порядка скорости инактивации фермента ингибитором. [c.441]

В зависимости от агрегатного состояния пенициллина устойчивость его различна. Препараты пенициллина очень нестойки в водных растворах, особенно при нагревании. Расщепление р-лактамного кольца приводит к инактивации пенициллина. Этот процесс зависит и от pH среды. Поэтому, например, бензилпенициллина калиевая (натриевая) соли выпускаются и хранятся в кристаллическом виде во флаконах, герметически закрытых резиновыми пробками, обжатыми алюминиевыми колпачками. Содержание пенициллина в этих флаконах может быть от 125 000 до 1000 000 ЕД. Препараты пенициллина, кроме феноксиметилпенициллина, вводятся в виде растворов внутримышечно или под кожу. Готовят эти растворы ех tempore на стерильном изотоническом растворе хлорида натрия или на воде. Часто для удлинения действия растворы готовят на 0,25, 0,5 и 1% растворах новокаина. [c.421]

При высоких значениях pH скорость действия химотрипсина падает, и характер рН-зависимости указывает на существование в активном центре группы с рЛ[а от 8 до 9. Это значение рКа может относиться к N-кoнцeвoй аминогруппе Ие-16. Аминогруппа Пе-16 участвует в образовании одной из связей, расщепляемых при превращении зимогена в активный фермент. Эта аминогруппа образует ионную связь (ионную пару) с остатком Азр-194 (рис. 7-2), который находится рядом с сери-ном активного центра. Возможно, ионная связь способствует поддержанию фермента в нужной для реакции конформации. Депротонирование при pH выше 8—9 должно вызывать инактивацию [39]. [c.112]

Даже до того, как стала известна структура кристаллической лактатдегидрогеназы, отсутствие рН-зависимости связывания кофермента в интервале pH от 5 до 10 наряду с наблюдавшейся инактивацией фермента бутандионом позволило предположить, что пирофосфатная группа NAD+ связывается с гуанидиниевой группой бокового радикала аргинина [75]. Рентгеноструктурные исследования показывают, что эту функцию осуществляет Arg-101 (рис. 8-12). Несколько неожиданным оказалось то, что аминогруппа аденина не образует водородной связи с белком. Аденин скорее всего заключен в гидрофобной щели, а его аминогруппа контактирует с растворителем. [c.245]

Для анализа в две пробирки диаметром 18 и длиной 180 мм наливают по 10 мл субстрата и ставят их в ультратермостат или водяную баню с постоянной температурой 30 0,2° С на 5—10 мин (чтобы растворы приняли необходимую температуру). Затем, не вынимая пробирок из термостата, наливают в первую (контрольную) 5 мл дистиллированной воды, во вторую (опытную) — 5 мл рабочего раствора фермента. Смеси быстро перемешивают и выдерживают в ультратермостате в течение 10 мин, отмечая время по секундомеру. По истечении этого времени из пробирок отбирают по 0,5 мл раствора и переносят их в конические колбочки с предварительно налитыми туда 50 мл рабочего раствора йода и 0,1 н. раствора соляной кислоты. Жидкости взбалтывают, при этом одновременно происходит инактивация фермента и йодокрахмальная реакция. Растворы приобретают следующую окраску контрольный — сннюю, опытный — фиолетово-бурую различной интенсивности в зависимости от степени гидролиза крахмала. [c.299]

Рис. 6.9. Временная зависимость калиевого тока, проходящего через мембрану аксона после деполяризации при различных величинах потенциала. Вверху слева — контроль без ингибитора остальные — ингибирование тока ионов калия производными ТЭА. Блокирование увеличивается при замещении этиловой группы ТЭА гидрофобной боковой цепью (Сд — нонил, С5 — пентил, С1 — мстил) калиевый ток вначале увеличивается, затем ингибируется С5- и Сд-произ-водиыми (инактивация) следовательно, эти реагенты блокируют вход в открытый канал.

Имеются также данные о наличии Ыа+-зависимого высокоаффинного поглощения, которое отвечает за инактивацию этого медиатора путем его удаления из синаптической щели. Фармакология отдельных стадий серотонинового цикла исследована слабо. Мы уже упоминали здесь механизм действия LSD. п-Хлорофенилаланин представляет собой сильный ингибитор триптофангидроксилазы и благодаря такой специфичности используется для определения участия серотонина в том или ином типе поведения. [c.228]

Ферменты. Поскольку ферменты имеют белковую природу, 1ри нагревании происходит постоянная их инактивация вслед--твие денатурации белкового носителя. В зависимости от приро-1Ы ферментов инактивация происходит в разной степени. Некоторые примеры изменения активности основных ферментов моло- а приведены в табл. 25. Как видно из приведенных данных, (зиболее термоустойчивым является кислая фосфатаза, а наиме-,ее — липаза. Лизоцим также является ферментом, устойчивым к (згреванию. [c.155]

Для диагностики микозов применяются микроскопические (в том числе гистологические), микологические (культуральные), аллергические, серологические, экспериментальные, молекулярно-биологические и другие методы исследования. Ввиду морфологического многообразия грибов, а также их медленного роста ведущее значение в диагностике микозов имеют морфологические методы обнаружения и идентификации возбудителя. В зависимости от клинических проявлений болезни исследуемым материалом служат пораженные волосы, чешуйки кожи, кусочки ногтей, кожные и ногтевые скарификаты, гной, мокрота, пунктаты лимфатических узлов, костного мозга, внутренних органов, кровь, спинномозговая жидкость, желудочный сок, желчь, испражнения, кусочки тканей, полученные при биопсии или аутопсии, и др. Материал берут по возможности из очага инфекции при соблюдении правил асептики эпиляционным пинцетом, скальпелем, препаровальной иглой, лезвием бритвы, ножницами, ложечкой Фолькмана, пастеровской пипеткой и др. Тампонами материал стараются не брать. Чтобы лучше рассмотреть пораженный участок, можно пользоваться лупой, у больных микроспорией — люминесцентной лампой, в лучах которой пораженные волосы имеют изумрудно-зеленое свечение. При подозрении на поражение дерматофитами ногти обрабатывают 70%-м этанолом для инактивации и удаления наружной (сопутствующей) микрофлоры, состригают и в сухом контейнере доставляют в лабораторию. Патологический материал следует брать в количестве, достаточном для [c.311]

Зависимость электрокинетического потенциала живых и убитых кипячением клеток Е. oli от концентрации ионов серебра (рис. 11) показывает, что исследуемые микробные клетки имеют отрицательный электрический потенциал. Величина его при инактивации клеток кипячением существенно не меняется. [c.121]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология