Определение коэффициента седиментации

Определение коэффициента седиментации [c.114]

Линейная зависимость (8.179) удобна для определения коэффициента седиментации 5о по измерениям движения поверхности скачка г (0 в процессе эксперимента. [c.195]

Принципиально возможно определение коэффициентов седиментации и, следовательно, приблизительных молекулярных масс даже не вполне индивидуальных белков, если имеется подходящий метод для измерения относительных концентраций белков, например путем измерения их ферментативной активности. Изучаемый образец осторожно наносится на раствор сахарозы с линейным градиентом концентрации и подвергается высокоскоростному центрифугированию в роторе с откидывающимися пробирками (в ба-кет-роторе). Обычно в качестве стандарта в раствор добавляется белок с известным коэффициентом седиментации s. Вещества с различными седиментационными свойствами отделяются в градиенте плотности друг от друга, образуя полосы. По окончании центрифугирования в нижней части центрифужной пробирки проделывают небольшое отверстие, фракции сливают и анализируют. Если фракции отбирают через различные промежутки времени центрифугирования, то временная зависимость расстояния от мениска до зоны белка, обладающего активностью, должна быть линейной. Для данного времени центрифугирования соблюдается следующая [c.130]

Изучение гидродинамических свойств разбавленных растворов полимеров является одним из основных способов определения молекулярных характеристик цепных молекул. Это связано как с доступностью экспериментального оборудования и сравнительной легкостью измерения, так и с наличием теоретических соотношений, количественно описывающих экспериментальные закономерности. В этой главе даются основы теории гидродинамического поведения изолированной цепной молекулы. Методы определения коэффициентов седиментации, диффузии, характеристической вязкости, объема элюирования в гель-проникающей хроматографии приведены в главах 4—6. [c.36]

Тот факт, что настоящий вывод приводит к тому же самому уравнению потока, как и при механическом описании, является, конечно, недостаточным, чтобы иметь возможность измерить коэффициент седиментации. Необходимо подтвердить возможность использования уравнения (22-6) или дать другие способы для определения и или 5. Чтобы рассмотреть этот вопрос, мы должны получить полное дифференциальное уравнение процесса потока. Если использовать правую часть уравнения (22-5) в качестве определения коэффициента седиментации, а уравнение (21-8) как определение коэффициента диффузии, уравнение (22-9) принимает вид [c.425]

В случае коллагена радиус инерции, рассчитанный из характеристической вязкости при предположении, что молекула является жесткой палочкой, находится в очень хорошем согласии с экспериментальным значением. Величина Rq, рассмотренная из коэффициента седиментации, не находится в таком хорошем согласии, но, как уже было отмечено, определение коэффициентов седиментации для молекул столь асимметричных, как коллаген, приводит к значительной ошибке вследствие ярко выражен- [c.454]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЭФФИЦИЕНТА СЕДИМЕНТАЦИИ ПО ПОЛОЖЕНИЮ ГРАНИЦЫ [c.233]

Коэффициенты седиментации определяются молекулярными весами осаждающихся молекул, но в действительности определение молекулярного веса необходимо проводить, комбинируя коэффициент седиментации с каким-либо другим параметром раствора того же полимера. Классический способ расчета молекулярного веса заключается в применении уравнения Сведберга (8-16) к данным седиментации и диффузии. Коэффициент диффузии можно в принципе рассчитать по тем же данным, которые обычно используют для определения коэффициента седиментации, но для получения более точных величин коэффициента диффузии следует, как правило, применять метод измерений, исключающий влияние явления седиментации. Применение полученного Сведбергом соотношения можно продемонстрировать на примере данных седиментации и диффузии на рис. 8-3—8-5, где для фракции полистирола S 105 молекулярного веса 161 ООО величины удельного парциального объема и плотности принимаются равными 0,940 см г и 0,7635 г/сл соответственно. Указанный молекулярный вес можно будет позже сравнить с моле- [c.226]

Коэффициент седиментации — наиболее часто определяемый параметр растворенного вещества. Прежде чем говорить об экспериментальном определении коэффициента седиментации, необходимо рассмотреть некоторые его характеристики. Подробно этот вопрос рас- [c.58]

Экспериментальное определение коэффициента седиментации [c.63]

Определение коэффициента седиментации методом препаративного центрифугирования [c.178]

Детальное описание обоих методов имеется в руководстве [7]. Дополнительные данные об использовании аналитической ультрацентрифуги и простые графические приемы определения коэффициента седиментации можно найти в работе [8]. По- [c.24]

ВИЯ негомогенности в 5. Эга система широко используется, особенно для определения коэффициентов седиментации белков . [c.288]

Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности [c.311]

Трение влияние формы 299 Молекулярная масса 300 Метод точного измерения коэффициента седиментации 301 Примеры использования скоростной седиментации 302 Зональное центрифугирование в предварительно подготовлен ном градиенте плотности 306 Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности ЗП [c.578]

Для экспериментального определения коэффициента седиментации строят график зависимости 1п г от времени. Коэффициент седиментации, согласно уравнению II, равен отношению тангенса угла наклона соответствующей прямой к (0 . [c.15]

Дополнительные детали экспериментального определения коэффициентов седиментации описаны подробно в работе Шахма-па °. Строгое обсуждение полного решения уравнения (22-11) дано Вильямсом и сотрудниками . [c.429]

Разрешающая способность метода скоростной седиментации ограничивается погрешностью определения коэффициента седиментации. Эта погрешность обусловлена неточностью определения смещений молекул в кювете ультрацентрифуги, причина которой, в свою очередь, кроется, в основном, в конечности толщины экспериментально фиксируемой кривой, а также в ширине седиментационной границы и ее расплывании во времени вследствие диффузии и полидисперсности. Суммарная погрешность определения абсциссы Хшах максимума седиментационной кривой равна [33] [c.20]

Здесь Q — площадь под седиментационной кривой й — толщина экспериментальной кривой на уровне интенсивности почернения, равной /2 от максимальной, и которая фиксируется с погрешностью Шк. Видно, что величина погрешности Ах существенно зависит от чувствительности оптической системы регистрации, характеризуемой отношением dlQ. Подставляя сюда выражение для дисперсии (Л ) седиментационной кривой (см. стр. ИЗ), несложно получить составляющие погрешности Ах. Так, ди4х )узионное расплывание седиментационной границы приводит к относительной погрешности определения коэффициента седиментации [c.20]

Небольшая седиментация вещества происходит уже во время разгона ротора. Учитывая это, за начало седиментации принимают время, когда скорость вращения ротора достигает скорости, максимальной для данного опыта. Это приближенная поправка, основанная на допущении, что ускорение ротора во время разгона постоянно. Поскольку более точное определение условного времени начала опыта не влияет на наклон графика зависимости %х от времени, ошибка в начале отсчета времени не сказывается на величине коэффициента седиментации. Если начало отсчета определено верно, то прямые линии, соответствующие разным шли-рен-пикам исследуемой смеси, должны сходиться в одной точке, отвечающей положению мениска. При определении коэффициентов седиментации эту точку можно использовать, что особенно удобно в случае медленно седиментирующих компонентов смеси, разрешающихся на шлирен-диаграмме только к концу эксперимента. [c.65]

Методы определения коэффициента седиментации в опытах с градиентами плотности описаны в работе Черлвуда [14]. Эти методы особенно удобны при использовании роторов с подвесными стаканами. Предположим, что исследуемые частицы сферические и уравнения (1.2) и (1.3) выполняются. Тогда, комбинируя эти уравнения, получаем [c.68]

Бурильон и сотрудники также показали, что -кислый гликопротеин может расщепляться протеолитическими ферментами. Изучая действие этих ферментов на препараты, выделенные из плевральной жидкости человека, эти авторы обнаружили, что трипсин наиболее активно расщепляет гликопротеин, а затем в порядке убывания активности идут пепсин, папаин и химотринсин [138]. Смесь, полученная в результате последовательного действия всех трех ферментов, разделялась при зональном электрофорезе на три компонента, а при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — на пять компонентов. При определении коэффициентов седиментации этих фракций были обнаружены очень небольшие различия. Найденные коэффициенты седиментации соответствовали молекулярным весам от 3000 до 3500, Содержание углеводных компонентов в них также было очень сходно, за исключением количества гексозамина. Все гликопептиды содержали одни и те же семь аминокислот (кроме валина), но их молярные соотношения сильно варьировали. На ]Ч-концах были обнаружены четыре различные аминокислоты [25]. [c.92]

В 1963 г. Коэн [3] предложил наслаивать в границеобразующей ячейке клапанного типа небольшой объем раствора фермента на более плотный буферный раствор с субстратами и регистрировать седиментацию зоны, содержащей фермент. Если в результате ферментативной реакции изменяется оптическая плотность раствора, то с помощью абсорбционной оптики можно даже в грубом экстракте наблюдать седиментацию одного лишь интересующего нас фермента в месте его встречи со своими субстратами оптическая плотность будет либо возрастать, либо уменьшаться. Таким образом, для определения коэффициента седиментации нет необходимости добиваться высокой степени гомогенности ферментного препарата. [c.176]

Для определения коэффициента седиментации липопротеин суспендировали в 1 М Na l и центрифугировали. При рассмотрении шлиреновских изображений было обнаружено, что пик появляется у дна ячейки и движется по направлс1шю к ее верху. Объясните, что происходит. [c.348]

Определение коэффициента седиментации в препаративной ультрацентрифуге, В большинстве случаев коэффициент седиментации для многих вирусов животных невозможно определить в аналитической центрифуге, так как для проведения подобных измерений требуются значительные количества изучаемого агента в очищенном виде. В таких случаях для вычисления коэффициента седиментации вирусов используют косвенные методы. При этом скорость осаждения вирусных частиц определяют, измеряя инфекционпость вируссодержащей суспензии после ультрацентрифугирования. Для мелких вирусов коэффициент седиментации можно довольно точно определить в препаративной ультрацентрифуге. При исследовании крупных вирусов возможны ошибки, так как крупные вирусы могут прилипать к стенкам центрифужной пробирки во время ультрацентрифугирования. [c.16]

Центрифугирование препаратов нуклеиновых кислот в градиенте плотности сахарозы используют в основном в двух целях фракционирование ио молекулярному весу (аналитическое и нренаративное) и определение коэффициента седиментации и молекулярного веса. Обычно применяют 5—20%-ный или 15—30%-ный линейный градиент плотности сахарозы [c.177]