Пепсин, аминокислотный состав

Рассмотрим теперь метод пептидных карт. Его первый этап состоит в разрыве дисульфидных связей, далее белок денатурируют и расщепляют ферментами, например трипсином или пепсином. В результате получается набор пептидов, размер и аминокислотный состав которых характерен для каждого отдельного белка. Смесь пептидов наносят на лист хроматографической бумаги и проводят в одном направлении хроматографию, а в другом — электрофорез. Пептиды локализуются в виде отдельных пятен, образуя характерную картину ( отпечатки пальцев ), Метод пептидных карт особенно полезен для выявления малых [c.167]

Как свидетельствует анализ пептидов после расщепления пептидных связей пепсином, каждый глиадин, вероятно, имеет специфические последовательности [18]. Кроме того, как подчеркивается в отношении uj-глиадинов [45], аминокислотный состав белков отличается от такового в N-концевых последовательностях. [c.193]

Изоэлектрическая точка. В процессе титрования белка от предельно кислой до предельно основной формы должно существовать значение pH, при котором средний заряд белка равен нулю. Это значение pH носит название изоэлектрической точки. При значении pH, равном изоэлектрической точке, данный белок не перемещается в электрическом поле (см. ниже об электрофорезе). Изоэлектрическую точку можно приближенно определить, зная аминокислотный состав белка. Поскольку средний заряд белка зависит от концентрации соли (эта зависимость обусловлена способностью белков связывать ионы, а также изменением р а при изменении ионной силы), изоэлектрическая точка зависит от присутствия в растворе посторонних веществ, в частности от природы и концентрации буфера. В то же время она не зависит от концентрации белка. Изоэлектрические точки большинства белков близки к 7, что обусловлено приблизительно одинаковым содержанием в молекуле белка кислых и основных остатков. Однако существуют и такие белки, у которых изоэлектрические точки существенно отличны от 7. Так, например, пепсин — протеолитический фермент, функционирующий в сильно кислой среде желудка,— имеет изоэлектрическую точку, близкую к 1, а изоэлектрические точки протаминов близки к 12. [c.72]

В. А. Энгельгардт в 1939 г. доказал ферментативную активность мышечного белка миозина. В настоящее время многие ферменты выделены в кристаллическом виде, а в некоторых из них расшифрован и аминокислотный состав. Так, фермент пепсин содержит 51 аминокислотный остаток в составе двух полипептидных цепочек, одна из которых включает 30 аминокислотных остатков, вторая— 21. Молекула рибонуклеазы представляет длинную полипептидную цепь из 124 аминокислотных остатков. [c.5]

Мур, Штейн и Хирс подвергли рибонуклеазу окислению надмуравьиной кислотой и затем гидролизу химотрипсином, трипсином и пепсином. Образовавшуюся смесь пептидов они разделили на препаративной автоматической колонке на смоле даузкс = 50х2. Аминокислотный состав пептидов был определен на смоле дауэкс = 50x4. Всего было получено 32 пептида (см. стр. 521). [c.521]

Аминокислотный состав лепсиногена, пепсина и ингибитора пепсина известен [32 8, 329]. На основании данных о строении Ы и С-концевых участков можно сделать вывод, что пепсин образуется из С-концевого участка пепсиногена, поскольку пепсин и пепсиноген имеют одинаковые С-концевые, но разные N-кoнцeвыe участки [147, 329]. [c.207]

Для отделения растворимых белков от неорганических солей и т. д. часто пользуются тепловой коагуляцией. Считают, что аминокислотный состав коагулированного белка идентичен с составом его в природном состоянии. Однако Колвери, Гер-риот и Нортруп [146] показали, что аминокислотный состав пепсина и полученного из него при нагревании свернутого белка не одинаковы. Кизель и Кузьмин [363] пришли к таким же выводам при исследовании состава коагулированного и неизмененного эдестина. Значение этих фактов очевидно. [c.353]

Получение синтетических пластеин-активных пептидов позволило высказать более обоснованные предположения о механизме пластеиновой реакции [590, 593]. Так, например, стало очевидным, что катализируемая пепсином пластеиновая реакция представляет собой поликонденсацию, сопровождающуюся отщеплением воды, поскольку пластеины имеют точно такой же аминокислотный состав, что и исходные пептиды. По-видимому, это же относится и к пластеиновой реакции, катализируемой химотрипсином. Более того, если исходным веществом служила смесь чистых пептидов, то пластеин и в этом случае сохранял аминокислотный состав смеси. За исключением небольшого количества непрореагировавшего пептида, в реакционной смеси после выделения пластеина не найдено никаких других побочных продуктов. [c.397]

Предварительные исследования нерастворимой ДНФ осажденной фракции [34] показали, что это сложное вещество обладает несколькими N-концевыми остатками и дисульфидными связями. Окисление его надмуравьиной кислотой с последующей гель-фильтрацией на сефадексе Г-25 приводило к разделению на четыре главных и меньший пятый компоненты. Углеводы были найдены главным образом только в одной из полос молекулярный вес этой фракции, определенный по поглощению в ультрафиолетовой области ДНФ-грунпы, был равен 4170. Аминокислотный состав выделенной фракции был следующим аспарагиновая кислота (1), треонин (2), серин (1), глутаминовая кислота (2), пролин (4), глицин (1), аланин (2), изолейцин (1), лейцин (2), тирозин (2), фенилаланин (1), аргинин (1) и цистеиновая кислота (3). Анализ углеводов позволил установить, что на ДНФ-группу приходится 2,8 остатка гексоз и 2,6 остатка гексозаминов. Обработка этой фракции проназой, пепсином и химотрипсином с последующим фракционированием гель-фильтрацией на сефадексе Г-25 позволило выделить фракцию, которая содержала, кроме углеводов, только тирозин и аспарагиновую кислоту. Таким образом, вполне вероятно, что углеводная часть связана с остатком аспарагиновой кислоты пептидной цепи. [c.238]

Для установления общей последовательности белка пептиды одного типа гидролиза должны быть перекрыты пептидами, полученными из другого гидролизата. Некоторые комбинации протеолитических фрагментов, такие, как трипсин и химотрипсин или трипсин и стафилококковая протеаза, хорошо дополняют друг друга в этом отношении, в то время как комбинация трипсин + протеаза из А. mellea или химиотрипсин + пепсин менее выгодны, поскольку они образуют значительное число фрагментов, отличающихся только на один аминокислотный остаток (табл. 10.1). Нет необходимости определять полную структур/ всех пептидов второго набора, обычно ограничиваются получением таких характеристик, как аминокислотный состав, N-концевые аминокислоты, электрофоретическая подвижность, но, безусловно, должна быть установлена аминокислотная последовательность перекрывающих областей и тех участков цепи, корректность структуры которых вызывает сомнение. Перекрывающая последовательность должна захватывать. по крайней мере два С-концевых остатка одного пептида и два N-концевых другого. Если установление структуры белка не завершено в значительной степени, то более короткие перекрывающие по следовательности, чем указанные, должны быть подтверждены дополнительными данными. Если же структура установлена почти полностью, то вероятность конкурирующей последовательности для неубедительного перекрытия снижается и пептиды могут быть ориентировочно размещены по цепи. Стратегия [c.359]

Для определения локализации дисульфидных связей белок подвергают частичному гидролизу на относительно малые фрагменты с помощью протеиназы низкой специфичности, такой как пепсин, в условиях, при которых протекает минимум обменных реакций. Пептиды разделяют и определяют их аминокисло гный состав для того, чтобы убедиться в том, что они гомогенны и содержат одну дисульфидную связь. Дисульфидная связь в каждом пептиде разрывается (см. разд. 23.3.3) и образуются два фрагмента. Если первичная структура белка известна, то достаточно аминокислотного анализа и частичного определения Л/-концевой последовательности в двух фрагментах для того, чтобы определить ту часть цепи (ей), из которой образовался каждый фрагмент. [c.280]

При обработке ультразвуком в атмосфере воздуха активность протеолитических ферментов (пепсин и трипсин) уменьшается вследствие разрыва циклических аминокислотных остатков, которые входят в состав ферментов. Эти эффекты были отмечены при спектрофотометрических исследованиях (рис. 172). На рис. 173 приведена завтюимость оптической плотности пепсина от природы присутствующего в растворе газа при обработке ультразвуком. С этой целью использовались гелий, водород, аргон или воздух [109]. [c.251]

Полипептидный гормон инсулин участвует в регуляции углеводного обмена. Молекула бычьего инсулина содержит 51 аминокислоту и состоит из двух цепей. Последнее подтвернедается присутствием двух N-концевых аминокислот — глицина и фенилаланина. Цепь с N-концевым глицином называется А-цепью и содержит 21 аминокислоту цепь с N-концевым фенилаланином называется В-цепью, и в состав ее входит 30 аминокислот. Сэнгер и его сотрудники окислили инсулин надмуравьиной кислотой и провели хроматографическое разделение двух цепей. После этого каждую цепь подвергли ферментативному и кислотному гидролизу. На фиг. 27 и 28 указаны главные пептиды, полученные при гидролизе каждой из цепей, и приведены полные структуры цепей, установленные на основе этих данных. Видно, что места, в которых трипсин, химотрипсин и пепсин расщепляют цепи, согласуются с тем, что мы знаем о специфичности этих ферментов в отношении синтетических соединений. Обнаружено также и несколько дополнительных мест расщепления, в частности при гидролизе, катализируемом пепсином. Особо следует обратить внимание на то, что перекрывающиеся пептиды, полученные при использовании разных гидролитических методов, дополняют друг друга и позволяют однозначно установить общую аминокислотную последовательность. Для каждого из главных пептидов, приведенных на фиг. 27 и 28, аминокислотная последовательность была определена путем неспецифического гидролиза кислотой, установления последовательности аминокислот в образовавшихся ди-, три- и тетрапептидах и объединения полученных данных в общую картину. Как указывалось выше, в настоящее [c.91]

Известно, что активность почти всех ферментов чувствительна к денатурации, т. е. к изменению третичной структуры. Следовательно, для сохранения ферментативной функции должна остаться неповрежденной значительно большая часть молекулы по сравнению с той, которая находится в непосредственном контакте с субстратом. В простых ферментах (пепсине, трипсине, химо-тр. шсине, уреазе, папаине и др.) активный центр образуется определенной группировкой аминокислотных остатков в спиральной цепи белковой молекулы. В сложных ферментах, состоящих из белка и небелкового компонента, в состав которого входят, например, нуклеопгды, гемины, атомы металлов и др., активный центр образуется главным образом небелковым компонентом и некоторыми прилегающими к нему аминокислотными остатка.ми. [c.138]