Белки деградация

Метод Эдмана последовательной деградации пептидов и белков основан на реакции фенилизотиоцианата с концевой аминогруппой в щелочной среде, которая приводит сначала к образованию тиомочевинной метки концевой аминокислоты, последняя при действии СРзСООН отщепляется, в конечном счете, в виде замещенного фенилтиогидантоина, после чего полипептидная цепь белка укорачивается на один аминокислотный остаток. Далее этот процесс повторяется вновь [c.94]

Условия мацерации. Растворение белковых макромолекул, когда частицы сырья имеют соответствующие размеры, требует относительно мало времени при умеренном перемешивании (в большинстве случаев 15 мин или менее). После этого срока могут происходить растворение других компонентов (например, соединений клеточных стенок) или деградация белков, особенно если реакция среды слишком щелочная, [c.432]

Уровень активного фермента в клетке определяется не только скоростью его синтеза, но и другими факторами. Некоторые ферменты синтезируются в виде каталитически неактивных проферментов, которые далее переходят в активное состояние обычно в результате частичного протеолиза. Наконец, активные ферменты могут деградировать. Эта деградация происходит либо случайно, либо за счет запрограммированного гидролитического расщепления. Таким образом, как и в случае других компонентов клетки, синтез ферментов и их деградация находятся в динамическом равновесии. Результирующий процесс обычно называют обновлением белка [68]. [c.66]

Модификация белков с деградацией 551 [c.9]

Другая использовавшаяся классификация была основана на продуктах гидролиза. Простыми белками, или протеинами называют белки, дающие при гидролизе только аминокислоты (или продукты их деградации). С другой стороны, сложные (конъюгированные) белки дают при расщеплении не только аминокислоты, но и другие органические или неорганические молекулы (просте-тические группы). Классификация, основанная на химической природе различных простетических групп, приводит к типичным [c.220]

В белках гистидин атакуется на уровне имидазольного ядра в присутствии гидроперекисей жирных кислот и деградация образовавшегося радикала приводит к формированию боковых [c.301]

Полимеризация белков возможна также через посредство малонового диальдегида, промежуточного продукта деградации полиненасыщенных жирных кислот. Мостики, соединяющие белки, могут устанавливаться между двумя альдегидными группами и аминогруппами [99] (рис. 7.14). В то же время эта структура представляет собой флюорохром и может служить основой флюоресцентных пигментов стареющих растительных тканей [68, 111], [c.305]

Деградация аминокислотных остатков растворимых белков [c.316]

Модификация белков без деградации 543 [c.9]

Наибольший интерес представляют кинетическое описание протяженных кривых ферментативной деградации полимеров и выявление соответствующих кинетических закономерностей. С этим вплотную связана проблема разработки методов оценки биополимеров с точки зрения их атакуемости ферментами, а также в отношении оценки перевариваемости белков протеазами [22—25]. Иэ немногочисленных количественных данных в литературе по ферментативной деградации биополимеров видно, что для них свойственно ингибирование низкомолекулярньши продуктами реакции (см. [22, 26—32]), При этом в большинстве случаев выводы об ингибировании продуктами были сделаны при кинетическом анализе так называемых полных кривых ферментативной деградации биополимера, или протяженных участков кинетических кривых, с помощью известных методов ферментативной кинетики (например, используя интегральную форму уравнения скорости, см. [21]). В ряде случаев не исключена возможность некоторого действия ингибирования продуктами так, в работе [33] выдвинуто и обосновано положение, что формально-кинетический анализ протяженных участков кинетических кривых ферментативной деградации полимеров практически неизбежно приводит к кажущимся эффектам ингибирования продуктами, даже если продукты не связываются с ферментом и ингибирование на самом деле отсутствует. Этот эффект наблюдается для ферментов, реакционная способность которых уменьшается при увеличении степени конверсии полимерного субстрата (за счет уменьшения степени полимеризации субстрата или доли наиболее реакционноспособных (доступных) связей в молекуле полимера). Подобные ферменты составляют подавляющее большинство ферментов-деполимераз (см. табл. 1). [c.30]

Подводя итоги обсуждения структурных факторов пептидогликана бактериальной клеточной стенки, оказывающих влияние на эффективность ферментативной деградации, перечислим тс из них, которые уменьшают доступность реакционных связей субстрата и понижают их реакционную способность по отношению к действию лизоцима белка куриг ых яиц [8]. [c.149]

Да). Молекула миозина сильно вытянута в длину, причем ее длинная, стержневая часть образована двумя тяжелыми полипептид-ными цепями, которые на этом участке имеют структуру а-спирали и к тому же закручены одна вокруг другой в суперспираль. N-концы тяжелых цепей образуют глобулярные головки , каждая из которых находится в комплексе с двумя легкими цепями. АТФазная активность миозина сосредоточена в головках , имеющих каждая по одному активному центру. В результате ограниченного протеолиза можно получить два типа протеолитических фрагментов, обладающих в полной мере АТФазной активностью так называемый тяжелый меромиозин с м. м. 350 ООО Да, лишенный большей части стержня, или хвоста , миозино-вой молекулы, а также препараты головок . Электрофоретическая картина зависит от вида примененной протеазы, ее концентрации и времени обработки белка. Головки , или, как их называют, субфрагмент-1, полученный путем химиотрипсинового протеолиза, при ДСН-элект-рофорезе дают полосу 96 ООО Да — фрагмент тяжелой цепи, и две полосы легких цепей — примерно 18 000 и 15 000 Да. Две другие легкие цепи отсутствуют вследствие деградации. Тяжелый меромиозин обычно дает целый набор полос, среди которых присутствуют 81 ООО Да, 74 ООО, [c.392]

ЭДМАНА ДЕГРАДАЦИЯ, определение первичной структуры белков и пегп идов путем последоват. (ступенчатого) расщепления их пегггидных связей (начиная с К-конца молекулы) действием фенилизотиоцианата [c.404]

Деградацию свободного триптофана под действием гидроперекисей линолевой кислоты изучал Янг с сотрудниками [113]. По данным этих исследований, свободный радикал образуется на уровне индольного ядра, реактивность которого приводит к формированию трех главных продуктов (соединений) N-фop-милкинуренин, кинуренин и диоксиндол-З-аланин (рис. 7.8). По другим сведениям [94], свободный радикал триптофана в значительной степени обусловливает сигнал, наблюдаемый методом электронного парамагнитного резонанса, когда белки без серосодержащих остатков находятся в присутствии окисленных липидов. [c.301]

В конечном итоге деградация лизина с участием радикалов дает много продуктов (рис. 7.9), причем один из них (1-10-диа-мино-1-10-дикарбоксидекан) образуется между лизиновыми остатками отдельных белков, приводя к их полимеризации. [c.302]

Совокупность реакций, воздействующих на боковые группировки, о которых шла речь выше, обусловливает перенос радикалов от липидов к белкам. В процессе деградации гидроперекисей образуются различные альдегиды. Эти молекулы способны связываться с белками вначале через посредство нековалентных гидрофобных связей [16], а затем формировать основания Шиффа со свободными аминогруппами белков [56] (рис. 7.10). Так, гексаналь может соединяться ковалентными связями с растворимыми белками сои и составлять до 0,1 % массы этих белков [1]. Гексаналь также в состоянии образовывать основа- [c.302]

Авторы ЭТОЙ работы [5] воздействуют на белки сои, находящиеся в диспергированной форме в концентрации 10%. Под действием тепловой обработки (80°С, 30 мин) эта диспергированная система преобразуется в прогель, характеризуемый повышенной вязкостью. Прогель при охлаждении до 40 °С в течение 1 ч превращается в гель. Превращение прогеля в метазоль происходит под действием чрезмерного нагрева, или перегрева (125°С), вызывающего химическую деградацию белков. В частности, наблюдаются деструкция цистеина, а также дезамидирование аспарагина и глутамина — явления, способные помешать гелеобразованию. [c.518]

С одной стороны, олигомерную структуру белка НЬ-А в принципе можно рассматривать как недостаток, поскольку она приводит к фильтрации и деградации легкой цепи ((Зз-микроглобин, рис. 4.2, [c.65]

Найдено, что кальций-связывающие участки некоторых белков относительно богаты остатками у-карбоксиглутаминовой кислоты. Она встречается, например, 10 раз в первых 33-х остатках последовательности из 582-х остатков протромбина, причем каждый раз в виде близко расположенных дублетов. Карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты в этом белке, по-видимому, осуществ ляется в присутствии витамина К [15]. Как производное малоновой кислоты, она декарбоксилируется в процессе кислотного гидролиза, но может быть выделена после щелочного гидролиза [16], однако она дает крайне слабую реакцию с нингидрином. Установлено, что цитруллин (7), который долгое время считали промежуточным продуктом щелочной деградации аргинина в орнитин, входит в состав белка клеток сердцевины волос млекопитающих и игл дикобраза [17]. [c.232]

Идентификация N- и С-коицевых остатков пептидных фрагмен-. тов является важнейшим этапом в определении первичной структуры белка. Когда эту процедуру можно совместить с методом последовательной деградации с одного конца молекулы, как описано ниже, становится понятным экспоненциальный взлет нащих знаний [c.264]

Значение метода Эдмана последовательной деградации пептидов и белков существенно возросло с развитием приборов [18], позволяющих автоматически проводить различные стадии обра- [c.266]

Разработка твердофазного метода синтеза пептидов (см. гл. 23.6) привела к усовершенствованию некоторых стадий в процессе последовательной деградации. Так, стало чрезвычайно просто отделять 2-анилинотиазолиноны-5 от остального пептида или белка. После разработки автоматического секвинатора с использованием твердой фазы [20] появились промышленные приборы [c.267]

Короткие последовательности с Л/-конца белков часто идентифицируют, используя ферментативную деградацию. Промышленность производит несколько аминопептидаз, отличающихся специфичностью. Лейцинаминопептидаза из почек свиньи, как следует из ее названия, гидролизует преимущественно лейцин и сходные аминокислоты с гидрофобными боковыми группами. Несмотря на то, что скорости расщепления, Л/-концевых аминокислот лежат в широких пределах, гидролиз желательно продолжать до конца, за исключением аминокислоты, предшествующей пролину. Вследствие столь широкого изменения скоростей расщепления следует соблюдать осторожность при интерпретации результатов анализа деградации, катализируемой этим ферментом. Чрезвычайно важно отбирать пробы для анализа в течение деградации. Например, при анализе белка с Л/-концевой последовательностью А1а-Ьеи-Ьеи. .. на ранних стадиях деградации выход аланина превышает выход лизина, однако при большом времени гидролиза соотношение меняется на обратное [24]. Другой фермент, выделенный из почек свиньи, ами-нопептидаза М, гораздо менее специфичен и, по-видимому, более пригоден для расщепления белков. [c.271]

Существует несколько методов, с помощью которых можно обнаружить аминокислотные остатки, ответственные за биологическую активность белков. В первом методе белок необходимо подвергнуть частичной деградации, в особенности вблизи Л/- и С-кон-цов соответственно с помощью аминопептидаз и карбоксипептидаз. Например, удаление (с помощью карбоксипептидазы) трех остатков с С-конца рибонуклеазы не влияет на ее активность. Более глубокая деградация в этой части молекулы, однако, приводит к инактивации. По второму методу необходимо подвергнуть химической модификации боковые группы аминокислотных остатков белка. Естественно, что результаты такого рода экспериментов проще интерпретировать в том случае, когда эта модификация специфична. Например, легко идентифицировать область связывания кофермента пиридоксальфосфата в аминотрансферазе. Альд-имин, образующийся в результате конденсации кофермента с е-аминогруппой остатка лизина, восстанавливают борогидридом натрия и идентифицируют, так как он не затрагивается при гидролитическом распаде. Аналогично, ферменты, содержащие тиольные группы, такие как алкогольдегидрогеназа, 3-фосфоглицераль-дегиддегидрогеназа и папаин, обычно ингибируют реакцией с п-хлормеркурибензойной или иодуксусной кислотой. Специфичность модификации белков можно усилить, если структура реаген- [c.282]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология