Хромосомы методы окрашивания

Рис. 2.8. Кариотип мужчины хромосомы окрашены стандартным методом и методами, выявляющими характерную сегментацию. Слева направо стандартное окрашивание схематическое изобра-

Митотические хромосомы транскрипционно инертны. Во всяком случае они так компактны, что в них нельзя различить отдельных локусов. В отдельных участках, которые становятся видимыми при окрашивании методом G-сегментов (как это показано на рис. 28.9), содержится примерно 10 п. н. ДНК, и в них может поместиться много сотен генов. [c.354]

До недавнего времени мало было известно о локализации генов в хромосомах человека. Исключение составляли лишь признаки, сцепленные с полом (гл. 1, разд. В, 4), которые могут быть локализованы в Х-хромосомах. Ряд исследований, проведенных в последнее время, ознаменовались успехами и привели к систематическому картированию большого количества генов человека [169—171]. Наиболее важным оказался при этом метод слияния соматических клеток (дополнение 15-Д). Для слияния человеческих лимфоцитов с клетками грызунов часто используют инактивированный вирус Сендай, обладающий способностью вызывать сначала адгезию, а затем слияние клеток. Из гибридных клеток, полученных в результате слияния человеческих клеток с клетками мыши или хомяка, можно получить линии клеток, ядра в которых также сливаются. Хотя такие клетки могут размножаться, давая много поколений, тем не менее они склонны утрачивать при этом хромосомы, особенно те из них, которые ведут свое происхождение от клеток человека. Наблюдая за утратой определенных биохимических признаков, например некоторых ферментов, специфических для человека (которые могут быть отделены от ферментов хомяка методом электрофореза), можно установить наличие или отсутствие определенного гена в данной хромосоме. Очевидно, что для этого необходимо одновременно следить за потней хромосом на каждой стадии эксперимента. Новые методы окрашивания позволяют идентифицировать каждую из 26 пар хромосом человека. В настоящее время разрабатываются методы точного генетического картирования применительно к культуре клеток [171]. [c.268]

В последние годы в результате применения флюоресцирующих веществ и различных модификаций методики окрашивания ло Гимза разработаны методы дифференциальной Окраски хромосом растений и животных. В результате такого окрашивания каждая хромосома имеет свой определенный рисунок поперечной исчерченности, заключающийся в чередовании темных и светлых полос. [c.198]

Окрашивание. Наиболее простой способ окрашивания-красителем Гимза или 2%-ным ацетоор-сеином, или 2%-ным ацеткармином. Эти красители окрашивают хромосомы целиком, равномерно и интенсивно. Для некоторых диагностических целей (например, для выявления численных аномалий хромосом) этот метод вполне достаточен. Для получения более детальной картины структуры хромосом и идентификации отдельных хромосом или их сегментов используются различные способы дифференциального окрашивания. [c.43]

Из-за диффузного состояния хроматина мы в настоящее время не можем узнать детали его организации. Но мы можем поставить вопрос насколько жестко организована структура хромосомы Всегда ли определенные последовательности располагаются в одном и том же участке хромосомы, или скручивание нити в общую структуру является достаточно случайным Несколько лет назад в результате разработки метода дифференциального окрашивания на G-сегменты было показано, что для каждой хромосомы характерна особая воспроизводимая при редупликации ультраструктура. Если хромосомы обработать специальным образом и затем окра- [c.350]

С внедрением в широкую практику методов дифференциального окрашивания появились сообщения о более высокой частоте инверсий в некоторых популяциях. Довольно часто в эти перестройки вовлекается хромосома 9. Именно такая ситуация обнаружена в Финляндии [323]. При анализе кариотипов 631 жителя этой страны по различным диагностическим поводам у 9 была обнаружена перицентрическая инверсия и в б случаях-в хромосоме 9. Все эти б инверсий оказались идентичными. У трех пробандов инверсия была обнаружена в хромосоме 10 при этом у двух одинаковая, а у третьего отличная от них. Инверсию в хромосоме 9 может легко распознать и неспециалист (рис. 2.49), так как типичная вторичная перетяжка оказывается в этом случае не в длинном, а в коротком плече. [c.82]

Степень разрешения, достигаемая при картировании, определяется используемыми методами. Наиболее современные методы окрашивания позволяли выявить до 1000 полос на всех 23 хромосомах человека. В среднем на хромосому при этом приходится 50 полос, хотя на некоторых хромосомах их можно обнаружить в несколько раз больше, чем на других (сравни хромосомы 1 и 22 в табл. 18.9). Гаплоидный геном человека состоит из 3 10 п.н. Каждая полоса содержит 3-10 п.н., что соответствует нескольким сотням генов. Таким образом, пределом разрешения картирования с привлечением цитогенетических методов являются расстояния, соответствующие сотням генов. [c.316]

Метод окрашивания и идентификация хромосом. Дальнейшие успехи в картировании связаны с появлением новых методов идентификации индивидуальных хромосом, основанных на их дифференциальном окрашивании. Благодаря этим методам можно идентифицировать не только целые хромосомы, но и отдельные их части. В гибридных культурах довольно часто возникают хромосомные разрывы и перестройки. Это создает предпосылки для подходящей селекции гибридных клонов, содержащих интересующие нас части хромосом. Именно так некоторые локусы были отнесены к определенным хромосомным сегментам (или группе соседних сегментов). [c.202]

Внутрихромосомные перестройки (внутренние обмены). В пределах одной хромосомы могут произойти разрывы в двух разных участках, и фрагмент между точками разрыва, перевернувшись, может вновь соединиться с хромосомой. Такая перестройка (инверсия) не приводит к нарушениям в митозе, особенно если разрыв произошел в фазе О . Она может быть обнаружена методами дифференциального окрашивания. В тех случаях, когда инверсия не затрагивает центромеру, она называется парацентрической, если же точки разрыва находятся по обе стороны от цент- [c.73]

Появление более тонких методов исследования субклеточных компонентов в первые десятилетия этого века позволило выяснить локализацию обоих типов нуклеиновой кислоты (ДНК и РНК) в клетке. Было обнаружено, что именно ДНК является тем веществом, которое обусловливает то характерное окрашивание части ядра гистологическим красителем, на основании которого эта часть ядра была первоначально названа хроматином . Дальнейшее исследование показало, что ДНК действительно является главной составной частью хромосом, в которых она связана с белком, масса которого в хромосомах в три-четыре раза превышает массу ДНК. В отличие от ДНК, которая обнаруживается главным образом в ядре, основная масса РНК локализована в цитоплазме. Однако небольшая часть клеточной РНК находится в ядре. Она сосредоточена там в ядрышке, которое характеризуется чрезвычайно высокой концентрацией РНК. [c.44]

О-ОКРАШИВАНИЕ ХРОМОСОМ. Метод специфического окрашивания метафазных хромосом позволяет идентифицировать отдельные хромосомы гаплоидного набора. [c.521]

Группа О (21 и 22). У этих маленьких акроцентрических хромосом центромерный индекс варьирует в пределах 13-33. Они легко различаются по рисунку сегментации. Изменчивость их коротких плеч так же значительна, как и в хромосомах группы О. Здесь классифицируют такие же варианты, как и в группе О (рис. 2.14). Флуоресценция спутников и коротких плеч может быть слабой, умеренной и сильной, так же как и интенсивность окрашивания при использовании О-метода. В выборке из 2444 новорожденных 3,5% обнаруживают удлиненные короткие плечи. Другие варианты, такие, как гигантские спутники, удлиненные или укороченные короткие плечи, встречаются намного реже. По данным некоторых исследователей, обшая частота вариантов хромосом группы О составляет 1,8% по препаратам с дифференциальным окрашиванием и 1,6% в стандартных препаратах. Короткие плечи хромосом группы В и О содержат ядрышковый организатор и специфично окрашиваются методом серебрения. [c.50]

Дифференциальное окрашивание в зависимости от используемого метода может охватывать либо всю длину хромосомы, либо ее центромерный район. [c.61]

Метод гибридизации нуклеиновых кислот можно использовать на препарате хромосом после их соответствующей обработки. Так, исследуемый ген можно локализовать в специфическом хромосомном сегменте, одном из тех сегментов, которые наблюдаются при дифференциальном окрашивании. Поскольку эксперимент проводится с зондом к-ДНК, синтезированном на м-РНК, можно утверждать, что идентифицированный участок хромосомы содержит активный ген. Известно, что в геноме помимо активных генов, могут находиться псевдогены, такие последовательности ДНК, которые гомологичны активному гену, ио не транскрибируются из-за отсутствия каких-то важных последовательностей вне транскрибируемой части. [c.69]

Но из чего состоят эти петли — из ДНК, РНК или белков После окрашивания выяснилось, что количество ДНК в пуффе не превышает ее количества в обычном, не вздутом диске следовательно, здесь могла измениться только форма. Обычно РНК в хромосомах не обнаруживается. Однако вскоре после образования пуффа она появляется в них — это определяется либо при помощи специфических методов окрашивания, либо [c.296]

До того как появился этот метод окрашивания, хромосомы различали только по размеру и по относительной локализации центромеры (см. далее). Теперь же каждую хромосому можно идентифицировать по характерному расположению полос. Картина расположения пoJЮ воспроизводится настолько постоянно, что можно различить участок, транслоцированный с одной хромосомы на другую, сравнив его по структуре с исходным диплоидным набором хромосом. [c.351]

Пропионов 0-л а к м о и д н ы й метод окрашивания по Каптарю. Кончики корней длиной 2—4 мм помещают в пробирку с 5—10 каплями стандартного раствора на 1—2 ч. Затем корни переносят в 0,5 мл 40%-ного раствора пропионовой кислоты, которую доводят до кипения в течение не более 5—30 с для мацерации объекта. После кипения корни переносят на предметное стекло в каплю 40%-го раствора пропионовой кисдоты, накрывают покровным стеклом и давят на него. Подсчитывать хромосомы удобнее в корне не в зоне интенсивного деления, а в тех клетках, которые делятся тангентально и поэтому более удобны для подсчета. Они располагаются обычно по периферии препарата. [c.100]

Место нахождения С-сегментов можно обнаружить с использованием других методов окрашивания. Эти сегменты связаны с локализацией конститутивного, или структурного гетерохроматина. В разных хромосомах размер С-сегментов неодинаков. Гетерохроматин, обнаруженный по методу С-окраски, содержится во всех хромосомах человека. Он находится в около-цептромерных районах всех хромосом, а также в дистальной части длинного [c.62]

Дальнейшее совершенствование методов окрашивания хромосом позволило выявить до 1000 полос на всех 23-х хромосомах человека, характерных для гаплоидного набора. В среднем па хромосому при этом приходится 50 полос, хотя на некоторых хромосомах их можно обнаружить в несколько раз больше, чем на других. Гаплоидный геном человека состоит из 3x10 пар нуклеотидов, соответственно каждая полоса содержит в среднем 3x10 пар нуклеотидов, что соответствует нескольким сотням генов. [c.63]

Фотография метафазной хромосомы человека N 13, Видны обшее строение хромосомы (Std), характер полос в эухроматиновых плечах, выявляемый после специального окрашивания (три разных метода окрашивания С, О и Р), гетерохроматиновая область в центромере, наблюдаемая благодаря применению особой техни- [c.20]

Метод G-сегментации находит самое широкое практическое использование, однако природа дифференциального окрашивания до сих пор остается загадкой. Известно наверняка лишь то, что без предварительной обработки хромосомы окрашиваются краской Гимза более и.ти менее равномерно. Таким образом, образование полос обусловлено тем, что различные виды предварительной обработки по-разному влияют на отдельные участки хромосомы. (Вероятно, в результате экстракции каких-то компонентов, связываюших краску, из участков, образующих промежутки между G-сегментами.) Однако разнообразие эффективных воздействий так велико, что не позволяет понять общей природы реакции. Можно только предполагать существование какой-то большой по длине структуры, но, что лежит в ее основе, не известно. [c.351]

Области, находящиеся по обеим сторонам от центромеры, часто богаты сателлитными последовательностями ДНК и могут содержать значительное количество конститутивного гетерохроматина. В отличие от интерфазного хроматина гетерохроматин не сразу заметен в митотических хромосомах, но его можно увидеть, используя метод С-окрашивания. На рис. 28.10 видны тем-ноокрашенные области в районе всех центромер. Это свойство (так же, как и характерные черты интерфазного гетерохроматина) связано не с какими-то особенностями сателлитной ДНК, а зависит от белков, специфически присутствующих в этом месте. Конститутивный гетерохроматин, вероятно, не связан непосредственно с механизмом деления, так как он не всегда обнаруживается рядом со всеми центромерами. [c.352]

Другим доказательством того, что в ходе развития позвоночных большие блоки ДНК не теряются и не перестраиваются, служит следующий факт. Митотические хромосомы из разных типов клеток после специального окрашивания имеют одинаковую поперечную исчерченность (см. рис. 9-40). Если исходить из этого критерия, следует признать, что набор хромосом в дифференцированных клетках человеческого тела идентичен. Более того, при сравнении геномов различных клеток методами генной инженерии оказалось, что изменения в экспрессии генов, сопу гетвующие развитию многоклеточных организмов, как правило, не сопровождаются изменениями в последовательностях ДНК соответствующих генов (некоторые важные исключения приведены в разд. 18.4.2). [c.177]

Рис. 2.30. D- и G-хромосомы больного с синдромом Дауна. Окрашивание Q- и G-методом. Обратите внимание на широкий сегмент в проксимальном районе 21р, по которому хромосома 21 отличается от хромосомы 22. ( ourtesy of Dr.T.M. S hroeder-Kurth.) [c.65]

Впервые указанный механизм удалось продемонстрировать реально в работе [340]. Речь ИДС1 о мальчике с множественными пороками развития. На рис. 2.52 показаны хромосомы 10 этого пробанда и его матери. Можно видеть, что у матери имеется больгпая перицентрическая инверсия. Кроссинговер в пределах этой инверсии привел к появлению аномальной хромосомы, в результате чего ребенок оказался три-сомиком по сегменту q456. Без применения метода дифференциального окрашивания все С-хромосомы (группа 6 X 12) были бы классифицированы как нормальные и кариотипы матери и ребенка рассматривались бы как иден- [c.84]

Митотические и мейотические хромосомы. Как видно из этой таблицы, хромосомы в митозе и в мейозе обнаруживают значительно большую степень спирализации, чем в интерфазе (разд. 2.1.2). Рисунок их сегментации обсуждался в разд. 2.1.2.3. Число субсегментов, которые можно идентифицировать в составе сегментов, зависит от степени конденсации хромосомы (от митотической профазы до метафазы) и качества окрашивания. Это особенно отчетливо можно продемонстрировать при помощи метода преждевременной конденсации хромосом. Верхний предел задается числом хромомер 30 000-100000 нуклеотидных пар в длину (см. ниже [201а]). Учитывая, что число нуклеотидных пар на гаплоидный геном приблизительно равно 3,5 10 , а число сегментов, видимых даже в лучших препаратах, не превышает ж 2 ООО (разд. 2.1.2.3), можно сделать вывод, что нет даже близкого приближения к такому уровню разрешения. Хромосомные сегменты выявляются и во время ранних фаз мейоза. [c.119]

Окрашивание срезов генциановым фиолето- .врм по Ньютону, Метод применяют для окрашивания цитологических и эмбриологических препаратов. Он занимает мало времени. Хромосомы окрашиваются в фиолетовый цвет, оставаясь полупрозрачными, что облегчает подсчет длинных, нале- [c.88]

Дифференциальное окрашивание на О-диски было впервые предложено Сибрайт [4], после чего неоднократно модифицировано многими авторами [5—7]. О-окрашивание хромосом является наиболее распространенным и информативным из всех методов дифференциального окрашивания. С его помощью определяют гомологи нормальных хромосом и структурно перестроенные хромосомы. Для проведения О-окрашивания отбирают препараты, содержащие достаточное количество метафазных пластинок без цитоплазмы [c.82]

Диффёренциальное окрашивание ядрышковых организаторов (ЯО) с помощью нитрата серебра. Впервые метод был предложен Хоуэлом с соавторами [10] и усовершенствован рядом авторов [11, 12]. Он позволяет выявить специальные участки хромосом — ядрышковые организаторы, активно синтезирующие рибосомную РНК [13]. Обнаружение серебрящихся районов в маркерных хромосомах способствует определению их фрагментарного состава. Специфичность окраски хромосом AgNOa для многих видов животных может стать определяющей при установлении видовой принадлежности клеток исследуемой клеточной линии [9] (см. рис. 4). [c.84]

Установление происхождения маркерных хромосом. Процедуры, описанные в двух предыдущих разделах, входят в процесс идентификации и установления происхождения маркерных хромосом. Как уже указывалось, на этих этапах анализируется только О-окрашенные хромосомы. Однако несмотря на высокую разрешающую способность метода в некоторых линиях удается установить происхождение лишь 70—80 % маркерных хромосом. Поэтому при анализе маркеров в линиях следует также использовать методы дифференциального окрашивания хромосом для выявления С-дисков и активных ЯО. С этой целью дополнительно фотографируют и анализируют 5 метафазных пластинок, окрашенных на С-диски, и 10 метафазных пластинок, окрашенных методом серебрения ЯО. При сопоставлении характера распределения 0-, С-дисков и активных ЯО на одних и тех же маркерных хромосомах удается установить их фрагментарный состав и уточнить локализацию мест разрывов нормальных хромосом при образовании маркеров. Особенно полезно использовать на этом этапе работы хромосомы прометафазного типа, как маркерные, так и нормальные из банка образцов. [c.90]

В гибридных клетках человек-мышь, полученных в результате слияния ане-уплоидных Ь-клеток мыши и диплоидных эмбриональных фибробластов человека, 75-95% человеческих хромосом утрачиваются в процессе культивирования, причем их утрата носит случайный характер. Среди множества разнообразных гибридов всегда найдется клетка, сохравдвтая ту или иную хромосо.му человека. После размножения этой клетки можно провести анализ ферментов, активность которых связана с наличием именно данной хромосомы. Использование методов дифференциального окрашивания хромосом позволяет связать п ны с определенными локуса-ми хромосом, так как в гибридных клетках довольно часты хромосомные разрывы, перестройки, присутствие не целых хромосом, а отдельных фрагментов. [c.123]

Поскольку поставленное на очередь кариологическое выделение лиц с синдромом XYY среди высокорослых преступников представляет собой технически трудоемкую задачу, упомянем здесь, что появились экспресс-методы выявления лишней Y-хромосомы, а именно окрашивание мазков слизистой рта акрихинипритом и флюоресцентное микроскопирование (YY выделяется в виде двух светящихся точек). [c.186]

В начале XIX в., после создания более совершенных микроскопов, основной унифицируюш ей единицей в биологии стала клетка. Все организмы могли рассматриваться как одиночные, свободно живуш ие клетки или как сообш ество клеток. Постоянное усовершенствование оптических систем микроскопа и новаторские методы подготовки и окрашивания материала позволяли все более детально описывать содержимое клеток (рис. 1.1). Эти исследования показали, что клетки окружены мембраной, имеюш ей определенную структуру, что они неодинаковы по форме и что в них имеются четко различимые структуры, среди которых наиболее удивительной является ядро, содержаш ее в свою очередь небольшие, хорошо окрашиваемые структуры, названные хромосомами. Позднее обнаружили, что некоторые микроорганизмы (бактерии) не имеют ядра. Было установлено, что новые клетки появляются только в результате деления предсуш ествуюш их клеток. [c.11]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология