Галактозамин определение

Для определения аминосахаров обычно применяются колориметрические методы, предложенные Морганом и Эльсоном. Существуют два таких метода метод Моргана — Эльсона известный также под названием непрямого метоДа Эрлиха, и метод Эльсона—Моргана . Метод Моргана — Эльсона пригоден для определения микроколичеств N-ацетиль-ных производных аминосахаров (20—50 мкг). Он состоит в непродолжительном нагревании N-ацетилгексозамина с раствором соды при pH 10,8 с последующей обработкой солянокислым раствором /г-диметиламинобенз-альдегида (реактив Эрлиха), что приводит к образованию хромогена, содержащего фурановое кольцо (см. стр. 274), и к возникновению интенсивной красной окраски. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют при 550 ммк. Присутствие в анализируемом субстрате лизина и обычных моносахаридов искажает результаты анализа, так как возникающие хромогены дают с реактивом Эрлиха окрашивание с максимальной оптической плотностью при 560 ммк Все гексозамины D-ряда образуют, по-видимому, один й тот же хромоген, поскольку при этом разрушаются все асимметрические центры, кроме С5. Однако интенсивность окраски в случае М-ацетил-О-галактозамина в четыре раза слабее интенсивности окраски М-ацетил-О-глюкозамина [c.280]

Определение глюкозамина и галактозамина в смеси [c.217]

Определение глюкозамина, галактозамина, [c.322]

Разделение, определение и характеристика 2-амино-2-дезокси-0-глюкозы (D-глюкоз-амина) и 2-амино-2-дезокси-0-галактозы (D-галактозамина) в биологических материалах с помощью газо-жидкостной распределительной хроматографии. [c.138]

Аминосахара характеризуются тем, что у них гидроксильная группа замещена аминогруппой. Важнейшими аминосахарами являются глюкозамин и галактозамин, которые широко распространены в животных и микроорганизмах в виде полимеров и муко-соединений. Хитин, основной полисахарид оболочек гиф у большинства грибов, представляет собой полимер Ы-ацетилглюкозамина. Определение незначительных количеств аминосахаров в экстрактах тканей чрезвычайно затруднительно. Обычно считают, что аминосахара не содержатся в тканях высших растений. Однако полученные недавно данные показывают, что в некоторых растениях они присутствуют, хотя и в очень малых количествах. Имеются данные, что в пыльце содержится полимер, дающий при гидролизе В-глюкоз-амин, и что это же соединение является компонентом растительных гликолипидов. [c.115]

Значительно чаще встречается болезнь Тея - Сакса, при которой из-за отсутствия лизосомного фермента М-ацетилгексоз-аминидазы, осуществляющего гидролиз специфической связи между остатками К-ацетил-В-галактозамина и В-галак-тозы в полярной голове молекулы ган-глиозида (рис. 21-21), в мозгу и селезенке накапливаются ганглиозиды определенного типа. Вследствие того что расщепление ганглиозидов прекращается на одном из промежуточных этапов, происходит накопление больших количеств частично расщепленных ганглиозидов. [c.643]

Определение кристаллической структуры хлоргидрата р- )-галактозамина 6H11O5NH2 H I показало [251], что молекула в кристалле является р-изомером (1е2еЗе4аЬе) с обычной l-пиранозидной конформацией кресла. Экваториальная связь С(1)—0(1) на 0,03А укорочена относительно других связей С—О. Циклический атом О водородные связи не образует. [c.136]

Присутствие белков в высоких концентрациях усиливает поглощение при 492 ммк, но максимум поглоп1,ения соответствует большим длинам волн. Влияние этих примесей можно почти полностью исключить для этого после завершения реакции реакционную смесь встряхивают с равным объемом хлороформа. Чтобы удалить эмульгированный х горо-форм из водной фазы, жидкость центрифугируют или оставляют на ночь для отстаивания [9] и спектрофотометрпруют водную фазу. Оптическая плотность, обусловленная гексозамииом, возрастает примерно на /3 по сравнению с первоначальной. Точность количественного определения увеличивается при применении дихроматических измерений при 492 и 520 ммк. Разность />490 — -Опго только на 25% меньше, чем 492, и является линейной функцией концентрации гексозамина. Величина коэффициента экстинкции для п-галактозамина на 5%1 меньше его величины для ю-глюкозамина. Окраска раствора устойчива. [c.51]

В течение длительного времени большой интерес исследователей привлекали гексозамины. Разработаны превосходные газохроматографические методы определения этих соединений. Впервые разделение гексозаминов методом газовой хроматографии было выполнено Джонсом и сотр. [204]. Эти авторы разделили аномер-ные ацетаты /)-глюкозамина и -галактозамина на колонке, содержащей 5% неопентилгликольсебацината на стеклянных шариках (в головной части колонки насадка состояла из стеклянных шариков с 1% 8Е-30 и была нагрета до 214 °С). [c.251]

Различные типы моносахаридов сильно различаются по устойчивости к кислотам (стр. 168 и сл.). Гексозамины представляют собой группу, наиболее устойчивую к расщеплению кислотами, но и они менее устойчивы, чем большинство аминокислот так, при нагревании в 4 н. соляной кислоте при 100° в течение 16 час разрушается 5% D-глюкозамина [2]. D-Галактозамин менее устойчив, так как аналогичная обработка 4 н. соляной кислотой при 100° приводит к потере 10—14% вещества [3, 4]. Это расщепление не обусловлено действием одной кислоты, так как недавно проведенное исследование показало, что удаление кислорода значительно понижает степень деструкции [5]. Другой крайностью являются сиаловые кислоты, которые быстро расщепляются при нагревании с разбавленными минеральными кислотами, причем по данным определения с тиобарбитуровой кислотой 20%-ная деструкция N-ацетилнейраминовой кислоты происходит при нагревании с 0,01 н. соляной кислотой при 100° в течение 30 мин [6]. Альдозы, не содержащие азота, такие, как манноза и галактоза, занимают промежуточное положение между этими двумя крайними случаями показано, например, что при нагревании в 2 н. соляной кислоте при 100° в течение 5 час расщепляется 23% D-маннозы [7]. [c.196]

Недавно описан другой тип галактозооксидазы, встречающийся в грибе Polyporus ir inatus [155]. Этот фермент использует кислород и образует 1 моль перекиси водорода и 1 моль производного галактозы, содержащего в положении 6 альдегидную группу (XV). Оп окисляет галактопиранозиды в некоторых случаях быстрее, чем свободный сахар, а также галактозамин и N-ацетилгалактозамин [156]. Перекись водорода можно использовать для определения количества галактозы, как описано выше для нотатина. [c.210]

Метод позволяет после окисления нингидрином смеси двух сахаров идентифицировать 2—5 мкг одного из них в присутствии 100 мкг другого [194]. Образующиеся пентозы идентифицируют хроматографией иа бумаге (например, в смеси к-бутапол — спирт — вода, 4 1 1, по объему) или распределительной хроматографией на колонках [133]. При этом нет необходимости в предварительном отделении аминосахаров от нейтральных сахаров и аминокислот. Метод можно использовать для количественных определений ясно, однако, что таким способом нельзя отличить в-глюкозадшн от в-маппоза-мина или D-галактозамин от о-талозамина. [c.213]

Позднее Гуд и Бессманн [235] использовали значительные различия во влиянии бората на интенсивности окрашивания, даваемого глюкозамином и галактозамином в реакции Эльсона — Моргана, а их N-ацетильными производными — в реакции Моргана — Эльсона, для определения этих двух аминосахаров в смесях. Такие методы нашли успешное применение в ряде случаев. [c.217]

Ферментативная методика. Многие исследователи показали, что гек-сокиназа из мозга или из дрожжей в присутствии АТФ катализирует превращение глюкозамина в его 6-фосфат [236—238]. Слейн [222] использовал этот метод для раздельного определения о-глюкозамина и о-галактозамина, поскольку фермент специфичен для производного глюкозы. После реакции Эльсона — Моргана смесь обрабатывают частично очищенной дрожжевой гексокиназой. Глюкозамин-6-фосфат осаждают сернокислым цинком и гидроокисью бария и вновь определяют оставшийся аминосахар. Однако Джонстон [239] показал, что глюкозамин-6-фосфат не осан дается количественно в этих условиях он модифицировал метод, применив отделение галактозамина перед определением на дауэксе-50. [c.217]

Может показаться возможным анализ смеси глюкозамина и галактозамина путем измерения количества свободных аминосахаров по реакции Эльсона — Моргана с последующим ацетилированием и определением по Моргану — Эльсону. Глюкозамин и галактозамин образуют примерно одинаковое окрашивание в реакции Эльсона — Моргана, но интенсивность окрашивания, которое дают их N-ацетильные производные в реакции Моргана — Эльсона, различна [252, 253]. С применением этого метода было найдено, что овомукоид содержит 15 остатков глюкозамина и 7 остатков галактозамина [214] однако эти величины не совпадают с данными других исследователей (см. гл. 2, раздел 2). По-видимому, этот метод можно будет рассматривать как надежный способ точного измерения содержания двух гексозаминов в смеси только после дальнейших исследований. [c.219]

Методика. К 1 мл раствора хлоргидрата глюкозамина или галактозамина (содержащего 10—50 мкг аминосахаров) или к мл нейтрализованного гидролизата ) в пробирках с сужениями ) прибавляют 2 мл ацетилацето-нового реагента. Для контроля берут 1 мл воды. В большие пробирки вводят трубки-холодильники ). Пробирки помещают в кипящую водяную баню таким образом, чтобы только их содержимое находилось под поверхностью воды, и нагревают 20 мин. Пробирки охлаждают проточной водой до комнатной температуры, прибавляют точно 6 мл этанола, а затем 1 мл реагента Эрлиха. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 10 мин при 65—70°, чтобы ускорить выделение углекислого газа. Нагревание выше 70° приводит к уменьшению окраски. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность растворов при 530 ммк в кюветах длиной 1 см. 40 мкг глюкозамина (свободного основания) дают величину около 0,42, однако контрольные определения необходимы при каждом анализе. [c.230]

Гликопептиды содержат половину галактозамина природного ПЖО. Очень низкое содержание дикарбоновых кислот во фракции, вероятно, является следствием пропускания гликопентидов через колонку с дауэксом-1 и применения воды в качестве элюента. Средний молекулярный вес гликопентидов, определенный потенциометрическим титрованием, составляет 660. Молярное отношение аминокислот к гексозамину было около 3,3, следовательно, гликопептиды в среднем были тетрапептидами с присоединенными к ним 1,3 остатка N-ацетилгалактозамина. На основании стехиометрии можно считать, что серин и треонин были аминокислотами, через которые осуществлялась связь с галактозамином (см. также ниже). [c.289]

Молекулярный вес углеводной части, рассчитанный на основании содержания углеводных остатков, входящих в ГТХ с наименьшим молекулярным весом (см. табл. 2), оказался равным 7180 (включая все остатки сахаров, за исключением фукозы и сиаловой кислоты, которые занимают концевое положение. При этом предполагается, что все аминосахара ацетилированы). Молекулярный вес 4000, предложенный Готтшалком, означает, что на один гликопротеиповый мономер ГТХ приходятся две гетеросаха-ридные группы. Углеводный состав ГТХ ), приведенный в табл. 2, можно отнести к двум одинаковым гетеросахаридам при условии, что каждый из них содержит 8 галактозных остатков вместо 7, определенных ранее. Каждый из гетеросахаридов должен тогда содержать 1 галактозаминный, [c.160]

В настоящее время установлено, что в тиреоглобулине содержатся следующие углеводы глюкозамин [29], галактоза и манноза [57], фукоза [58] и сиаловая кислота [59]. Галактозамин и гексуроновые кислоты в тиреоглобулине отсутствуют [60]. Результаты количественных определений углеводов в тиреоглобулинах свиньи, овцы, теленка и человека представлены в табл. 3. [c.224]

Наиболее часто типичные гликопротеины млекопитающих содержат следующие моносахариды ь-фукозу (6-дезокси-ь-га-лактоза), о-маннозу, о-галактозу, Ы-ацетил-о-глюкозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-глюкоза) и сиаловые кислоты (различные производные нейраминовой кислоты). В состав некоторых гликопротеинов входят о-глюкоза или Ы-ацетил-о-галактозамин (2-ацетамид-2-дезокси-о-галактоза). Наилучшие результаты для разделения, идентификации и количественного определения этих семи моносахаридов достигаются с помощью газожидкостной хроматографии. Существует два основных метода модификации сахаров для последующего анализа газожидкостной хроматографией альдит-ацетатный и метил гл икозид-триметил сил ильный. Первый включает водный кислый гидролиз с последующим восстановлением образующихся альдоз до соответствующих аль-дитов и их ацетилирование второй основан на применении метанолиза, приводящего к образованию метилгликозидов и метиловых эфиров сиаловых кислот, которые затем превращаются в триметилсилильные производные. [c.318]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология