Фосфоцеллюлоза (Ф-целлюлоза)

Рис. 4-46. Три типа матриксов, используемых для хроматографии. При ионообменной хроматографии (А) нерастворимый матрикс содержит ионы, задерживающие молекулы с противоположным зарядом. Для разделения молекул используются следующие матриксы диэтиламиноэтилцеллюлоза (ДЭАЭ-целлюлоза) - заряжена положительно карбоксиметилцеллюлоза (КМ-целлюлоза) и фосфоцеллюлоза - заряжены отрицательно. Силы взаимодействия между молекулами в растворе и ионообменником определяются ионной силой и pH элюирующего раствора, которые для достижения эффективного разделения можно варьировать определенным образом (как на рис. 4-47). При хроматографии по методу гель-фильтрапии (Б) матрикс инертен, но содержит поры. Низкомолекулярные соединения проникают внутрь частиц матрикса. Оказавшись при этом в относительно большем объеме, они проходят через колонку медленнее. В качестве матрикса можно использовать зерна поперечно-сшитого полисахарида (декстран или агароза). Поскольку в продаже имеются полисахариды с самым различным размером пор, их можно использовать для фракционирования молекул с молекулярной массой от 500 до 5 х 10 дальтон. При аффинной хроматографии (В) используется нерастворимый матрикс, ковалентно связанный со специфичными лигандами (антителами или субстратом ферментов), которые присоединяют определенный белок. Связываемые иммобилизованным субстратом молекулы фермента можно элюировать концентрированными растворами субстрата в свободной форме, а молекулы, связанные с иммобилизованными антителами, можно элюировать за счет диссоциации комплекса антитело антиген концентрированными растворами соли или растворами низкого или высокого pH. Однократная хроматография на такой колонке позволяет

Фосфоцеллюлоза Целлюлоза Ф (Р) Целлюлоза фосфорилированная [c.536]

Целлюлоза, фосфоцеллюлоза или ДЭАЭ-целлюлоза [c.306]

Ф-Целлюлоза Фосфоцеллюлоза Двухосновная кислота. рК 1,5 6. [c.436]

Р-целлюлоза Фосфоцеллюлоза Катионообменная хромато- [c.239]

Стадия 5. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе, Вещество после стадии 4 наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюло-зой при значениях pH и ионной силы, обеспечивающих адсорб цию на колонке всех нуклеиновых кислот без связывания полимеразы. Эга стадия необходима потому, что небольшие количества нуклеиновых кислот, остающиеся после стадии 4, будут мешать адсорбции на фосфоцеллюлозе на следующей стадии. Свободный объем колонки собирают для использования на стадии 6. [c.220]

Очень похожий вариант очистки того же белка был независимо отработан в другой работе, где на первом этапе динамической хроматографии на DEAE-целлюлозе осуществляли элюцию ступенчатым градиентом 0,05—0,1—0,22 М КС при pH 7,4, а на втором — использовали колонку фосфоцеллюлозы, откуда eIF-2 элюировали линейным градиентом 0,4—0,7 М КС1 при pH 7,8. Некоторый сдвиг диапазона концентраций соли к большим значениям и увеличение pH связаны, очевидно, с тем обстоятельством, что фосфоцеллюлоза является более сильным катионообменником, чем карбоксиметил-целлюлоза [Kaempfer et al., 1979]. [c.307]

В качестве ионитов чаще всего используют материалы на гидрофильной основе — целлюлозе, декстране, силикагеле или пористых стеклах. Эти материалы превращаются в производные, несущие положительно заряженные анионообменные группы или отрицательно заряженные катионообменные группы. Так, на основе целлюлозы путем соответствующих химических обработок получают ди-этиламиноэтилцеллюлозу (ДЭАЭ-целлюлозу) и фосфоцеллюлозу, функциональные группы которых связаны через гидроксигруппы с остатками глюкозы [c.235]

При фракционировании белков обычно применяют иониты, содержащие карбоксиметильную и диэтиламиноэтильную функциональные группировки, однако эти иониты не вполне подходят для разделения пептидов. Как правило, почти все кислотные пептиды адсорбируются на катионите при pH 3,0—3,5 в буфер ном растворе с низкой ионной силой, откуда могут быть элюи рованы при рн 6—9 и при более высокой ионной силе. Карбо ксилсодержащие иониты слабо диссоциированы при pH 3, и следовательно, обладают пониженной емкостью. Кроме того в разбавленных электролитах, т. е. в условиях проведения сорб ции, слишком велика буферная емкость ионита. Скачкообразное изменение pH элюента приводит на практике к одновременному элюированию группы пептидов. Аналогичные недостатки свойственны ионитам с ВЕАЕ-группой, особенно при работе с летучими буферными растворами. Изменение ионной силы и значения pH во время элюирования вызывает сжатие столбика сорбента, нарушение скорости потока и искажение профиля элюирования. В наибольшей степени этот эффект выражен у ионитов на основе слабосшитых гелей, однако в какой-то степени это свойство характерно и для модифицированных целлюлоз. И тем не менее некоторые типы ионитов на основе целлюлозы находят применение для разделения небольших пептидов. К ним относятся фосфоцеллюлоза, ЗЕ-целлюлоза, 8Р-целлюлоза и РАЕ-сефадекс. [c.411]

Рекомендуют использовать ионит IV (Merk) [37], сочетание дауэкса с амберлитом [52], а также дауэкс 50W-X8 [51, 53]. При исследовании метаболизма пиридоксола (у крыс) использовали фосфоцеллюлозу, активированный уголь, DEAE-целлюлозу [54]. [c.191]

Для разделения смесей птеридиновых производных обычно используют колонки с ионообменной целлюлозой. Колонки с фосфоцеллюлозой используют главным образом при получении синтетических смесей птеридинов [69 —72], а также при выделении соединений этого, типа из биологических материалов [73, 74]. Для выделения птеридинов из природных материалов используют ОЕАЕ-целлюлозу [42, 69, 75—78], дауэкс 1-Х2 [79] и дауэкс [c.195]

Было показано, что фосфоцеллюлоза в натриевой, калиевой или аммониевой форме может быть использована для разделения фосфолипидов. В противоположность ДЕАЕ фосфоцеллюлозные колонки нуждаются в оводнении для связывания фосфолипидов, однако с увеличением объема воды требуется больше метанола в его смеси с хлороформом для элюирования фосфолипидов. Насыщение целлюлозы водой можно достичь путем промывания колонки перед хроматографированием 10 колонными объемами метанола, содержащего необходимое количество воды. При такой обработке фосфатидные фракции элюируются из колонки минимальным объемом растворителя, причем нейтральными растворителями элюируются как амфионные, так и кислые фосфолипиды. [c.81]

Ацетат целлюлозы получают, ацетилируя фосфоцеллюлозу (Шлейхер и Шулль, 0,9 мэкв г) уксусным ангидридом в ледяной уксусной кислоте в присутствии серной кислоты в качестве катализатора [2]. [c.149]

Первоначально Баутц и Холл [2] пришивали ДНК к ацетилирован-ной фосфоцеллюлозе путем кипячения их смеси в пиридине в присутствии дициклогексилкарбодиимида. Позднее Болтон и Мак-Карти [3] нашли, что для фиксации ДНК отнюдь не обязательно нришивать ее ковалентной связью к какой-то новерхности, поскольку большие куски ДНК можно закрепить в подходящем геле. Они предложили метод, согласно которому ацетат целлюлозы превращают в гель, обрабатывая его пиридином и 1 ilf Na l в присутствии ДНК. В том и другом методе степень связывания ДНК составляет около 70%. [c.149]

В основе ионнообменной хроматографии лежит реакция ионного обмена между белками, растворенными в воде или в разбавленных буферных растворах, и различными ионитами. Раньше в качестве их использовались ионообменные смолы. В настоящее время синтезировано много новых ионообменников на целлюлозной основе. Например, катиониты с кислыми группами карбокси-метилцеллюлоза, фосфоцеллюлозы и др. аниониты с основными группами диэтиламиноэтил- триэтиламиноэтилцеллюлоза, актеола и др. Все перечисленные иониты представляют собой эфиры, образованные путем эстерификации гидроксильных групп целлюлозы с помощью галоидозамещенных соединений (например, монохлоруксусной кислоты, диэтиламина, хлор-этил а мина). [c.128]

ЛИ имеют дело с ферментами, связывающими фосфорилирован-ные субстраты. Путем адсорбции на фосфоцеллюлозе обычно очищают ферменты, воздействующие на нуклеиновые кислоты. Несколько тРНК-синтетаз было успешно элюировано с фосфоцеллюлозы с помощью РНК-субстратов [61]. Глюкозо-6-фос-фат — дегидрогеназа [63], гексокиназа [63] и глюкозофосфат-изомераза [56] также могут связываться с фосфоцеллюлозой и специфически элюироваться с нее в этих случаях можно предполагать, что специфическое действие проявляют фосфорилиро-ванные невосстанавливающие концы целлюлозы (рис. 4.31). Но в большинстве других случаев фосфоцеллюлозу следует рассматривать просто как ионообменник, поведение которого было описано в предыдущем разделе. [c.145]

И существуют некоторые готовые нерастворимые материалы имитирующие субстрат или являющиеся настоящими субстрата-тами, например крахмал (для амилаз — ферментов, участвующих в метаболизме гликогена), целлюлоза (для целлюлаз) и. фосфоцеллюлоза (см. выше), во всех остальных случаях аффинные адсорбенты необходимо синтезировать, ковалентно соединяя лиганд с подходящим носителем. При выборе носителя руководствуются теми же соображениями, что и при использовании его в качестве ионообменника — а именно носитель должен быть пористым гидрофильным полимером, который можно производить в виде частиц нужного размера, что обеспечивает свободный доступ макромолекул к соединенному с носителем лиганду и адекватный поток буфера в наполненной этим носителем колонке. При работе с глобулярными белками очень широко используются сферические гранулы агарозы, имеющие предел исключения, равный примерно 10 дальтон однако применяются и другие адсорбенты, которые в ряде случаев могут обладать теми или иными преимуществами. В настоящее время все большее распространение получают поперечно-сшитые гранулы агарозы, так как они не разрушаются и сохраняют свои размеры как под давлением, так и при смене буфера или растворителя. Обычно применяются сефароза-4В и сефароза L6B (Pharma ia), а также агарозы фирмы Bio-Rad. Здесь мы только кратко коснемся методов присоединения лиганда к матрице более полно этот вопрос освещен в последних публикациях, посвященных исключительно технике аффинной адсорбции [71—73]. Ниже перечислены основные требования к аффин-ной адсорбции. [c.147]

В завершении обсуждения применения для очистки рестриктаз сорбентов, для которых или предполагается, или действительно реализуется биоспецифическая сорбция, хотелось бы обратить внимание на ФР II. В общем случае она представляет собой катионит, содержащий присоединенные к глюкозным остаткам целлюлозы фосфогруппы. В этом отношении этот сорбент в какой-то мере имитирует углеводно-фосфатный остов ДНК. Вопрос о движущей силе взаимодействия рестриктаз с этим сорбентом не исследован. Однако известные факты о сильном связывании фосфоцеллюлозой рестриктаз, являющихся кислыми белками, при значениях pH, значительно превышающих их изоточку [74, 120, 184, 196, 254] склоняют к предположению [c.157]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология