Холинэстераза, ингибиторы

Рис. 42. Титрование активных центров холинэстеразы ингибитором Гд-42

Во время хирургических операций (чаще по поводу аппендицита) под местной анестезией вырезали у людей кусочки кожи. При определении локализации холинэстеразы в норме тотчас после вырезания их фиксировали в 10% нейтральном формалине. В опытах по определению изменения активности холинэстеразы под воздействием фосфорорганического ингибитора на вырезанный кусочек кожи перед его фиксацией наносили водную эмульсию вещества, через 15—30 мин или 1 ч ее удаляли с помощью фильтровальной бумаги. И лишь после этого кожу фиксировали в нейтральном формалине. [c.141]

Токсическое действие. Выраженный ингибитор холинэстеразы, повышает чувствительность организма к ацетилхолину. Поражает центральную нервную систему. Усиливает процесс возбуждения, повышает тонус гладкой мускулатуры. Усиливает секрецию желез. [c.772]

В связи с этим трудно согласиться с мнением О Брайна [12] о возможности, хотя и с некоторыми ограничениями, использования этой величины для сопоставления свойств фосфорорганических соединений, являющихся типичными необратимыми ингибиторами холинэстераз. [c.114]

Представления относительно кинетики ингибирования ферментов в присутствии субстрата были использованы при исследовании взаимодействия холинэстераз с фосфорорганическими ингибиторами. Результаты сопоставления теории с опытными данными, а также дальнейшее развитие теории будут даны в гл. X. [c.122]

Рис. 29. Зависимость от I для торможения активности холинэстеразы необратимым ингибитором (армином) при разных концентрациях ингибитора / —2,5-10- Ж 2— Ы0-7М 5 —0,6 10- i 0,6-10-7 Л1 5—0,4-10-7 Л1

В качестве примера, иллюстрирующего применение этого метода, на рис. 29 приведены результаты исследования кинетики торможения активности холинэстеразы сыворотки крови лошади фос-форорганическим ингибитором — армином [99]. Из данных рисунка видно, что только при определенной концентрации ингибитора зависимость llv t от t является линейной. Вычисленная на основании найденной концентрации фермента и скорости гидролиза ацетилхолина величина молекулярной активности холинэстеразы оказалась равной 7-10 мин. , что удовлетворительно совпадает с результатами, полученными при использовании других методов. [c.125]

Вопрос об интерпретации термодинамических констант реакций ингибирования ферментов столь же сложен, как и для реакций с субстратами, и в литературе освещен в еще меньшей степени. Имеющиеся экспериментальные данные о термодинамике взаимодействия холинэстераз с ингибиторами типа четвертичных солей алкиламмония говорят о важной роли энтропийного фактора в этом процессе, что свидетельствует о значении анионных центров фермента в поддержании его трехмерной структуры, необходимой для организации активного центра (см. стр. 190). [c.136]

При исследовании ингибиторов близкого строения, для которых частота соударений с активным центром фермента может быть принята приближенно одинаковой, суммарное значение предэкспонента и величина экспериментально определяемой энергии активации могут быть использованы для сопоставления между собой этих ингибиторов и выяснения влияния их химического строения на величину активационного барьера и роль структурного (энтропийного) фактора в ингибировании. Большой экспериментальный материал, полученный при изучении ингибирования холинэстераз фосфорорганическими соединениями, свидетельствует о том, что в ряде случаев энтропийный фактор имеет определяющее значение для реакционноспособности ингибиторов (см. гл. X). [c.137]

Преимущества этого метода перед другими состоят в следующем при его применении сохраняется постоянное значение pH и, следовательно, нет опасности изменения активности фермента вследствие изменений его ионизации метод сразу дает постоянную по большому числу точек кинетическую кривую, позволяющую рассчитывать необходимые кинетические константы ферментативной реакции метод позволяет измерять кинетику процесса практически при любых условиях расход времени на измерение скорости реакции весьма невелик при условиях нулевого порядка реакции обычно бывает достаточно проводить титрование в течение 3— 4 мин., зафиксировав 8—10 точек расхода щелочи метод может быть использован для исследования кинетики взаимодействия холинэстераз с ингибиторами. [c.149]

Однако изложенные выше методы не позволяют получать вполне индивидуальные холинэстеразы достаточной для определения молекулярного веса степени чистоты, что в значительной степени затрудняет прямое определение молекулярной активности. В связи с этим были разработаны специальные методы измерения молекулярной активности, основанные на использовании специфических ингибиторов. [c.166]

Представление о чисто обратимом взаимодействии карбаматов с холинэстеразами уже давно, однако, представлялось не вполне правильным. Отмечалось, что в результате реакции эзерина с холинэстеразами ингибитор претерпевает химические превращения при диализе или разбавлении, когда восстанавливается активность фермента, возврата всего количества неизменного эзерина не происходит. Известно, что карбаминоилхолин XII) гидролизуется, хотя и с очень небольшой скоростью, при действии холинэстераз, [c.195]

Холинэстеразы с высокой скоростью гидролизуют холиновые и тиохолиновые эфиры. Возможность аналитического применения холинэстераз обусловлена тем, что их активность в заметной мере зависит от присутствия в растворе токсичных веществ (ингибиторов) [83,84], причем некоторые из них действуют необратимо, а другие - обратимо. К необратимым ингибиторам холинэстераз относятся эфиры фосфорной, фосфо-новой и пирофосфорной кислот, в том числе и фосфорорганические пестициды, многие из которых являются суперэкотоксикангами. Действие этих соединений на холинэстеразы специфично они ковалентно связываются с активным центром фермента и дезактивируют его. Из обратимых ингибиторов интерес представляют ионы ртути, свинца и других тяжелых металлов. Высокая чувствительность холинэстераз к присутствию токсичных веществ обусловливает и область их применения сельское хозяйство, экология, токсикология и др. [c.289]

Для удобства применения холинэстеразы иммобилизуют в по.шмер-ные пленки или гели. При этом существенно увеличивается устойчивость фермента к влиянию внешних факторов. Так, при иммобилизагщи холинэстеразы в желатиновый гель срок ее хранения составляет 2-3 года, а при непрерьганой работе активность препарата падает на 20% лишь через 10 дней. Наряд) с повьпиением стабильности иммобилизация хо.пинэстераз обеспечивает многократное использование препарата. Заметим, что при определении необратимых ингибиторов, например фосфорорганических пестицидов, повторное использование фермента в каждом случае требует специальных исследований В качестве реактиваторов применяют гидро-ксиламин, оксимы и др [c.290]

Оптимизация определений необратимых ингибиторов холинэстераз-достаточно сложный и трудоемкий процесс. Поэтому при вьшолнении анализа строго соблюдают последовательность операций по подбору фер-мергга, составу реакционной среды, концентрации субстрата и др Эго позволяет снизить пределы обнаружения ингибитора и повь сить то шость определений [c.291]

Определение обратимых ингибиторов холинэстераз менее распространено Тем не менее в настоящее время разработано множество тестов на основе холинэстераз для определения ионов тяжелых металлов и хлорорганических пестицидов [89,90], являющихся обратимыми ингибиторами Интерес представляет способ оценки общей токсичности водопроводной воды, основанный на суммарном эффекте снижения фермета-тивной активности холинэстеразы при введении в систему субстрат-фермент анализируемой пробы. Пределы обнаружения обратимых ингибиторов существенно зависят от природы ингибитора и субстрата. [c.291]

Образующийся меркаптид ртути восстанавливается в боратных буферных растворах при -0,55 В, что проявляется на вольтамперограммах в виде острого пика Чувствительность сигнала к изменению концентрации тиола достаточно высока, поскольку в этом случае по существу используется принцип инверсионной вольтамперометрии. Применение электронакоиления одного из продуктов ферментативной реакции позволяет значительно снизить нижнюю границу определяемых концентраций ингибиторов холинэстераз В некоторых случаях эта величина на несколько порядков меньше, чем в других электрохимических методах. [c.295]

Гистохимический метод позволил определить локализацию и изменения активности холинэстеразы в коже животных и человека при аппликации ФОИ. Тот факт, что холинэстераза, локализующаяся в нижних слоях эпидермиса и вокруг волосяных фолликулов, инактивируется почти одновременно и с одинаковой интенсивностью, по нашему мнению, свидетельствует о поступлении ингибитора трансфолликулярно и трансэпидермально. Эту особенность изученных веществ также необходимо учитывать при объяснении сравнительно легкого их всасывания в кожу. [c.180]

Лошадкин И. А., Смирнов В. В. Обзор современной литературы по химии и токсикологии фосфорорганических ингибиторов холинэстераз.— Приложение к ки. Сондерс Б. Химия и токсикология органических соединений фосфора и фтора. М., 1961, [c.188]

ГАЛАНТАМИН (нивалин), алкалоид из клубней подснежников. Гидробромид Г. (крист,, трудно раств. в воде, не раств. в сп.) — обратимый ингибитор холинэстеразы. ГАЛЛЕИН [пирогаллолфталеин 4,5,6-триокси-9-(2-карбок-сифенил-ЗН-ксантен-З-он) ф-лу см. в ст. Триоксифлуоро-ны], темно-красные крист, не растворяется в воде, раств. в СП., водно-спиртовых р-рах к-т и щелочей. Реагент для фотометрического определения Sn(IV) и ЗЬ(П1) в водно-спиртовой [c.117]

С (никрата — 203—204 °С) хорошо раств, в метаноле, хлороформе, бензоле. Обратимый ингибитор холинэстераз. Гидрохлорид Д. нримен. при центр, и нериферич. нарушениях двигат. нервов. [c.148]

К A. . относятся ингибиторы холинэстеразы (см. Лити-холииэстеразиые средства), моноаминооксидазы (напр., ниаламид см. Антидепрессанты) и карбоангидразы (иапр., диакарб, см. Диуретические средства) Ряд А.с. используют в тех случаях, когда заболевание связано с активацией ферментных процессов, в частности протеолиза и фибринолиза. Большинство таких А. с.-полипептиды, блокирующие сразу неск. родственных ферментов (напр., плазмин, трипсин и др. протеазы). Более специфичны низкомол. ингибиторы фибринолиза, напр. -аминокапроновая к-та. [c.183]

Т. анализируют спектрофотометрич. методом, основанным на его р-ции с нитропруссидом Na или 5,5-дитио-6ис-(2-ш1тро6еизойной к-той, амперометрич. титрованием в присут. соед. Hg и др. На определении Т. основаны методы определения активности холинэстераз и их ингибиторов. [c.586]

Хинолизидиновые алкалоиды, содержащиеся в люпине или соланине картофеля, оказывают нейротоксическое действие на человека (при дозе свыше 3 мг на 1 кг массы тела). Эта токсичность, которая чаще отмечается осенью, обусловлена подавлением синтеза ингибитора холинэстеразы, вызывающим блокаду синастической трансляции (передачи импульсов через синапсы). Некоторые алкалоиды обладают способностью нейрологического [c.338]

Бензоат 1,2,5-триметилпиперидола-4 (Р-изомер) ингибирует гидролиз бутирилхолина, катгишзируемый холинэстеразой Определите тип ингибирования и рассчитайте копстанту диссоциации комплекса фермент-ингибитор. Экспериментальные данные [c.239]

Ингибиторы ферментативных каталитических реакций часта подразделяют на обратимо и необратимо действующие. Эта классификация основана на легкости отделения ингибитора от фермента при помощи физического метода типа диализа. Так, например, эзерин описан как обратимый ингибитор, в то время как фюсфор-содержащие соединения подобно диизопропилфосфофториду (ВРР) принадлежат к необратимым ингибиторам холинэстеразы. Однако, поскольку рассматриваются механизмы ингибирования, эта классификация только вносит неопределенность, так как из нее вытекает, что обратимые и необратимые ингибиторы действуют различным образом в действительности оба типа ингибиторов действуют, соединяясь с ферментом с образованием неактивных комплексов, обладающих весьма различными константами диссоциации . Необратимые ингибиторы образуют комплексы с очень малыми константами диссоциации и поэтому удаляются из комплекса путем диализа только очень медленно, тогда как обратимые ингибиторы образуют комплексы с высокими константами диссоциации и поэтому на всех стадиях удаления присутствует избыток несвязанного ингибитора, поддающегося диализу. Однако более полезным оказывается подразделение ингибиторов на конкурентные и неконкурентные (хотя многие ингибиторы обнаруживают смешанное поведение), так как эти ингибиторы действуют различными путями и кинетические уравнения для них разные. При конкурентном торможении ингибитор соединяется с тем же самым [c.121]

Как видно из данных табл. 2, присутствие антиокислителей вызывает снижение токсичного действия эфира. Наиболее активным в этих условиях является 4,4 -диамиподифенилдисульфид (дитиодианилин). Будучи добавлен в концентрации 0,02 вес. % этот ингибитор уменьшил почти вдвое степень торможения активности холинэстеразы и в 1,5 раза изменение показателя функционального состояния задних конечностей животного. Другие испытанные антиокислители были менее активны. [c.232]

Природный алкалоид эзерин, не содержащий фосфора и фтора, давно известен как сильный ингибитор холинэстеразы, но даже в данном случае требуются концентрации 10 М более того, его действие обратимо, тогда как действие ДФФ необратимо. Сондерс и Уорти приготовили ДФФ, содержащий радиоактивный фосфор Это позволило Боурснеллу и Уэббу з показать, что приблизительно одна молекула ДФФ соединяется с одной молекулой фермента, полностью дезактивируя его. [c.533]

В аналитических исследованиях в связи с иммобилизованными ферментами необходимо упомянуть ферментные электроды [21], ферментные термисторы [40] и ферменты, ковалентно связанные с полистиролом или найлоном для целей автоматического анализа [24, 46]. Гильбо [22], например, использовал ферментные электроды для определения глюкозы, мочевины, L-аминокислот, галактозы, ацетилхолина и дегидрогеназ. Ферхмеиты, связанные с капиллярными реакторами, использованы в соединении с автоанализатором фирмы Te hni on для анализа различных субстратов, таких как глюкоза, мочевина и мочевая кислота [55]. Гудзон и др. [20] описали применение иммобилизованной холинэстеразы для контроля воздуха и воды, для обнаружения ингибиторов фермента, таких, как пестициды. Система характеризуется чрезвычайной чувствительностью. Например, органофосфат параоксон может быть обнаружен в количествах 1 10 в воздухе и воде. [c.442]

При этом необходимо иметь в виду, что, работая с неочищенными ферментными препаратами (гомогенатами или экстрактами мозга, мышц и т. д.) и используя в качестве субстрата ацетилхолин, исследователь не имеет возможности различить холинэстеразу и ацетил-холинэстеразу и определяет суммарную скорость реакции, связанную с действием обоих типов фермента. Для изучения свойств отдельных ферментов необходимо их препаративное разделение с соответствующим контролем индивидуальности. В практике работы принято использование специфических субстратов, расщепляющихся одним и не расщепляющихся другим типом фермента, либо использование специфических ингибиторов. В последнем случае, если ингибитор избирательно тормозит действие] одного из ферментов, можно в качестве субстрата использовать ацетилхолин. Для измерения активности ацетилхолинэстеразы в присутствии холинэстеразы принято использование в качестве субстрата ацетил-Р-метилхолина для измерения активности холинэстеразы — бутирилхолина. [c.142]

Этот метод дает удовлетворительные результаты при изменении концентрации ацетилхолина не менее чем на 25%, что не позволяет исследовать начальный участок кинетической кривой. Самый по себе метод не дает кинетической кривой, и для ее построения необходим анализ значительного числа проб, что создает большие технические трудности. Наконец следует отметить, что метод Хестрина не вполне специфичен и при наличии в анализируемой пробе эфиров карбоновых кислот (а также ангидридов, галоидангидридов и тому подобных активных ацильных производных) получаются неудовлетворительные результаты. Это особенно приходится иметь в виду при работе с ингибиторами холинэстераз, многие из которых имеют строение эфиров и ангидридов. [c.144]

Автоматизированный метод особенно удобен для исследования кинетики взаимодействия холинэстераз с ингибиторами, протекающего часто с такой высокой скоростью, что ее измерения вручную неэффективны. Проводя реакцию в отсутствие ингибитора (рис. 41, прямая I) и в его присутствии (рис. 41, кривая 2), можно получить на ленте самописца кинетические кривые, обработка которых указанным в гл. VIII методом (см. стр. ИЗ) позволяет рассчитать константу скорости ингибирования холинэстеразы. [c.156]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология