Антитела адсорбция очистка

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Весьма важное место принадлежит аффинной хроматографии [116, 117]. Она основана на использовании особых адсорбентов, специфически взаимодействующих с макромолекулами и избирательно удерживающих данный вид макромолекул (отсюда и название метода). Примером, о котором уже говорилось в разд. Г.10, служит адсорбция комплементарных фрагментов молекулы нуклеиновой кислоты на иммобилизованной ДНК. Аффинная хроматография используется также для очистки ферментов, антител и других белков, способных прочно связываться со специфическими малыми молекулами. [c.161]

С некоторым успехом проведены изоляция и частичная очистка вирусов достигнуто и удаление некоторых примесей из вирусов на ионитах с оставлением очищенного вируса в растворе. В некоторых случаях полезной оказалась комбинация этих методов. Кроме того, специфическая адсорбция вирусов на ионитах по типу реакций антиген-антитело достигнута на специальных смолах. [c.621]

Периодический процесс разделения белков осуществляют путем их адсорбции и последующего элюирования. Условия проведения такой процедуры следует установить в ходе контрольных опытов с каждой партией адсорбента и обычно с каждым препаратом белка (фермента или антитела), предназначенным для разделения. На рис. 16.6 представлены результаты проведения циклов адсорбции и элюирования, полученные в контрольных опытах. На рис. 16.6, Л показаны три процесса адсорбции, различающиеся в зависимости от природы очищаемого материала, примесей и других параметров, например pH и ионной силы. Интересующий нас белок может адсорбироваться лучще, чем белки-примеси (слева), так же, как они (в центре), или хуже (справа). В первом случае к раствору добавляют такое количество адсорбента, какое необходимо для извлечения основной части нужного вещества, при этом большинство других белков остается в растворе (положительная адсорбция). Если нужный белок адсорбируется хуже примесей, то адсорбент добавляют, а затем удаляют до тех пор, пока не начнется адсорбция нужного белка (количество адсорбированного белка должно составлять около 10%). В этом случае вначале удаляются белки-при-меси (отрицательная адсорбция), после чего нужный частично очищенный материал можно адсорбировать или очистить каким-либо иным способом. Если примесный и основной белки адсорбируются с одинаковой скоростью, адсорбция может привести лишь к небольшой степени очистки. Тем не менее можно добиться положительных результатов, подвергнув очищаемый белок последовательным циклам адсорбции и элюции. [c.203]

По своему существу аффинная хроматография — это особый тип адсорбционной хроматографии. В отличие от того, что было описано в гл. 6, адсорбция здесь осуществляется за счет биоспецифп-ческого взаимодействия между молекулами, закрепленными на матрице, т. е. связанными в неподвижной фазе, и комплементарными к ним молекулами, подлежащими очистке или фракционированию, поступающими, а затем элюируемыми с подвижной фазой. Биоспеци-фическое взаимодействие отличается исключительной избирательностью, а зачастую и очень высокой степенью сродства между партнерами. Оно лежит в основе множества строго детерминированных процессов, протекающих в организме. В качестве примеров можно назвать взаимодействия между ферментами и их субстратами, кофакторами или ингибиторами, между гормонами и их рецепторами, между антигенами и специфическими для них антителами, между нуклеиновыми кислотами и специфическими белками, связывающимися с ними в процессе осуществления своих функций (полимераза.мп, нуклеазами, гистонами, регуляторными белками), а также между самими нуклеиновыми кислотами-матрицами и продуктами их транскрипции. Наконец, многие малые молекулы (витамины, жирные кнслоты и др.) специфически связываются со специальными транспортными белками. [c.339]

Величина этого параметра определяет возможность применения тех или других антител. Иммуноанализ и гистохимические методы требуют антител с высоким сродством (/Ссв=Ю-э—чтобы комплексы антигена с антителами были очень прочными С другой стороны, имму-ноаффинная очистка лучше осуществляется с низкоаффинными антителами Ксв=10- —10- ), поскольку в этих условиях адсорбция и освобождение антитела проходят при относительно мягких условиях без повреждения антигена и антител и колонка может использоваться повторно. Анализ взаимодействия антител с антигеном проводят по методу Скэтчарда (см. с. 343) с использованием радиоиммунного анализа. [c.324]

Очень перспективным методом очистки воды от всевозможных загрязняющих ее веществ, особенно синтетических, является использование иммобилизованных (закрепленных, нерастворимых) ферментов — ферментов второго поколения . Идея закрепления ферментов на нерастворимом в воде носителе и применения таких мощных катализаторов в технологических процессах и медицине возникла давно. Еще в 1916 г. осуществлена адсорбция инвертазы на активированном угле в свежевыделенной гидроокиси алюминия. С 1951 г. для фракционирования антител и выделения антигенов используют конъюгацию белков с целлюлозой. До недавнего времени существовал единственный метод закрепления ферментов — обыкновенная физическая адсорбция. Однако адсорбционная емкость известных материалов относительно белков явно недостаточна, а силы адгезии невелики, и разрыв связи между ферментом и поверхностью адсорбента может наступать от малейших изменений условий процесса. Поэтому такой метод иммобилизации не нашел широкого применения, но, поскольку он прост и может, по-видимому, способствовать выяснению механизма действия ферментов в живых системах, илах и почве, а в некоторых случаях применяться на практике, некоторые исследователи занимаются изучением адсорбции ферментов, поиском новых, эффективных носителей и т. д. [104, 206]. [c.176]

Ограниченные запасы витаминов и гормонов в- животных привели к развитию механизмов адсорбции, транспорта и консервации этих веществ в следовых количествах. В таких процессах важную роль играют специфические транспортные или связывающие белки, предотвращающие быстрое выведение витаминов и гормонов с мочой, которое происходило бы, если витамины и гормоны не были бы связаны в плазме в соответствующих комплексах. Связывающие белки присутствуют в очень низких концентрациях. Например, белки, прочно связывающие витамин В12, траноко баламины I и И, находятся в плазме крови человека в концентрациях соответственно 80 и 20 мг на 1000 л. Однако они обычно имеют высокое сродство к комплементарным витаминам и гормонам. Константы диссоциации этих комплексов находятся в интервале от 10 до 10 моль/л [35]. Из-за низких концентраций эти белки нельзя выделить классическими методами очистки наличие специфических взаимодействий с высоким сродством позволяет использовать аффинную хроматографию, которая допускает работу с большими объемами исходного материала. Как и для взаимодействий антитело — антиген, трудности заключаются в последующем выделении белка из комплекса с аффинными сорбентами. [c.124]

Специфическая адсорбция протеина ионитами. Последние исследования Ислайкера [41, 42] по приготовлению и свойствам комплексов ионит -антиген представляют значительные и многообещающие перспективы разделения и очистки антител и некоторых антигенов. Катиониты и аниониты превратились в уникальные специфические адсорбенты для изоаглютининов человека, КЬ-антител, антител вируса инфлуэнцы и антител к альбумину сыворотки человека путем придания им высокой специфичности, проявляющейся при реакциях антитело-антиген. Эта специфичность обеспечивается химическими реакциями или физической адсорбцией в любом случае специфический антиген соединяется с ионитом, образуя нерастворимый комплекс, который легко реагирует со своим специфическим антителом, удаляя его таким образом из раствора. [c.618]

Твердофазные иммунореагенты вначале использовали для выделения антигенов и аитител. Впоследствии иммобилизованные антитела применили для радиоиммуноанализа белков [1, 2] и гаптенов [3,4 ], где с их помощью удалось упростить разделение свободного и связанного с антителами определяемого вещества. Реагенты (антитела или антигены) связывали с носителем или ковалентно, или с помощью пассивной адсорбции. Ковалентное связывание требует проведения химических реакций и тщательной очистки готового продукта. Связывание путем пассивной адсорбции занимает много времени, а полученные таким способом реагенты сложно ис- [c.52]

Некоторые преимущества дает использование антител для характеристики поверхностных антигенов клеток. Поскольку антитела не способны проникать в неповрежденные клетки, с их помощью можно устанавливать, что данные антигены находятся на клеточной поверхности. Кроме того, антитела можно использовать для очистки клеточных поверхностных антигенов путем иммуиосорбции или же для иммунологического контроля процесса их очистки. По адсорбции антител можио изучать распределение определенных антигенов в тканях, а соответствующим образом меченные специфические антитела могут оказаться пригодными не только для выявления опухолей (Ballou et а ., 1979), но и для их лечения ( osini et aL, 1979). [c.42]

Так как антитела вырабатываются в крови животных в ответ на введение инородного вещества, их можно получать из крови животных, которым несколько раз вводили один и тот же антиген или гаптен в виде конъюгата. Вследствие специфичности реакции Аг — Ат обычно нет необходимости выделять специфическое антитело или даже фракцию иммуноглобулинов. Таким образом, в большинстве иммунологических операций используется сыворотка крови, из которой все клетки удалены центрифугированием. Сыворотка, содержащая определенное антитело, называется антисывороткой. Существуют случаи, когда антисыворотку требуется подвергать частичной очистке. Например, если гаптен, связанный с сывороточным альбумином, вводить животному с целью получения антигаптена, в организме животного одновременно образуется антиальбумин сыворотки. Если получать антитело к УФ-облученной ДНК, то образуется также антитело, активное только против необлученной ДНК. Антитело к носителю может оказаться неприемлемым в данном эксперименте, и в таких случаях его необходимо удалить. Этот осуществляется с помощью адсорбции к сыворотке добавляют антиген к нежелательному антителу, в результате чего образуется комплекс антиген— антитело. В определенных условиях этот комплекс можно [c.248]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология