Флуоресценция связанный со сдвигом фаз

Другим методом измерения времени жизни флуоресценции является фазовый метод. Так как испускаемая флуоресценция запаздывает по сравнению с возбуждающим светом, то при возбуждении флуоресценции пульсирующим светом возникает сдвиг фаз а, который измеряется экспериментально и из которого вычисляют время жизни флуоресценции, связанное с v соотношением [c.63]

Метод определения длительности флуоресценции, связанный со сдвигом фаз, основан на том, что молекула, возбужденная синусоидально модулированным световым сигналом, дает флуоресценцию той же самой частоты, но сдвинутой по фазе относительно возбуждающего света. [c.273]

Совершенно отличный от предыдущих метод измерения времени жизни флуоресценции был предложен Лордом и Рисом [120]. Флуоресценцию возбуждают светом, интенсивность которого модулирована высокой частотой (5—12 Мгц). Из-за конечного времени жизни возбужденного состояния поглощающей молекулы флуоресценция возбужденной молекулы несколько запаздывает, и поэтому возникает сдвиг фаз между модулированной флуоресценцией и модулированным возбуждающим светом. Сдвиг фаз ф можно измерить экспериментально и затем из него вычислить среднее время жизни флуоресценции, связанное с ф соотношением [c.642]

Известны два метода определения времени затухания флуоресценции порядка наносекунд а) импульсные методы и б) методы, связанные со сдвигом фаз. [c.271]

Индол триптофана характеризуется большим изменением момента перехода при возбуждении (до АО). Поэтому положение максимума его спектра флуоресценции сильно зависит от подвижности диполей среды и может варьировать до 30 нм. Так как т для 6 -состояния триптофана составляет единицы наносекунд, то по этим данным можно судить о структурных перестройках в белке в наносекунд-ном временном диапазоне. Было показано (Э. А. Бурштейн), что белки обладают характерными двухступенчатыми кривыми зависимости положения спектра флуоресценции от температуры в области от —90 до 0°С. Сдвиги полосы флуоресценции на 4-9 нм в области от —90 до —20°С и на 5-12 нм в области от —20 до 0° (рис. Х.6) свидетельствуют о замораживании движений в белковой матрице в наносекундном диапазоне. Высушенные белки не дают этих спектральных сдвигов, что подчеркивает роль воды как необходимого фактора для появления подвижности белка (см. 4 гл. IX). Очевидно, замораживание быстрой релаксационной подвижности белка имеет кооперативный характер, причем белковые структуры и связанная вода замерзают как единая микрофаза. [c.269]

Пример 15-3. Присутствие в сывороточном альбумине быка (САБ) связанных жирных кислот. Если приготовить различные образцы САБ и добавить АНС, наблюдается флуоресценция АНС, но величины Q и Хмакс меняются от образца к образцу. Изменение Q ввиду его значительной величины не мол<ет быть обусловлено изменением полярности места связывания, и, следовательно, оно происходит благодаря варьированию числа мест связывания, т. е. меньшее количество АНС связано в тех образцах, которые имеют слабую флуоресценцию. Если образцы САБ обработать липофильным растворителем, квантовые выходы и спектральные сдвиги становятся одинаковыми для всех образцов. Очевидно, в результате экстракции липофильным растворителем некоторые неполярные участки становятся недоступными АНС. Однако при анализе содержимого растворителя было показано, что из образцов с сильной флуоресценцией экстрагируются жирные кислоты. Следовательно, так называемые чистые образцы кристаллического САБ могут содержать связанные жирные кислоты. Ясно, что по флуоресценции АНС можно оценивать чистоту образцов САБ и изучать связывание жирных кислот с САБ -например, определять константы связывания. [c.430]

В 50 мл метанола. Затем аммиак испаряют (примечание 8), осадок желтого цвета повторно обрабатывают последовательно метанолом, разбавленной кислотой, разбавленной щелочью и снова водой, пока фильтрат не станет нейтральным (примечание 9). Твердый продукт обрабатывают бензолом, еще раз метанолом, фильтруют и сушат. Выход 9,2 г (90% теоретич.) (примечание 10) блестящих желтого цвета кристалликов, флуоресцирующих зеленовато-желтым светом при УФ-облучении. Выходы составляют 90— 98% теоретич. Сдвиг максимума флуоресценции от голубого, наблюдаемый у стильбена, в область более длинных длин волн для этого продукта хорошо совпадает с данными предварительного изучения малых молекул, содержащих связанные в пара-положении ксилилиденовые группы и имеющих значительную длину цепи сопряжения [3]. [c.124]

В нроцессе зеленения высших растений красный максимум поглощения хлорофилла а, образовавшегося из нротохлорофилла, вначале расположен при 684 ммк, а затем сдвигается к 673 ммк. Недавно было показано, что и в зрелых ламеллах красная полоса является сложной и соответствует нескольким частично перекрывающимся компонентам. Анализ спектров поглощения (особенно при очень низких температурах, когда максимумы становятся более резкими), спектров действия или спектров действия усиления (разд. III, А и Б), а также результаты экспериментов по дифференциальному экстрагированию говорят о том, что хлорофилл встречается в различным образом связанных формах. Спектры флуоресценции также [c.559]

В первой части работы приводятся химические сдвиги и времена спи№-решеточной релаксации (величины Г, ) для различных разрешенных пиков в спектрах ЯМР Ни спектрах ЯМР С с развязкой по протонам водных растворов перечисленных выше ПАВ. Эти данные свидетельствуют о градиенте подвижности сегментов углеводородных цепей, а также фрагментов оксиэтилена. С помощью кинетического анализа экспериментов по тушению флуоресценции последовали проницаемость мицелл неионогенных ПАВ по отношению к различным ионным и нейтральным веществам. Флуоресценция зондов, присутствующих либо в форме ковалентно связанных (фенок-сильных) фрагментов, либо введенных извне (пирен), тушится молекулами внутри неионной мицелпы. Изучение основных фотофизи— ческих свойств феноксильной группы дает информацию относительно окружения вокруг хромофора в этих неионных мицеллах. О солюбилизации пирена вблизи феноксильной группы судили по эффективному переносу энергии синглетного возбуждения. Особенности зоны солюбилизации пирена в гидрофобном ядре мицеппы приводят к интересным фотохимическим следствиям. Например, фотолиз рубиновым лазером с длиной волны 347,1 нм гшрена, растворенного в неионогенных ПАВ, приводит к эффективной фотоионизации. [c.308]

Интересно влияние растворителя на полосу люминесценции. При переходе от гексана к спирту наблюдается коротковолновый сдвиг, характерный для п—я -перехода (рис. 1.). Отнесение длинноволнового перехода к возбуждению неподеленной пары электронов атома N хорошо согласуется с тем, что о-оксинафталиден-анилин имеет спектр испускания, сходный со спектром о-оксибензилиденанилина (рис. 2). Коротковолновый сдвиг спектра первого соединения по сравнению со вторым, несмотря на развитую систему я-электронов, в последнем объясняется нарушением плоскостной структуры [120]. Отметим наличие флуоресценции уже при комнатной температуре для спиртовых растворов о-оксиазом етн-нов, тогда как гексановые растворы флуоресцируют только в замороженном состоянии. Этот факт связан с возможной конкуренцией внутри- и межмолекулярной водородной связи в спиртовых растворах. [c.222]

Аминогруппа DANS-глицина, с одной стороны, сопряжена с тс-электронной системой нафталина, а с другой — взаимодействует с растворителями, полностью изменяя как спектр поглош ения нафталина, так и его флуоресцентные свойства. При возбуждении молекулы аминогруппа поворачивается в одну плоскость с кольцами нафталина, при этом дипольный момент молекулы увеличивается. Появляется большой стоксов сдвиг спектра флуоресценции, сильно зависяп ий от полярности растворителя. Взаимодействие аминогруппы с протонодонорными растворителями (особенно водой) приводит к тушению флуоресценции, причем DgO тушит флуоресценцию DANS в 2—3 раза слабее, чем HgO. Если аминогруппа присоединяет протоны, то в процесс взаимодействия вступает электронная пара атома азота, ранее связанная с кольцом. В результате сопряжение исчезает, а вместе с ним — длинноволновая полоса поглош ения и связанная с ней флуоресценция. [c.250]

Флуоресцентные методы часто применяются для определени1г параметров, характеризующих связывание хромофора с мембраной. Для этого используют 1-анилин-8-нафталинсульфонат (АНС)—первый зонд, примененный Д. Лоуренсом в 1952 г. для исследования мембранных структур. В неполярном окружении интенсивность флуоресценции этого зонда заметно возрастает, и максимум ее сдвигается в область более коротких длин волн. При правильно выбранной области возбуждения и флуоресценции практически вся флуоресценция будет исходить от зонда, связанного с мембраной. Связывание заряженных молекул зонда с мембраной зависит от плотности заряда на ней и может быть использовано для определения этого параметра, а также величины трансмембранного потенциала. рН-чувствительные флуоресцентные зонды (производные акридина) применяют для измерения градиента pH на мембране. [c.81]

При определении кислорода по изменению интенсивности, а не по сдвигу в спектре, любое изменение отклика сенсора, связанное с разложением реагента или изменением его восприимчивости, можно выявить только с помощью переградуировки сенсора (этим рассматриваемые кислородные сенсоры отличаются от оптических рН-сенсоров, у которых регистрируется соотнощение кислой и основной форм индикатора). Проблему разложения реагента можно решить, измеряя не интенсивность, а время флуоресценции. Отнощение времен флуоресценции в отсутствие и в присутствии тушителя эквивалентно Такой подход к определению кислорода легче реали- [c.485]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология