Культуры клеток агаровые

В случае культур, выращенных на твердой среде, нет необходимости использовать центрифугу или другие средства для сбора клеток, поскольку в этих культурах клетки находятся уже в сконцентрированном состоянии. Вместо этого на поверхность агара пипеткой наливают небольшое количество стерильного солевого раствора или буфера и суспендируют в нем выросшие колонии с помощью стерильного стеклянного шпателя. Таким способом можно получить большое количество клеток с поверхности агаровых сред в чашках Петри, в больших плоских культуральных матрасах (бутылях типа РУ) и в больших плоских чашках (покрытых крышками из пирекса). Особенно следует избегать центрифугирования при получении большого количества патогенных или [c.362]

Для получения бляшек разные разведения вирусной суспензии наносят на однослойные культуры ткани в плоских флаконах или чашках Петри и покрывают их слоем агарового покрытия. При этом репродукция вируса и ЦПД ограничиваются только первоначально инфицированными и соседними с ними клетками. Очаги клеточной дегенерации (бляшки) выявляют путем окрашивания культуры нейтральным красным, который либо включают в состав агарового покрытия, либо добавляют непосредственно перед учетом результатов. Бляшки состоят из погибших клеток, не окрашиваются нейтральным красным и поэтому выглядят в виде светлых пятен на фоне розово-красного монослоя. [c.267]

Метод Гансена. Образец культуры для посева вносят в стерильную воду. После этого несколько капель этой смеси переносят в маленькую колбочку с расплавленной агаровой питательной средой. Содержимое колбочки тщательно перемешивают, чтобы клетки правильно распределились, а затем одну каплю субстрата рассматривают под микроскопом. Если содержание клеток в ней достаточное (20—30), то каплю стерильного субстрата вносят во влажную камеру. Если клеток слишком много, необходимо добавить воды. Влажную камеру выдерживают при 20—25° С. Под микроскопом наблюдают разрастание клеток. Из числа выросших колоний осторожно бактериальной петлей отбирают их из отмеченных мест и переносят на питательную среду. [c.32]

Двухфазная система в принципе состоит из толстого слоя затвердевшей питательной среды, покрытого тонким слоем питательного бульона (рис. 9.1). Чтобы приготовить такую систему, частично заполняют сосуд горячей средой, содержащей 2—3% агара. После затвердения агарового слоя на него наливают с соблюдением правил асептики небольшое количество питательной среды, засевают ее и инкубируют. Для выращивания аэробов культуральный сосуд помещают на качалку, что обеспечивает хорошее снабжение кислородом и перемешивание среды во время инкубации. Культура развивается в жидкой части среды, но постепенно клетки диффундируют в твердую питательную среду и значительно концентрируются. Таким способом можно получить популяции с плотностью более 10" клеток/мл, причем данный метод пригоден для выращивания бактерий любого типа. [c.364]

При использовании метода агаровых культур в большинстве случаев раствор агара, содержащий диспергированные клетки, непосредственно заливают в культуральные чашки в один слой. После образования агарового полужидкого матрикса за ростом клеточных клонов внутри него можно следить обычным способом — с помощью стереомикроскопа. Вместе с тем иногда [c.255]

Для определения числа инфицированных клеток на питательной среде готовили большие разведения взятой пробы суспензии клеток. По 0,5 мл этих разведений клеток смешивали с I мл агарового покрытия. Смеси вносили в чашки Петри с однослойной культурой клеток, затем эти культуры заливали по 4 мл обычного агарового покрытия. Благодаря такому приему вносимые клетки фиксировались в слое агара на небольшом расстоянии от одно- [c.121]

Хроматограммы можно также накладывать на агаровые пластинки, содержащие культуры раковых клеток [34—42]. Использовали клетки асцитной формы карциномы Эрлиха, саркомы 180, карциномы Игла и культуру клеток НеЬа. Таким путем на хроматограммах можно обнаруживать вещества, обладающие цитотоксическим действием. [c.9]

Любой ферментационный процесс начинается с приготовления исходного посевного материала из чистой культуры продуцента (ргойисепШ, что в переводе с латинского означает производящий ). Агаровый косяк или столбик засевают культурой продуцента антибиотика или витамина В12 и выращивают при определенном температурном режиме в течение недели. Затем споры или клетки культуры суспендируют в стерильной водопроводной воде [c.23]

В последнее время Зиндер обнаружил интереснейшее физиологическое различие клеток F" и F+ (или Hfr). Оказалось, что существует особый вид фагов, замечательных тем, что вместо ДНК они содержат РНК, которые адсорбируются и заражают исключительно мужские клетки F" и Hfr. Это прямое подтверждение различного строения клеточной оболочки в зависимости от наличия или отсутствия в клетке фактора пола F, будь то в форме эписомы или прикрепленного к хромосоме в Hfr. Далее, в клетках F" все энисомы (а их имеется до 3—4 в каждой клетке клетки F" передают фактор пола клеткам F , сами при этом оставаясь F" ) инактивированы необратимо. Клетки F никогда не мутируют обратно в F" или Hfr. Что касается мутаций F+- F , то их образование индуцируется ультрафиолетовым светом и рядом мутагенов — солями никеля и кобальта или акридиновьши красителями. Принцип селекции на женские клетки F такой же, как на мужские Hfr. Сначала засевают исследуемую культуру ауксотрофных клеток Sm на универсальную агаровую среду, затем делают отпечаток на минимальной среде со стрептомицином, на которую посеян избыток нрототрофных Hfr, чувствительных к стрептомицину. [c.325]

Иногда невозможно произвести отбор на наследование некоторых маркеров донора, или это трудно осуществить из-за большого числа маркеров, наследуемых в каждом конкретном случае. В связи с этим для оценки порядка расположения генетических локусов часто проводят более традиционный рекомбинационный анализ. Обычно это делают так иглой или зубочисткой отбирают 100—200 колоний данного типа трансконъюгантов, клетки суспендируют в СБЖ и высевают штрихом на ту же селективную среду, чтобы получить очищенные обособленные колонии. Эти колонии можно затем нарастить в виде культур и использовать их для проверки генотипов путем посева штрихом на соответствующие среды или в виде пятна на подходящую агаровую среду с последующим анализом методом отпечатков. В последнем случае в исходной чашке должна находиться среда, селективная по отношению к фенотипу трансконъюганта, а среда в каждой чашке-копии должна помимо этой селективности обладать селективными свойствами в отно- [c.115]

Различия в ростовых потенциях раковых и нормальных клеток в культуре in vitro часто бьгоают связаны с резким изменением цитоскелета у раковых клеток. Эти клетки лучше растут на средах с низким содержанием сыворотки и даже способны расти, будучи суспендированы в агаровом геле. Кроме того, в отличие от нормальных клеток они не прекращают роста, заполнив монослоем все дно культуральной чашки, а продолжают делиться, громоздясь друг на друга, пока не достигнут очень большой плотности (см. разд. 11.1.8). Перестройка цитоскелета, сопровождающая эти сдвиги в поведении клеток, внешне проявляется в том, что раковые клетки обычно имеют более округлую форму и значительно меньшее число напряженных нитей,-их даже может вовсе не быть (рис. 10-78). [c.129]

Культуры каллюса начинают свой рост из растительной ткани, и такой тип культуры используется для поддержания материала. Культуры каллюса обычно поддерживаются на поверхности твердой агаровой среды. По этой причине различные участки каллюса оказываются в различных условиях окружающей среды поэтому в большинстве случаев для биохимических исследований используются диспергированные клетки каллюса, растущие в суспензии. При возвращении на твердую среду клетки претерпевают определенную последовательность клеточных делений, приводящих к появлению адвентивных эмбрионов (Reinert et al., 1977). [c.17]

Репродукция вирулентного фага в клетках бульонной бактериальной культуры сопровождается, их лизисом и просветлением среды. На газоне чувстви-тальных бактерий, выращенных на агаровой среде в чащке Петри, фаги образуют зоны очагового или сплошного лизиса, что зависит от их концентрации. Зоны очагового лизиса получили название негативных колоний фага, или стерильных пятен — бляшек (рис. 37, о. 6). Они имеют морфологию, характерную для определенных фагов, и образуются из одной фаговой частицы при внедрении ее и последующей репродукции в бактериальных клетках. [c.64]

В каждую пробирку помещают 0,2 мл высушенной среды и 1 петлю бактерий с тиосульфат-агаровой среды, или, например, 0,3 мл центрифу-гата (5 мин, при 6000 х g), полученного из 50 мл культуры, выращенной на среде с серой . При этом в сухую среду должно попасть некоторое количество серы, так как клетки T.ferrooxidans находятся в контакте с ней. Среда, используемая для лиофилизации T.ferrooxidans, действовала тормо-зяще на его рост при дальнейшем выращивании. Поэтому, при дальнейших [c.53]

В основу метода определения токсигенпости положен принцип взаимодействия дифтерийного токсина и антитоксической противодифтерийной сыворотки, диффундирующих в толщу агара и образующих в нем зоны преципитации (рис. 28). Однако при испытании дифтерийных культур на токсигенность нужно иметь в виду, что появление преципитатов в агаровом геле у дифтерийных культур возможно за счет взаимодействия не только токсина с антитоксином (специфические преципитаты), но и антибактериальных антител с соответствующим антигеном микробной клетки (неспецифические преципитаты). Неспецифические преципитаты могут образовываться у токсигенных и нетоксигенных дифтерийных культур. От специфических эти преципитаты отличаются слабой выраженностью, нечеткостью контуров и более поздним обра- [c.284]

Число колоний в агаровых культурах костного мозга коррелирует с количеством стволовых клеток в исходной взвеси (Wu а. oth., 1968). Это было показано в экспериментах с параллельной эксплантацией in vitro и трансплантацией in vivo облученным мышам суспензии кроветворных клеток. Сравнивались подсчеты количества колоний в культуре и количество кроветворных очагов в селезенке (модель Мак Куллока и Тилла), Как известно, кроветворные колонии в селезенке являются клонами, т. е. каждая колония происходит из одной родоначальной клетки. То же было показано и для колоний в культурах путем хромосомного анализа метафазных пластинок, входящих в состав колонии. Оказалось, что все метафазные пластинки, входящие в одну колонию, характеризуются своей хромосомной аномалией, т. е. содержат общий хромосомный маркер, хотя исходная взвесь, использованная для культивирования, представляла собой смешанную популяцию, лишь часть элементов которой содержала маркер. [c.37]

В дальнейшем было установлено, что клетки, обеспечивающие колониеобразование в агаровых культурах, явля [c.37]

Возникает вопрос сохраняются ли в данной системе стволовые кроветворные клетки и если сохраняются, то в течение какого времени и в каком состоянии Метод эксплантации кроветворных клеток в агаре создает трудности для проведения опытов по обратной трансплантации в организм (Met alf, 1969). Эти трудности удается преодолеть, используя для культивирования модификацию метода агаровых культур, предложенную Worton и др. (1969). Клетки костного мозга, суспендированные в жидкой питательной среде с 10% сыворотки (i. не содержащей агар), помещаются над слоем 0,5 7о агара, в который вводятся клетки фидера либо кондиционированная среда. Клетки костного мозга при этом находятся в одно и то же время как бы и в агаровых и суспензионных культурах. Вместе со слоем жидкой питательной среды их легко извлечь из культурального сосуда, затем отмыть и ввести внутривенно облученному реципиенту. Оказалось, что количество стволовых (колониеобразующих) клеток как при культивировании на фидере, так и в присутствии кондиционированной среды в течение первых суток после эксплантации резко падает. Однако в культурах на фидере на 2-е сутки оно составляет большую величину (25%), чем в. культурах на кондициони- [c.67]

Таким образом, в агаровых культурах, в которых в течение ]0— 14 дней обнаруживаются очаги миелоидных клеток, стволовые клетки сохраняются лишь в течение первых пескольких дней. [c.68]

Описаны различные модификации метода бляшек с использованием суспензии клеток в агарозе или агарового покрытия [16, 18]. Один из этих методов разработан для медленно размножающегося вируса бешенства [19]. Сублиния клеток ЗНК-21 (клон 13S) была адаптирована к росту в суспензионной культуре в присутствии агарозы в течение 1,5—2 нед [20] (эти клетки способны расти как в монослое, так и в суспензионной культуре на среде МЕМ-10). Клетки, хранящиеся в жидком азоте, сначала выращивают в виде монослоя, а затем пассируют путем регулярной трипсинизации. Размороженные клетки проходят около 30 пассажей. После этого их способность давать бляшки может нарушиться. [c.118]

Число инфекционных вирионов определяют методом бляшек. Реовирус формирует бляшки на разнообразных клеточных культурах, но чаще всего для титрования используют Ь-клетки или обезьяньи клетки СУ-1. Вирусные бляшки под 1%-ным агаровым покрытием при 37°С образуются на 4—5 сут их выявляют прижизненным окрашиванием нейтральным красным или 0,01%-ным раствором кристаллического фиолетового после фиксации формалином и удаления агарового покрытия. Обычно при культивировании реовируса описанными выше методами отношение числа физических частиц к числу БОЕ составляет 20—50 1 заметное увеличение этого отношения свидетельствует об образовании ДИЧ, что сопровождается снижением выхода инфекционных вирионов. Как уже отмечалось, реовирус исключительно эффективно размножается в мышиных Ь-клетках, и в принципе можно получить 25 мг очищенного вируса из 1 л зараженной суспензионной культуры. На практике для штаммов первого (например, Ленг) и третьего (например, Диринг) серотипов выход составляет 3—10 мг/л, а для штаммов второго серотипа (например, Джонс) —2—5 мг/л. [c.207]

Необходимо отметить, что присутствие сыворотки в агаре не является обязательным для получения колоний вируса. Раппапорт (1956) изучала образование бляшек вируса полиомиелита в культурах клеток почек обезьян под агаровым покрытием с нормальной бычьей сывороткой и в культурах с покрытием, свободным от белков, но содержавшим набор аминокислот. При экспериментах со штаммом Брунгильда (I типа) не было отмечено никаких различий в числе и сроках появления бляшек при использовании покрытия с сывороткой или без нее. Иные результаты были получены при испытании штаммов вируса полиомиелита II и 1П типа (МЕР, Соккет). В культурах почечного эпителия под слоем агара без сыворотки эти штаммы вызывали образование примерно в 2 раза большего числа колоний, чем в клетках с покрытием, содержаш,им сыворотку. Наличие аминокислот в агаре не только вело к увеличению числа бляшек, но и стимулировало более раннее их появление. [c.183]

Интересные данные о значении цистеина для развития цитопатогенного действия вируса полиомиелита и образования его колоний в клетках почек обезьян получены Дюбосом (1956). Им было установлено, что при удалении из среды Игла цистеина в пробирках с однослойными культурами клеток появление цитопатогенных изменений наблюдается только через 6—8 дней, тогда как в контрольных культурах разрушение отмечено через 3 дня. При использовании агарового покрытия без цистеина ни один из испытавшихся штаммов в разведении 10 и 10 не вызывал появления бляшек. [c.183]

Фогт, Делбекко и Веннер (1957) изучали образование бляшек вирусами полиомиелита всех трех типов под агаровым покрытием с разным значением pH. Для создания щелочного pH NaH Os добавляют из расчета 2,752 г/л агаровое покрытие с кислым pH получают при внесении NaH Og в концентрации 0,55 г/л, нейтральную реакцию устанавливают с помощью бикарбоната натрия, взятого в концентрации 0,73 г/л. Опыты проводили с клетками почек обезьян, выращенными в чашках Петри. После заражения и нанесения покрытия культуры помещали в термостат с подачей СО2 в таких количествах, которые необходимы для поддержания pH 6, 8 6,9 и 7,5 во флаконах с кислым, нейтральным и щелочным покрытием соответственно. [c.187]

Сюн и Мельник (1958) значительно упростили методику выявления вирулентных и авирулентных линий вируса полиомиелита в культуре ткчии. Они предложили использовать клетки, выращенные в плоских флаконах с резиновой пробкой. При использовании таких культур содержание соды в агаровом покрытии должно составлять 0,11 или 0,45 г на 100 мл в состав покрытия, кроме соды, входят 5% агара в растворе Эрла. 2% телячьей сыворотки и 0,0017% нейтрального красного, [c.188]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология