Единицы количества ферментов

Скорость ферментативной реакции, которая определяется количеством субстрата, прореагировавшего в единицу времени, находится в зависимости от количества субстрата, количества фермента и ряда других факторов (температуры, [Н+], присутствия продуктов ферментативной реакции, активаторов и ингибиторов, степени чистоты ферментного препарата). При малых количествах субстрата скорость ферментативной реакции возрастает пропорционально количеству субстрата при избыточных количествах субстрата — постепенно падает. При оптимальных или избыточных количествах субстрата скорость ферментативной реакции обычно прямо пропорциональна количеству фермента, таким образом скорость реакции возрастает вдвое при увеличе- [c.39]

Определение амилолитической активности АС. Определение АС основано на зависимости степени гидролиза крахмала от количества единиц активности фермента, взятого для проведения реакции. [c.298]

Определение количественного содержания ферментов в биологических объектах представляет известные трудности, поскольку, за редким исключением, ферменты в тканях присутствуют в ничтожно малых концентрациях. Поэтому о количестве ферментов судят по скорости катализируемой реакции в определенных, согласованных условиях измерения. При оптимальных условиях температуры, pH среды и полном насыщении фермента субстратом скорость катализируемой реакции пропорциональна концентрации фермента. О скорости ферментативной реакции судят или по скорости убыли субстрата, или по скорости образования продукта реакции. Для выражения концентрации фермента и количественной оценки его активности в условных единицах Комиссией по ферментам Международного биохимического союза была рекомендована стандартная международная единица (Е или Ц) за единицу активности любого фермента принимается то количество его, которое в оптимальных условиях катализирует превращение 1 микромоля субстрата или образование 1 микромоля продукта в минуту (мкмоль/мин) . [c.157]

Концентрацию фермента рекомендуется выражать в величинах Е на I мл раствора, а удельную активность — в ферментных единицах Е на I мг белка. Последняя величина зависит от чистоты препарата, и поэтому при определении удельных каталитических активностей недостаточно очищенных препаратов фактически указывают лишь нижний предел активности, а для двух произвольных ферментов с различным молекулярным весом сравнение удельных активностей в общем случае не отражает их истинные каталитические свойства. В отличие от этого молекулярная активность фермента, равная эффективной константе скорости распада фермент-субстратного комплекса, является более точной физико-химической характеристикой. Эту величину определяют как число молекул субстрата, превращаемого за 1 мин одной молекулой фермента в условиях субстратного насыщения. Она равна числу ферментных единиц Е в одном микромоле фермента, поскольку сама единица количества фермента Е выражена в микромолях субстрата, превращаемого за 1 мин. Естественно, что молекулярную активность можно определить лишь для достаточно чистых ферментных препаратов. Связь между удельной и молекулярной активностью выражается соотношением [c.59]

Международного биохимического союза рекомендован единый условный способ выражения абсолютных количеств фермента. За единицу количества фермента (Е) принимается такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 мин в стандартных условиях действия фермента (температура 25°, оптимальная концентрация субстрата и оптимальное значение pH). Производными единицами являются кило-Е (1000 Е) и милли-Е (0,001 Е). Содержание фермента в биологическом материале и в выделяемых ферментных препаратах может быть выражено числом единиц фермента на 1 мг веса или 1 мг белкового азота. Эта величина носит название удельной активности фермента. Сам по себе этот термин нельзя признать вполне удачным, поскольку здесь идет речь о содержании фермента в материале. Термин активность правильнее относить к свойствам фермента (см. ниже раздел Активность ферментов ). [c.10]

Число оборотов можно измерить только для чистых ферментов. Отчасти по этой причине активность фермента чаще выражается в единицах активности на i мг белка (удельная активность). Одна международная единица представляет такое количество фермента, которое-катализирует образование I мкмоль продукта в 1 мин при стандартных (обычно оптимальных) условиях. В настоящее время Международный биохимический союз [7] рекомендует новую единицу — катал (кат), представляющую собой количество фермента, которое катализирует превращение 1 моль субстрата в продукт за 1 с. [c.8]

Комиссией по ферментам Международного биохимического союза рекомендовано за единицу количества фермента (Е) принимать такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в 1 мин в стандартных условиях действия фермента. [c.121]

Единицы количества ферментов [c.9]

Следует иметь в виду, что во. всех случаях определения ферментативного действия определяется не количество фермента, а его каталитическая активность, выражаемая тем или иным способом через скорость ферментативной реакции. Активность же фермента зависит не только от его весового количества, но, при прочих равных условиях, и от наличия или отсутствия активаторов и ингибиторов и состояния самой катализируемой реакции. Поэтому единицы ферментативного действия характеризующие активность фермента и обозначаемые часто терминами единица фермента или энзимная единица , лишь с известными оговорками могут служить мерой количества фермента. [c.68]

Основные определения и принятые символы. Единица количества фермента — количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата за 1 мин в стандартных условиях (25°С, оптимальная концентрация субстрата, оптимум pH). [c.187]

Величина Аз характеризует активность фермента как катализатора. За условную единицу количества фермента Е ферментную единицу) принимают такое количество, которое необходимо для превращения одного микромоля субстрата в 1 мин при стандартных условиях температуре 25 °С, оптимуме pH и при субстратном насыщении. Согласно этому определению количество Е находят по предельной начальной скорости превращения субстрата. Концентрацию фермента выражают в числе ферментных единиц на 1 мл раствора, а удельную активность — в числе ферментных единиц на 1 мл белка. Удельная активность для недостаточно очищенных препаратов дает нижний предел активности. [c.513]

Исходя из определения единицы количества фермента, можно в значениях единицы выразить ряд производных величин удельную и молекулярную активностЬ активность каталитического центра, концентрацию раствора фермента. [c.104]

За единицу активности а-амилазы принимается такое количество фермента, под действием которого в принятых условиях pH и температуры за 1 ч проходит гидролиз до декстринов 1 г крахмала (что составляет 30% от введенного в реакцию). [c.298]

В связи с этим Комиссия по ферментам [1] предложила следующим образом определять активность ферментов. За условную единицу количества фермента — Е принимается такое количество, которое необходимо для превращения одного микромоля субстрата в 1 мин при стандартных условиях (под стандартными условиями подразумевают температуру, равную 25° С, оптимум pH и, что наиболее важно, субстратное насыщение). Таким образом, величина Е определяется по максимальной начальной скорости превращения субстрата, пропорциональной эффективной константе скорости +2, молекулярной концентрации фермента, зависящей от чистоты изучаемого препарата. В тех случаях, когда субстратное насыщение по каким-либо причинам нельзя достичь, необходимую для расчета величину следует вычислять по уравнению Михаэлиса—Ментен [c.58]

Величина V, выраженная в мкмоль мл -мин , — это число единиц вспомогательного фермента в 1 мл раствора Кт — константа Михаэлиса для продукта (р) реакции, катализируемой определяемым ферментом. С учетом ряда поправок минимальным считают количество сопрягающего фермента, равное ЬКт. При этом следует иметь в виду, что величины Кт а V относятся к условиям, в которых проводят тестирование (они могут отличаться от величин, определяемых в оптимальных для сопрягающего фермента условиях). [c.209]

Концентрацию киназы фосфорилазы следует подобрать так, чтобы не более 20% добавленной фосфорилазы Ь превращалось в фосфорилазу й за 5 мин. Одна единица активности — это количество фермента, катализирующего превращение 1 мкмоль фосфорилазы Ь в фосфорилазу а в 1 мин при 30° С, pH 8,2. Для расчета учитывают молекулярную массу субъединицы фосфорилазы, равную 97 400 Да удельную активность фосфорилазы а в отсутствие АМФ принимают за 70% от активности фосфорилазы Ь, измеренной в присутствии АМФ. [c.224]

Исследование кинетики гидролитического действия липазы поджелудочной железы. О б щ и с сведения. Скорость химической реакции определяется количеством субстрата, подвергшегося превращению в единицу времени. Единицей действия фермента называют то количество его, которое катализирует превращение одного микромоля субстрата в минуту при оптимальных условиях — соответствующей температуре, pH, концентрациях реагирующих веществ и фермента и т. д. [c.187]

Единицы измерения количества п активности ферментов. Все известные Ф. являются белками с мол. весом от десятков тысяч до тшлиона и более, причем лишь немногие пз них получены в индивидуальном состоянии и не во всех случаях надежно измерен мол. вес. Вследствие этого общепринятые в химии способы пзмеренпя количества Ф. в г-молях затруднительны. Для выражения количества Ф. пользуются един1щамп, основанными на оценке каталитич. эффекта Ф., т. е. скорости ферментативной реакции. Международный биохимич. союз рекомендовал единый условный способ для выражения абсолютных количеств Ф. За единицу количества фермента (Е) принимается такое его количество, к-рое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в [c.207]

Поляриметрический метод определения ОСп основан на зависимости удельного вращения плоскости поляризации раствора субстрата от количества единиц активности фермента, взятых для проведения реакции. [c.300]

За единицу активности принимают активность такого количества фермента, которое приводит к гидролизу 1 мкмоль целлобиозы или образованию 2 мкмоль глюкозы за 1 мин при инкубации с 2 мМ раствором целлобиозы при pH 4,5 и 40° С. [c.150]

Термин активность достаточно условен и характеризует способность ферментов изменять скорости соответствующих реакций. Определяется активность по количеству продуктов реакции или модификации субстрата под действием фермента. За единицу активности фермента принимают такое его количество, которое катализирует превращение в 1 мин при 25 °С одного микромоля субстрата. Активность ферментов выражают также в каталах (кат), связанную с превращением одного моля субстрата в 1 с при 25 С. Удельной активностью называется скорость реакции, рассчитанная на 1 мг белка фермента. [c.62]

Единицей количества фермента считают величину, показывающую превращение 1 мкмоль (микромоль) или микроэквивалента химической группы субстрата в 1 мин при 25° С и оптимальном значении pH. [c.27]

Скорость ферментативной реакции находится в определенной зависимости от концентрации фермента и является мерой каталитического действия последнего. Она часто называется активностью и выражается в стандартных единицах. Комиссией по ферментам Международного биохимического союза за единицу количества фермента, обозначаемую символом Е, предложено принимать такое количество его, которое превращает 1 мкмоль субстрата или 1 мкэквивалент реагирующей группы или разрываемой связи в 1 мин при стандартных условиях. [c.220]

В. Р. Ламм и другие (1970) предложили международную глюкозоизомеризующую единицу активности Ш1у — количество фермента, которое может изомеризовать 1 микромоль глюкозы во фруктозу за 1 мин в растворе, содержащем 2 М глюкозы, 0,02 М MgS04 0,001 М СоС на 1 л при pH 6,84—6,85 (буфер — 0,2 М малеат натрия) при 60 °С. Фруктозу при этом определяют поляриметрическим или цистеинкарбазоловым методом. Основные технологические процессы производства глюкозно-фруктозных сиропов сводятся к следующему рис. 26). [c.136]

За единицу активности принимают количество фермента, вызывающее уменьшение оптической плотности АЛ300 на 1 ед. прй инкубации с 0,05%-ным раствором РНК при pH 5,0 и t =25° в течение 1 мин. [c.176]

Активность ферментов характеризуют международными единицами активности. Е пдница активности фермента определяется как количество фермента, пршраи щего 1 мкмоль субстрата при 25 С за 1мии при оптимальных экспериментальных услс иях, включающих pH, ионную силу и концентрацию субстрата. [c.347]

Единицы активности. Согласно рекомендации комиссии по ферментам Международного биохимического союза за единицу активносги фермента (Е) принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту при заданных условиях определения. Рекомендуемая температура 30° С (или указывают фактическую температуру, при которой проводилось определение). Остальные условия (pH, концентрация субстрата, кофакторов и др.) должны быть оптимальными. При бимолекулярной реакции Ач-Б = В + Г за единицу фермента принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль А или Б, или 2 мкмоль А, если Б = А, за 1 мин. Если фермент атакует более чем одну связь, например при действиц на полимерную молекулу, расчет ведется на 1 мк-экв затронутых реакцией групп. [c.206]

Удельная активность выражается числом единиц активности фермента, приходящихся на 1 мг белка. Молекулярная активность характеризуется числом молекул субстрата, которое подвергается превращению одной молекулой фермента за 1 мин. Когда известно количество активных центров в молекуле фермента, вводится понятие активносги каталитического центра. Она характеризуется числом молекул субстрата, которое подвергается превращению за 1 мин при расчете на 1 каталитический центр. [c.206]

Адсорбция гексокиназы на фосфолипидных мембранах (липосомах). Адсорбцию (иммобилизацию) гексокиназы на липосомах проводят суспендированием препарата липосом (3 мг лецитина) в 1 мЛ раствора фермента, содержащего различные количества единиц используемого фермента, а также 15 мМ МдСЬ или 5 мМ глюкозу в качестве адсорбирующих реагентов. Контрольная проба адсорбирующих реагентов не содержит. После 30-минутной инкубации при 0° С мембраны, содержащие адсорбированную гексокиназу, отделяют центрифугированием при 100 ООО я в течение 1 ч и суспендируюг в среде инкубации. Препарат иммобилизованной гексокиназы используют для изучения свойств в день получения. [c.376]

За единицу осахарнвающей активности принято такое количество фермента, которое в строго определенных условиях за 1 мин при 30° С катализирует расщепление до восстанавливающих сахаров 1 микроэквивалента гликозидных связей. [c.290]

В наименовании препарата отражаются способ культивирования микроорганизмов, степень очистки препарата и степень концентрирования ферментов. С этой целью после наименования препарата ставится индекс. Например, Амилоризин ПЮх или Амилосубтилин Г20х. В индексе буква П означает, что препарат получен поверхностным способом культивирования, а буква Г — глубинным. Буква х условно обозначает количество фермента в стандартной (обладающей строго определенной активностью на единицу массы), глубинной или поверхностной культурах. Цифра перед буквой х отражает степень очистки препарата. [c.90]

Отношение количества фермента к субстрату обычно равно 1 100. В работах разных авторов оно варьирует в широких пределах (от 1 1000 до I 25). Время, необходимое для достижения заданной степени гидролиза, обратно пропорционально соотношению фермента и субстрата. Так, Мальц сообщал [72], что у сои очень слабая концентрация фермента, порядка 4 единиц Ансон на 1 кг белков приводит к медленному гидролизу, с другой стороны, концентрация ферментов свыше 25 единиц Ансон на 1 кг белков влияет на степень гидролиза незначительно. [c.600]

Как видно, в проточном режиме продуктивность культуры по биомассе в 17 раз и по продукту в 6 раз превышает продуктивность периодического процесса. Во время ферментации активность глюкоамилазы увеличивается до 50—80 ед/мл. При определении глюкоамилазной активности (ГА) глюкооксидазным методом за единицу активности принимают такое количество фермента, которое вы5ывает образование 1 мг глюкозы из растворимого крахмала за 1 ч при температуре 30°С. [c.198]

За единицу глюкоамилазной активности принято такое количество ферментов, которое, действуя на растворимый крахмал при 30 С и заданном значении pH 4,7 в течение мин, освобождает 1 мкмоль глюкозы. Глюкоза определяется глюкозооксидазным методом с применением глюкозооксидазы и пероксидазы. [c.287]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

За единицу мальтазной активности принято такое количество фермента, которое за 1 ч при 30° С катализирует расщепление 1 г мальтозы до глюкозы при степени гидролиза 30%. [c.293]

Международный биохимический соки предложил использовать в качестве единицы активности катал (кат) активностью I кат обладает такпе количество фермента, к< торое катализирует превраи ние 1 моль субстрата в лродукт за 1 с. Следовательно, 1 квт 60.10 6 1П междунвродных единиц. Рекомендовано использовать также единицу значительно меньшего масштаба наноквтал (нкат), равную 11) кат. [c.181]

Активность биокатализаторов измеряют в международных единицах (МЕ) — 1 МЕ соответствует количеству фермента, превращающему 1 микромоль (мк/моль, 10 моль) субстрата в 1 мин в стандартных условиях Единицы активности могут быть выражены в мкЕ, нЕ и пЕ, то есть соответственно в микро-, нано- и пикоединицах с учетом превращения 10 , 10 или 10 моля субстрата в 1 мин Удельную активность выражают в с иницах на 1 мг белка С 1973 г введена единица ферментативной активности катал (кат), соответствующая количеству катализатора, способного превращать 1 моль субстрата в продукт за 1 секунду Тогда соотношения катал и МЕ будут следующими 1 кат= 1 моль субстрата С = 60 моль мин =60 10 мкмоль мин = 6 10 МЕ, 1 МЕ= 1 мкмоль мин = 1/60 мкмоль с = 1/60 мккат= 16,67 нкат= 16670 пкат Все это косвенно подтверждает факт трудности выделения ферментов в чистом виде и на практике приходится чаще иметь дело с группой белков в продукте — сырце или в исходном материале, или, наконец, в других партиях материала, подлежащих разделению [c.68]

Изменения аффинности и емкости Р -(6-аминогексил)-Р -(5 -аденозин) пирофосфат — сефарозы при разбавлении разными количествами немодифицированной сефарозы на примере взаимодействия с миокиназой хорошо видны в табл. 5.2 [8]. Разбавление аффинным сорбентом ведет к уменьшению связываемости р, выраженной через концсптрацпн хлорида калия, которые необходимы для элюирования фермента. Емкость сорбента, выраженная в единицах активности фермента, сорбированного па 1 мкмоль нуклеотида, возрастает при низких концентрациях нуклеотида, хотя абсолютная емкость на 1 г материала колонки с разбавлением уменьшается. [c.78]

Метод определения амилазной активкости по Вольгемуту относится к пороговым . Он основан на определении минимального порогового количества фермента, которое способно при определенных условиях опыта расщепить 1 мл 0,1% раствора крахмала. Это минимальное количество фермента принимают за единицу амилазной активности. [c.112]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология