Определение активности холинэстеразы

Для определения активности холинэстеразы разработано много способов. Надежные результаты дают методы, основанные на определении количества образующегося продукта, в которых соблюдается линейная зависимость между активностью фермента и количеством образующегося продукта. Несмотря на то, что манометрический метод довольно сложен в выполнении, он в этом отношении (соблюдение линейной зависимости) еще не превзойден. Более простыми являются потенциометрические методы, которые дают весьма точные результаты, особенно при использовании автотитратора, автот матически поддерживающего постоянный pH, вследствие чего исключается влияние pH на активность фермента. Ниже приведен (см. также табл. 10) обзор различных способов определения активности фермента. Подробно описаны манометрический и потенциометрический способы как наиболее пригодные. [c.166]

Сравнительно широкое распространение в последние годы получил метод определения активности холинэстераз, основанный на [c.143]

Современным развитием титрометрических методов определения активности холинэстераз является способ непрерывного потенциометрического титрования при постоянном значении pH. На основа- [c.148]

Применение. В гистохимии в качестве субстрата для определения активности холинэстеразы. [c.328]

Свойства. Белый или желтоватый кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Температура плавления 200—202 С. Растворим в воде. Применение. В гистохимии в качестве субстрата для определения активности холинэстеразы [1], [c.328]

Холин и его эфиры анализируют с помощью ион-селективных электродов см., например, работы Баума и др. [522 — 524]. Эти авторы разработали чувствительные к холину и его эфирам электроды как с жидкой, так и с твердой мембраной, которые можно также применять для определения активности холинэстеразы. [c.182]

Среди методов определения активности холинэстеразы наиболее распространены флуоресцентный и спектрофотометрический [616, 617]. [c.203]

Определение активности холинэстераз ы [c.165]

Определение активности холинэстеразы электрометрическим ДрН-методом Способ может быть использован для определения 50 и концентрации ингибитора [c.172]

Какое значение имеет определение активности холинэстеразы сыворотки крови человека [c.180]

На чем основаны важнейшие способы определения активности холинэстеразы [c.180]

Диагностическое значение имеет определение активности холинэстеразы сыворотки (ложная холинэстераза). Считают, что при легком отравлении активность этого фермента снижается до 50%, при среднем —на 60— 70% и при тяжелом— на 80—90%. Однако строгой зависимости между степенью угнетения холинэстеразы и тяжестью отравления нет. Кроме того, при отсутствии сведений об исходном уровне активности холинэстеразы (а он у разных людей неодинаков) установить степень его снижения у данного больного не представляется возможным. Поэтому у всех работающих с ФОП следует определять активность холинэстеразы крови до начала работы и через каждые 3—4 дня во время нее. Лица, у которых активность холинэстеразы снизилась на 25%, к работе с ФОП допускаться не должны до восстановления этого фермента. [c.58]

ПРШЕНЕНИЕ ЭЛЕКТРОДА С ГАЗОВЫМ ЗАЗОРОМ Ш ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ХОЛИНЭСТЕРАЗ [c.214]

Целью настоящего исследования являлась разработка потенциометрического метода определения активности холинэстераз по скорости гидролиза холиновых эфиров. [c.215]

В указанном отчете приведено описание следующего случая. Сельскохозяйственный рабочий утром готовил раствор тиофоса, затем он весь день е помощью тракторного опрыскивателя обрабатывал растения. У этого человека был респиратор, резиновые перчатки, накидка и обычная рабочая одежда. Под вечер он был обнаружен в поле, он неподвижно сидел на тракторе, раскинув руки, респиратор был одет. Непосредственной причиной смерти явилась аспирация рвотных масс. Отравление тиофосом было установлено посмертным определением активности холинэстеразы. На брюках погибшего и манжетях перчаток был обнаружен тиофос. Очевидно, при приготовлении раствора он вылил на себя концентрированный препарат. Рабочий не знал о том, что тиофое проникает в организм через кожу и поэтому даже не пытался сменить загрязнб1шую одежду и помыться. [c.67]

Т. анализируют спектрофотометрич. методом, основанным на его р-ции с нитропруссидом Na или 5,5-дитио-6ис-(2-ш1тро6еизойной к-той, амперометрич. титрованием в присут. соед. Hg и др. На определении Т. основаны методы определения активности холинэстераз и их ингибиторов. [c.586]

Достоинство метода Хестрина при определении активности холинэстераз состоит в том, что он позволяет исследовать кинетику ферментативной реакции при различных условиях метод достаточно чувствителен, т. е. позволяет работать в широком интервале концентраций субстрата (при необходимости исследований больших концентраций субстрата растворы перед определением могут быть разбавлены) метод позволяет производить массовые определения, однако, являясь удобным для определения активности холинэстераз различного происхождения в стандартных условиях (определенные концентрации фермента и субстрата, стандартное время реакции при условии соблюдения нулевого порядка) [35—42], он не пригоден для кинетических исследований. [c.144]

Большинство методов определения активности холинэстераз основано на измерении скорости образования уксусной кислоты из ацетилхолина (или других карбоновых кислот из ацилхолинов) с использованием рН-метрии. По-видимому, первым методом, [c.144]

В литературе описаны различные варианты метода Мичела, в том числе модификации для целей микроопределения [44—48]. Однако все варианты этого метода, будучи полезными для стандартного определения активности холинэстераз, в особенности при необходимости контроля большого числа образцов, не удовлетворяют нуждам кинетических исследований. Во-первых, по сути метода в ходе энзиматической реакции pH среды изменяется, что оказывает влияние на кинетику процесса. Во-вторых, метод при определении двух значений pH — начального и конечного — не дает представления о кинетике реакции, а позволяет определить лишь суммарное количество распавшегося субстрата. В-третьих, точность метода Мичела далеко недостаточна для кинетических измерений, особенно при крайних значениях концентраций субстрата. Наконец воспроизводимость результатов также недостаточна вследствие нестабильности рН-метров. [c.145]

Невозможность применения методов определения активности холинэстераз с использованием кислотно-основных индикаторов для кинетических измерений связана с теми же их недостатками, которые характерны для метода Мичела, а также и с некоторыми другими, специфическими причинами, как, например, взаимодействие индикаторов с белками неточность визуального определения изменения окраски и невозможность инструментального ее измерения в случае мутных препаратов и т. п. Вместе с тем, эти чрезвычайно простые по осуществлению методы зарекомендовали себя [c.145]

Для оценки силы антихолинэстеразного действия препаратов мы пользовались величиной /50, которую получали при определении активности проб фермента, предварительно экспонированных в течение 10—12 мин. при 38—39° с разными концентрациями ингибитора. Определение активности холинэстераз производилось по принципу, использованному Платт-пером и Галером (1928) с тем отличием, что количество ацетилхолина, оставшееся неразрушенным после контакта с энзимом, определялось не па биологическом объекте, а фотоколориметрически, по методу Хестрина (1949). В качестве источника истинной холинэстеразы использовалась кровь коровы, в качестве источника ложной холинэстеразы — сыворотка крови лошади. [c.463]

Мы поставили задачу разработать доступный и высокочувствительный метод определения указанных дефолиантов, использовав для этого энзимный метод, основанный на способности фосфорорга-нических соединений определенного типа угнетать фермент холин-эстеразу. Используя микрохимический титрационный метод определения активности холинэстеразы в присутствии яда, опубликованный Смирновой [5] для меркаптофоса, мы разработали количественное определение фолекса и бутифоса в растительном материале. [c.130]

Гибсон и Гюильбо [625] предложили два метода определения активности холинэстеразы. В обоих методах используется то обстоятельство, что измеренный стеклянным электродом pH разбавленного трис-буфера при значениях pH, близких к рК (8.1), меняется линейно. Один из методов — это полуавтоматический анализ, рассчитанный на [c.205]

Быстрый полярографический метод определения активности холинэстеразы основан на том, что ацетилтиохолин полярографически неактивен, а образующийся тиохолин, напротив, дает типичную для 5Н-групп анодную ступень. Рост анодной ступени в единицу времени служит мерой активности холинэстеразы [c.170]

Определение активности холинэстеразы сыворотки в аппарате Варбурга . Более подробно с условиями работы с аппаратом Варбурга, требующей некоторых практических навыков, можно познакомиться в статье Буго (см. раздел 5, сс. °). [c.171]

Фотометрическое определение активности холинэстеразы 5 . Этот быстро осуществляемый микрометод основан на реакции тиохолина, образующегося при ферментативном расщепле-ции ацетилтиохолина 5,5 -дитио-бис-(2-нитробензойной) кислотой (ДТНБ). Механизм этой цветной реакции обнаружения тиола описан в р деле 5.1.1.9. [c.173]

Все приведенные выше способы определения активности холинэстеразы, соответственно модифицированные, могут быть использованы и для определения ингибиторов. Исключением является маноме- [c.173]

Гистологически можно отметить спазм бронхов и отдельных артериол, кровоизлияния во внутренних органах, дистрофические изменения в клетках мозга и нервных узлах. Важное значение имеет определение активности холинэстеразы вещества мозга и внутренних органов. [c.59]

Ацстилхолиновый электрод применим для анализа органофос-фатных пестицидов, поскольку последние проявляют ацетилхо-лииэстеразпую активность [57]. Кроме того, электрод использовали для определения активности холинэстеразы в крови и ее составляющих (сыворотке, эритроцитах [58] см. также гл. XI). [c.228]

Лучший из известных колориметрических методов определения холинэстеразы основан на измерении количества ацетилхолина, остающегося к концу реакции с помощью методики Хестрина [43]. Использование этой методики для определения активности холинэстеразы описали Меткаф [70], Роббинс и др. [901, Флейшер и др. [33] и Винсент и Сегонзак [108[. Преимущество метода состоит в его исключительной чувствительности, вследствие чего он особенно пригоден для измерения очень малых количеств фермента, например в микроопределениях, применяемых для выявления отравлений ФОС, или в исследовании небольших остаточных количеств ФОС у тяжело отравленных животных. Многие ингибиторы холинэстеразы создают помехи при пользовании этим методом, и поэтому он малоудобен для изучения угнетения холинэстеразы 1п уТ1го. [c.435]

Применение электрода с газовым зазором для определения активности холинэстераз /Никольская Е.Б.,Волонт Л.А., Рудаков В.В. - В кн. Ионный обмен и ионометрия. Д., 1982,вып.З, с. 214-219. Ил. - г, табл. - I, библиогр. - 9 назв. [c.235]

Часто возникает вопрос, в какой мере определение активности холинэстеразы может быть использовано для оценки тяжести поражения Рассмотрим прежде всего ситуацию (не встречающуюся при отравлениях вследствие несчастного случая), когда точно известна активность фермента у данного субъекта до отравления. Обычно у людей может быть изучена только активность холинэстеразы эритроцитов и плазмы. Как показали Гроб и др. [86а], маловероятно, чтобы активность этих ферментов могла находиться в причинно-следственной связи с симптомами отравления. Скорее всего опалишь отражает положение вещей в более важных участках, какими, по-видимому, являются центральная нервная еистема, нервно-мышечное соединение и некоторые ганглии. Во всех случаях только истинная холинэстераза может считаться жизненно важным ферментом, и поэтому не удивительно, что уровень холинэстеразы плазмы служит очень плохим показателем отравления особенно такими избирательными ингибиторами, как ДФФ. Фермент плазмы может быть почти полностью угнетен без появления тяжелых симптомов отравления. Более показательной является холинэстераза эритроцитов, возможно, вследствие ее сходства с жизненно важным ферментом. При отравлении человека ДФФ (3 мг/кг) первые симптомы появились, когда уровень холинэстеразы эритроцитов снизился до 70%, а тяжелые симптомы — когда активность стала ниже 40%. В то же время при применении меньших доз (1 мг/кг) активность фермента эритроцитов могла быть снижена до 25% без появления симптомов [86а]. Такое же несоответствие обнаружено у крыс, собак и обезьян, отравленных ДФФ [107]. [c.223]

Определение активности холинэстеразы у коров показывает, что в их организме происходит некоторая активация кораля, связанная с образованием кислородного аналога. Этого не наблюдается у коз. Никаких других прямых доказательств образования кислородного аналога нет, если не считать того, что в одном обра зце кала коровы (через 6 суток после нанесения) 6% радиоактивности находилось в виде кислородного аналога и 32% в форме неизмененного кораля. [c.259]

Широко применяемый для определения активности холинэстеразы бикарбонатный буфер (буфер Аугустинссона Кзо ) содержит Na+, К+ и Са +. Однако на основании многочисленных опытов (Смеллман и Волф [96], Чедвик идр. [19]) стало известно, что активирующее действие солей на холинэстеразу крайне неспецифично. Поэтому нет необходимости вводить в буфер несколько солей. Вместо них можно использовать Na l в соответствующей концентрации. [c.433]

Определение в моче п-нитрофенола — более чувствительная проба, чем определение активности холинэстеразы крови, а поэтому может быть рекомендовано для дифференциального диагноза отравления, равно как в качестве контроля за состоянием здоровья работающих (Rossi, Argento, 1964). [c.236]

Набор для определения активности холинэстераз крови (микроэкспресс-методом) АХЭ-1 [c.651]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология