Бычий инсулин

Рис. 25-4. Структура бычьего инсулина.

Рис. 86. Последовательность аминокислот в молекуле бычьего инсулина

Действие некоторых протеолитических ферментов на окисленную В-цепь бычьего инсулина показано на рис. 6.2. Расщепление ферментами пепсином, химотрипсином или трипсином носит ограниченный характер и относительно специфично по сравнению с фактически беспорядочным частичным кислотным гидролизом. [c.179]

Рис. 20-6. Последовательность аминокислот в бычьем инсулине.

Arg-Gly - Phe -Phe -Tyr-Thr-Pro- l yv Ala-OH Бычий инсулин (сокращенное обозначение см. с. 290) [c.299]

Найденная последовательность 51 аминокислоты в бычьем инсулине изображена на рис. 86. Дисульфидные связи удерживают две пептидные цепи в изогнутом состоянии и играют важную роль в определении конформации и физиологические свойств инсулина. [c.510]

Рис. 6-11. Первичная структура бычьего инсулина. Показаны аминокислотные последовательности каждой из двух цепей и поперечные связи, А-цепи в молекулах инсулина человека, свиньи, собаки, кролика и кашалота идентичны. Идентичны также В-цепи инсулинов коровы, свиньи, собаки, козы и лошади. Аминокислотные замены в А-цепи обычно наблюдаются в положениях 8,9 и 10 (выделены красным цветом).

Фиг. 29. Ковалентная структура бычьего инсулина.

Первичная структура гормона инсулина была установлена методом химической деструкции. Последовательность 51 аминокислоты в бычьем инсулине изображена на рис. 20-6. Было показано, что структура инсулина овцы и свиньи несколько иная. Дисуль-фидные связи удерживают две пептидные цепи в изогнутом состоянии и играют важную роль в определении кон( юрмации и физиологических свойств инсулина. [c.123]

Рис. 125. Кривые вытеснения бычьего инсулина, меченого

На рис. 62 показана первичная структура бычьего инсулина. Этот белковый гормон, который, как многим известно, спасает от диабета, состоит из двух цепей. [c.219]

Молекула инсулина — одна из наиболее мелких белковых молекул. И все же его формула достаточно сложна. Молекула бычьего инсулина состоит из 777 атомов в такой пропорции 254 атома углерода, 377 — водорода, 65 — азота, 75 — кислорода и 6 — серы. Некоторые общие принципы строения молекулы белка были известны давно благодаря работам немецкого химика Э. Фишера и других исследователей. Атомы образуют структурные единицы, называемые аминокислотами, которые в свою очередь соединяются в длинные цепи и образуют молекулу. Из 24 известных аминокислот в инсулине присутствует 17. Общее число аминокислотных единиц в молекуле инсулина равно 51. [c.93]

По вопросу о связи между строением инсулина и его биологической активностью, а таклсе о значении отдельных частей молекулы инсулина для проявления активности имеются довольно обширные сведения. Так, отщепление С-концевого остатка цепи В бычьего инсулина (аланин), которое может быть осуществлено мягкой обработкой карбоксипептидазой [951, 1614] или трипсином [951], не сопровождается потерей гормональной активности. Напротив, отщепление С-концевого остатка цепи А (аспарагин) приводит к резкому снижению активности [951, 1614]. Дез-(Азр 21, А1а > )-инсулин был очищен с помощью противоточного распределения и охарактеризован аминокислотным анализом. Активность этого соединения в судорожном тесте на мышах составляла 5% (1,1—1,2 М. Е./жг) активности природного инсулина [2139]. [c.471]

Синтез инсулина из отдельных цепей А и В открывает путь получения смешанных инсулинов, молекулы которых построены из цепей инсулина различных видов животных. Уилсон и сотр. [2572] синтезировали из цепи А бычьего инсулина и цепи В трескового инсулина А-бычий-В-тресковый инсулин с активностью [c.475]

Первичная структура гормона инсулина была установлена методом химической деструкции. Последовательность 51 аминокислоты в бычьем инсулине изображена на рис. 20-6. Было показано, что структура инсулина [c.78]

Инсулин свиньи отличается от человеческого инсулина одной-единственной аминокислотной заменой вместо треонина в положении 30 В-цепи находится аланин. В бычьем инсулине помимо этого треонин А8 заменен на аланин, а изолейцин А10—на валин. Эти замены практически не влияют на биологическую активность гормона и очень слабо влияют на его антигенные свойства. Хотя у большинства больных, получавших гетерологичный инсулин, обнаруживаются циркулирующие в небольшом титре антитела против введенного гормона, некоторые пациенты демонстрируют титр антител клинически значимой величины. До тех пор пока человеческий инсулин не научились получать с помощью методов генной инженерии, для терапевтических целей использовали обычно бычий и свиной инсулины. Несмотря на значительные различия в первичной структуре, все три инсулина имеют сходную биологическую активность (25—30 МЕд/мг сухого веса). [c.249]

Бычий инсулин (1 мкг/мл) (см. табл. 7.1). [c.240]

Готовят растворы двух препаратов инсулина в концентрации 100 мкг/мл и раститровывают в микропланшете для ИФА в концентрациях от 10 мкг до 5-10-5 мкг в лунку. Инкубируют в течение ночи при 4°С, тщательно отмывают. В лунки вносят раствор антител к свиному инсулину в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл. Инкубируют в течение часа при 37 °С, тщательно отмывают. Вносят конъюгат антимышиных антител с ферментной меткой и инкубируют в течение часа при 37 °С. Тщательно отмывают и вносят соответствующий субстрат (с. 319). Через 30 мин определяют величину оптической плотности при соответствующей длине волны (с. 320). Строят графики зависимости величины оптической плотности от разведения антигена. Полученные графики должны свидетельствовать о том, что специфичность связывания антител к свиному инсулину значительно выше по сравнению со связыванием бычьего инсулина, хотя в последнем случае и наблюдается специфическое связывание. Такой результат свидетельствует [c.327]

Бычий инсулин имеет молекулярный вес порядка 6000 и состоит из двух полипептидных цепей, связанных дисульфидными мостиками цистиновых остатков. Эти цепи можно отделить друг от друга окислением, которое превращает звенья ys—S—S— ys или ys в соответствующие сульфокислоты ( ysSOgH). [c.1067]

Бак и сотр. описали спектры свиного и бычьего инсулина в развернутом состоянии в растворах F3 OOH и F3 OOD на частотах 60 МГц [80] и 220 МГц [81] и провели частичное отнесение отдельных резонансных сигналов, использовав данные по спектрам аминокислот (см. разд. 13.2) как эталонов. [c.384]

Сэнгером при установлении аминокислотной последовательности бьгаьего инсулина эта последовательность приведена на рис. 6-11. Бычий инсулин имеет молекулярную массу около 5700. Его молекула состоит из двух полипептидных цепей А-цепи, содержащей 21 аминокислотный остаток, и В-цепи, содержащей 30 аминокислотных остатков. Эти две цепи соединены двумя дисульфидными (—8—8—поперечными связями, причем в одной из цепей имеется еще одна внутренняя дисульфидная связь. При определении последовательности вначале были разорваны поперечные дисульфидные связи, что позволило разделить цепи. Для этой цели Сэнгер использовал в качестве окислителя надмуравьиную кислоту, которая расщепляет каждый остаток цистина на два остатка цистеи-новой кислоты (рис. 6-12), по одному в каждой цепи. После разделения цепей в них были определены аминокислотные последовательности. При этом не удалось обнаружить никаких закономерностей в расположении какой-либо аминокислоты, никаких периодических повторений того или иного аминокислотного остатка. Более того, последовательности двух цепей оказались совершенно разными. [c.153]

ЛОСЬ согласие с результатами, найденными для ЧгИстых аминокислот (табл. 6). По-видимому, отклонения пиролиза пептидов по сравнению с пиролизом аминокислот зависят от положения аминокислоты в пептиде. Это свойство должно скорее запутывать интерпретацию фрагментации при пиролизе пептидов, чем являться ценным способом определения некоторых аминокислот на концах пептидной последовательности, как предлагалось авторами. При распространении исследований на природные пептиды пиролиз кристаллического бычьего инсулина, например, приводил к ацетону из глицина, бензолу из фенилаланина, толуолу из тирозина, пирролу из пролина, пропилену из глутаминовой кислоты, сероокиси углерода и сероуглероду из серусодержащих аминокислот. [c.182]

Полипептидный гормон инсулин участвует в регуляции углеводного обмена. Молекула бычьего инсулина содержит 51 аминокислоту и состоит из двух цепей. Последнее подтвернедается присутствием двух N-концевых аминокислот — глицина и фенилаланина. Цепь с N-концевым глицином называется А-цепью и содержит 21 аминокислоту цепь с N-концевым фенилаланином называется В-цепью, и в состав ее входит 30 аминокислот. Сэнгер и его сотрудники окислили инсулин надмуравьиной кислотой и провели хроматографическое разделение двух цепей. После этого каждую цепь подвергли ферментативному и кислотному гидролизу. На фиг. 27 и 28 указаны главные пептиды, полученные при гидролизе каждой из цепей, и приведены полные структуры цепей, установленные на основе этих данных. Видно, что места, в которых трипсин, химотрипсин и пепсин расщепляют цепи, согласуются с тем, что мы знаем о специфичности этих ферментов в отношении синтетических соединений. Обнаружено также и несколько дополнительных мест расщепления, в частности при гидролизе, катализируемом пепсином. Особо следует обратить внимание на то, что перекрывающиеся пептиды, полученные при использовании разных гидролитических методов, дополняют друг друга и позволяют однозначно установить общую аминокислотную последовательность. Для каждого из главных пептидов, приведенных на фиг. 27 и 28, аминокислотная последовательность была определена путем неспецифического гидролиза кислотой, установления последовательности аминокислот в образовавшихся ди-, три- и тетрапептидах и объединения полученных данных в общую картину. Как указывалось выше, в настоящее [c.91]

Исследуя реакцию взаимодействия метилизотиоцианата с белками, авторы показали, что при большом избытке реагента (60 мкл) образуется продукт, затрудняюпщй газохроматографическое определение. При анализе бычьего инсулина после первого цикла его расщепления по методу Эдмана на хроматограмме были идентифицированы пики производных глицина и фенилаланина, после второго цикла — пики производных второй пары аминокислот изолейцина и валина. Пик производного глицина может быть экранирован пиком производного валина. [c.34]

Сэнджер и сотр. [1907, 1908] установили строение бычьего инсулина в 1945—1955 гг. Молекулярный вес инсулина (ср. рис. 95) равен 5733 его молекула состоит из двух пептидных цепей — цепи А (21 аминокислотный остаток) и цепи В (30 аминокислотных остатков). Обе цепи связаны между собой двумя дисульфидными мостиками. В цепи А имеется еще один дисуль- [c.470]

Испытания на способность нейтрализовать антитела, связывающие бычий инсулин, показали, что это соединение обладает иммунологическими свойствами, подобными свойствам природного бычьего инсулина. Напротив, А-тресковый-В-бычий инсулин проявляет свойства, аналогичные свойствам природного трескового инсулина. Эти данные свидетельствуют о том, что иммунологические свойства инсулина определяются главным образом структурой цепи А. Берсон и Ялоу [218] (ср. [1482]) нашли, что свиной инсулин индуцирует образование антител в организме человека. Свиной инсулин отличается от инсулина человека природой С-концевого остатка цепи В. Оказалось, что после отщепления этого остатка или даже восьми С-концевых остатков цепи В образуется модифицированный инсулин, все еще сохраняющий способность реагировать с антителами организма человека, образовавшимися при действии свиного инсулина. Эти исследователи указывали также на различие трехмерных структур инсулина человека и свиньи как на одну из причин, определяющих природу антигенных свойств гормона. [c.475]

Катсояннис и сотр. [1195а] осуществили рекомбинацию синтетической цепи А с природной цепью В и получили вещество, активность которого составляла 0,5—1,2% активности инсулина (испытания на диафрагме мыши и иммунологический тест). Активность нейтрализовали антителами, связывающими бычий инсулин. Активное вещество было получено также [1189а] рекомбинацией природной цепи А с синтетической цепью В и рекомбинацией двух синтетических цепей [1183а]. Подробные данные об активности двух последних веществ не приведены. [c.489]

В первых опытах Мишера по выделению нуклеина из клеток гноя, проведенных около века назад, было установлено, что в ядрах эукариотов отрицательно заряженная ДНК находится в комплексе с примерно равным по массе количеством положительно заряженных основных белков. В своей работе, проведенной в начале века, Коссель установил не только природу химических компонентов ДНК, но также выяснил состав связанных с ДНК основных белков. Из этих белков наиболее важное значение имеют гистоны, которые представляют собой полипептидные цепи длиной от 50 до 200 аминокислотных остатков. Положительный заряд ги-стонов обусловлен высоким содержанием в них трех основных аминокислот аргинина, лизина и гистидина, в боковых цепях которых имеется вторая аминогруппа (фиг. 15) па их долю приходится почти 25% всех аминокислот гистонов. Интересно сравнить высокое содержание основных аминокислот в гистонах с данными об аминокислотном составе различных белков, представленными в табл. 2, из которых видно, что основные аминокислоты составляют лишь от 8 до 12% всех аминокислотных остатков таких белков, как р-галактозидаза, А-полипептид триптофан-синтазы Е. oli и бычий инсулин. Взаимодействие между ДНК и гистонами в хромосоме происходит, вероятно, благодаря образованию ионных связей между фосфатными группами полинуклеотидной цепи и боковыми аминогруппами полипептидной цепи. На долю ДНК и гистонов приходится около 3 всей массы большинства хромосом остальную часть обычно относят на счет негистонных белков и РНК. [c.498]

Сэнгер (Sanger) завершил анализ аминокислотной последовательности бычьего инсулина. Это первый белок, у которого [c.218]

Добавки, вносимые в среду. Если партия сыворотки не отвечает оптимальным требованиям, то может оказаться полезным добавление в среду смеси растворимых компонентов. Приготовьте среду DMEM, как обычно, добавив в нее гентамицин и L-глутамин, а затем добавьте бычий инсулин (0,2 ед/мл), пиру-ват (0,45 мМ) и оксалоацетат (1 мМ). [c.194]

Принципиальная схема определения связанных между собой остатков полуцистина остается неизменной с того времени, когда она была впервые разработана Райли при исследовании бычьего инсулина [36]. Эта методика включает следующие этапы [c.166]

Добавляют 25 мг инсулина (бычий инсулин, Sigma, США, номер по каталогу 1-5500). [c.191]

Модификация является необходимым этапом при получении многих ферментов, гормонов и препаратов медицинского назначения. Соединения животного или растительного, а также микробного происховдения зачастую необходимо изменять таким образом, чтобы придать им требуемые для тех или иных целей качества. Например, у бычьего инсулина удаляются аминокислотные остатки, после чего он становится идентичным человеческому гормону. [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология